一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法，属于化学发光体外诊断技术领域。本发明专利技术的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。本发明专利技术还提供定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法。本发明专利技术解决了现有血管紧张素II检测试剂盒测试耗时长，重复性差，稳定性差，灵敏度差，准确度差等问题。与现有技术相比，本发明专利技术的优点是测试速度快，测试结果重复性好，试剂性能稳定，灵敏度高，测试结果准确等。

A magnetic particle chemiluminescence kit for quantitative determination of angiotensin II content and its preparation method

The invention relates to a magnetic particle chemiluminescence kit for quantitative detection of angiotensin II content and a preparation method thereof, belonging to the field of chemiluminescence in vitro diagnosis technology. The magnetic particle chemiluminescence kit for quantitative detection of angiotensin II content includes streptavidin magnetic particles, biotin-labeled angiotensin II analogues and chemiluminescent substance-labeled angiotensin II monoclonal antibodies. The invention also provides a preparation method of a magnetic particle chemiluminescence kit for quantitative detection of angiotensin II content. The invention solves the problems of long test time, poor repeatability, poor stability, poor sensitivity and accuracy of the existing angiotensin II detection kit. Compared with the prior art, the advantages of the present invention are fast test speed, good repeatability of test results, stable reagent performance, high sensitivity, accurate test results, etc.

