The invention discloses a silk fibroin gelatin double crosslinking hydrogel and a preparation method thereof. The method comprises the following steps: (1) preparing gelatin grafted gelatin; (2) preparing silk fibroin solution; (3) preparation of thermo reversible silk fibroin / tyramine modified gelatin hydrogel; (4) preparation of silk fibroin gelatin double crosslinked hydrogel. The method of the invention is simple in process, and the prepared double-crosslinking silk fibroin gelatin composite hydrogel has stronger mechanical properties than the single gelatin or silk fibroin hydrogel, has both advantages, makes up for the defects of the single gelatin or silk fibroin hydrogel, forms the hydrogel with excellent biocompatibility and mechanical properties, and has the advantages in the field of tissue engineering vascularization. Wide application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种丝素蛋白-明胶双交联水凝胶及其制备方法
本专利技术涉及生物医用材料
,特别涉及一种丝素蛋白-明胶双交联水凝胶及其制备方法。
技术介绍
水凝胶是一种类含水量较高的软材料,由亲水性聚合物与水结合形成的三维网络构成,与人体软组织的组分、结构极为相似,已经作为组织工程修复材料被广泛研究,其应用领域包括药物缓释、软骨、血管、肌肉以及神经等软组织修复。但目前用于组织修复的凝胶产品仍面临许多问题,包括力学强度较差、生物相容性、体内降解速率与新生组织再生速率不匹配等。明胶是由胶原蛋白降解获得的一种亲水性天然高分子材料,其分子链上具有可供细胞粘附的RGD片段,并且其水溶液具有低温成胶,高温溶胶的温敏特性。通过利用明胶分子链上的氨基或羧基官能团进行接枝改性,可以赋予明胶多种交联机理,从而避免明胶水凝胶在体内应用时发生溶胶。通过活化明胶分子链上的羧基,使其与酪胺上的氨基进行酰胺化反应,可以获得接枝酪胺根的改性明胶。在辣根过氧化物酶与双氧水的协同作用下,改性明胶中酪胺根中的苯酚基团之间可以发生共价交联,并迅速成胶(Biomaterials,30(2009)3371–3377)。但单纯的明胶水凝胶普遍存在力学性能差、体内降解时间短等问题。丝素蛋白是从蚕丝中提取出来的天然高分子,其分子链可以自发或在外界条件促进下向β-sheet结晶构象转变,形成物理交联水凝胶。通过调控β-sheet构象转变可以获得兼具优异的力学性能和可控降解性能的水凝胶;同时,丝素蛋白分子链上含有5%的酪氨酸残基,其上的苯酚基团也可以在辣根过氧化物酶与双氧水的协同作用下发生共价交联成胶。但是目前丝素蛋白分 ...
【技术保护点】
1.一种丝素蛋白‑明胶双交联水凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备酪胺根接枝改性的明胶将明胶溶于2‑吗啉乙磺酸生物缓冲剂中,利用羧基活化剂活化明胶分子链上的羧基,加入酪胺盐酸盐进行反应,反应结束后经透析、冻干,获得酪胺根接枝改性的明胶;(2)制备丝素蛋白溶液将脱胶蚕丝浸泡在于溴化锂溶液中,充分溶解,溶解完全后经去离子水透析,获得丝素蛋白溶液;(3)热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶的制备将步骤(1)的酪胺根接枝改性的明胶溶解于步骤(2)得到的丝素蛋白溶液中,加入辣根过氧化物酶,混合均匀形成混合溶液,接着将混合溶液后倒入模具中,凝胶化,获得热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶;(4)丝素蛋白‑明胶双交联水凝胶的制备将步骤(3)得到的热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶浸泡在低浓度双氧水中,引发丝素蛋白和明胶分子间的酶催化共价交联,酶交联完成后浸泡于醇溶液中,促进丝素蛋白构象转变形成物理交联,再用去离子水浸泡洗涤,获得丝素蛋白‑明胶双交联水凝胶。
【技术特征摘要】
1.一种丝素蛋白-明胶双交联水凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备酪胺根接枝改性的明胶将明胶溶于2-吗啉乙磺酸生物缓冲剂中,利用羧基活化剂活化明胶分子链上的羧基,加入酪胺盐酸盐进行反应,反应结束后经透析、冻干,获得酪胺根接枝改性的明胶;(2)制备丝素蛋白溶液将脱胶蚕丝浸泡在于溴化锂溶液中,充分溶解,溶解完全后经去离子水透析,获得丝素蛋白溶液;(3)热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶的制备将步骤(1)的酪胺根接枝改性的明胶溶解于步骤(2)得到的丝素蛋白溶液中,加入辣根过氧化物酶,混合均匀形成混合溶液,接着将混合溶液后倒入模具中,凝胶化,获得热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶;(4)丝素蛋白-明胶双交联水凝胶的制备将步骤(3)得到的热可逆丝素蛋白/酪胺改性明胶水凝胶浸泡在低浓度双氧水中,引发丝素蛋白和明胶分子间的酶催化共价交联,酶交联完成后浸泡于醇溶液中,促进丝素蛋白构象转变形成物理交联,再用去离子水浸泡洗涤,获得丝素蛋白-明胶双交联水凝胶。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述羧基活化剂为N-羟基琥珀酰亚胺与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的混合物,其中,N-羟基琥珀酰亚胺与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为2:1;所述明胶和酪胺盐酸盐的质量比为2:1;所述反应是在室温反应12h。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述溴化锂溶液的浓度为9.3M;所述溶解是在60℃溶解4h...
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