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法
本专利技术属于化学发光体外诊断
，具体涉及一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法。
技术介绍
血管紧张素是一类具有极强的缩血管和刺激肾上腺皮质分泌醛固酮等作用的肽类物质，参与血压及体液的调节。可分为血管紧张素Ⅰ-Ⅶ。因失血引起循环血量减少或肾疾病导致肾血流量减少等，可促进肾小球旁器的球旁细胞分泌肾素(一种酸性蛋白酶)，进入血液后，使血中由肝生成的血管紧张素原(属α球蛋白)水解为血管紧张素Ⅰ(10肽)，它随血液流经肺循环时，受肺所含的转化酶作用，被水解为8肽的血管紧张素Ⅱ，部分血管紧张素Ⅱ受血浆和组织液中血管紧张素酶A的作用，被水解为7肽的血管紧张素Ⅲ。肾素是肾小球旁器的近球细胞分泌的一种蛋白水解酶。当动脉血压降低，循环血量减少，交感神经兴奋时，分泌增加。肾素在血液内存活约1小时，这期间催化血浆中的血管紧张素原(由肝脏合成后进入血浆)不断生成血管紧张素Ⅰ(10肽)，血管紧张素Ⅰ可刺激肾上腺髓质释放肾上腺素和具有较弱的缩血管作用。血管紧张素Ⅰ形成几秒钟之内，被血液和肺组织中的血管紧张素转换酶降解，生成血管紧张素Ⅱ(8肽)，在血液内存活约1分钟，就被氨基肽酶水解为血管紧张素Ⅲ(7肽)。后者促进醛固酮分泌，并对肾血管有收缩作用，它随即被血液和组织内的血管紧张素酶所灭活。血管紧张素Ⅱ、Ⅲ的生物活性较强，而血中血管紧张素Ⅲ的浓度较低。故以血管紧张素Ⅱ的活性最强，使微动脉收缩，外周阻力升高；使静脉收缩，回心血量增多，心室充盈压增高，有利心脏射血；它刺激肾上腺皮质球状带分泌醛固酮，后者又可促进远曲小管和集合管对钠和水的重吸收，增加细胞外液量，从而恢复循环血量；这两方面的作用使血压回升，在严重失血时，它使动脉压至少回升到正常的半程。它还直接作用于脑，增强交感缩血管紧张活动；引起渴觉和饮水行为；并能刺激抗利尿激素和促肾上腺皮质激素的分泌。肾素-血管紧张素约需20分钟才能发挥完全作用，但持续时间较长。血浆中经常存在血管紧张素原和转换酶等，肾素的释放是决定血浆中血管紧张素浓度的关键性条件。肾素、血管紧张素、醛固酮三者是一个相连的作用系统，称为肾素-血管紧张素系统或肾素-血管紧张素-醛固酮系统。目前市场上血管紧张素II检测试剂盒普遍为酶联免疫吸附测定试剂盒，包括：酶标板，酶标板包括固相载体和包被层，所述的固相载体上设置多个微孔，包被层附着在固相载体的微孔表面，包被层是由抗血管紧张素II抗体和牛血清白蛋白依次涂布在固相载体的微孔表面形成的复合层，通常采用TMB为显色底物。反应过程中，待测物与生物素化的血管紧张素II竞争与血管紧张素II抗体结合在酶标板上，再通过亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)放大信息，以3，3'，5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液，完成检测。这种方法的缺点是：(1)以酶标板作为固相载体时，由于载体表面的检测物与样品中的待测物无法充分接触，导致反应效率较低，反应时间较长，通常在60min以上，有些甚至达到3小时以上。(2)由于酶的生物活性会随着环境条件(温度、pH等)发生变化，导致同样数量的酶在不同条件下产生的光量有明显的区别，无法得到稳定的结果。
技术实现思路
本专利技术要解决现有技术中的技术问题，提供一种高效率、高稳定性的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案具体如下：一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。在上述技术方案中，所述链霉亲和素磁微粒浓度＞0.03％，所述生物素标记的血管紧张素II类似物浓度≥0.1μg/mL，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体浓度≥0.05μg/mL。在上述技术方案中，所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。在上述技术方案中，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中的化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物。在上述技术方案中，所述生物素标记的血管紧张素II类似物中的生物素与血管紧张素II类似物的摩尔比为1：1-10：1。在上述技术方案中，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中化学发光物质与血管紧张素II单克隆抗体的摩尔比为1：1-10：1。在上述技术方案中，还包括：血管紧张素II校准品和血管紧张素II质控品。在上述技术方案中，所述血管紧张素II校准品浓度为2-30pg/mL，体积为1mL。在上述技术方案中，所述血管紧张素II质控品浓度为2-30pg/mL，体积为1mL。一种上述所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤1、链霉亲和素磁微粒制备取链霉亲和素磁颗粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，重复清洗3次后，用磁珠稀释缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液；步骤2、生物素标记的血管紧张素II类似物的制备：取血管紧张素II类似物，用超滤离心管进行超滤离心，将缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入生物素原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到生物素标记的血管紧张素II类似物；步骤3、化学发光物质标记的血管紧张素II抗体的制备：取血管紧张素II单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入吖啶酯原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到化学发光物质标记的血管紧张素II抗体；步骤4、分装步骤1-3制备的试剂，组装成所述试剂盒。本专利技术的有益效果是：本专利技术解决了现有血管紧张素II检测试剂盒测试耗时长，重复性差，稳定性差，灵敏度差，准确度差等问题。与现有技术相比，本专利技术的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的优点是测试速度快，测试结果重复性好，试剂性能稳定，灵敏度高，测试结果准确等。具体的说：1、本专利技术提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成血管紧张素II的检测。经过实验，本专利技术的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒检测灵敏度＜2pg/mL，检测精度较高。2、本专利技术提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用化学发光法检测血管紧张素II，检测速度快，重复性好。3、本专利技术提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用生物素-亲和素体系，避免了类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集，解决了稳定性的问题。生物素-亲和素体系是通过链霉亲和素-生物素之间特异性相互作用，将生物素标记的类似物连接到磁微粒上。这一结合过程是在检测样本时发生的，试剂盒在使用之前，链霉亲和素包被的磁珠和生物素标记的类似物是分开存放的，因此可以避免类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集。4、本专利技术提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒采用吖啶酯直接发光，提高了灵敏度。5、本专利技术提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用的校准品和质控本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒浓度＞0.03％，所述生物素标记的血管紧张素II类似物浓度≥0.1μg/mL，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体浓度≥0.05μg/mL。3.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。4.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中的化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物。5.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的血管紧张素II类似物中的生物素与血管紧张素II类似物的摩尔比为1：1-10：1。6.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中化学发光物质与血管紧张素II单克隆抗体的摩尔比为1：1-10：1。7.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，还包括：血管紧张素II校准品和血管紧张素II质...

【专利技术属性】
技术研发人员：高阳，唐仁陶，崔秀云，胡雪凇，孙成艳，高威，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22