The invention provides a method for identifying biomarkers after kidney transplantation and a detection kit. The biomarker is the ratio of free mannose and glucose to mannose concentration obtained by high performance liquid chromatography (HPLC) derived from pre-column 1 phenyl 5 methyl pyrazolone (PMP) in serum. The detection method of the invention is a high performance liquid chromatography method derived from pre-column PMP. The technical scheme of the present invention has the advantages of simple pretreatment, short analysis time, reasonable instrument price, conforming to conventional use, simple operation steps, high accuracy of detection results, only blood collection, little serum requirement and less than 1 mL blood collection. The results show that this method can quantify the serum free mannose and glucose rapidly after renal transplantation. It is very important to study the relationship between serum free mannose and glucose and renal transplantation, and to find new markers for monitoring clinical prognosis after renal transplantation.
【技术实现步骤摘要】
一种鉴定肾移植预后生物标记物的方法及其检测试剂盒
本专利技术属于医药
,具体涉及一种鉴定肾移植术后的预后生物标记物的方法及其检测试剂盒。
技术介绍
肾脏是泌尿系统一个重要的器官,主要功能是生成和排泄尿液,并以此排泄人体代谢废物,对维持机体内环境的稳定起重要作用;另外,肾脏也是一个内分泌器官,主要调节血压、红细胞生成和骨骼生长等。因此,肾脏产生疾病对人体的机能产生很大影响。肾移植的存活率受慢性移植恶化的影响,而慢性移植恶化的起因在肾移植的早期阶段很难检测,但是,早期干预治疗是提高肾移植存活率的最有效的时期。目前,通过肾活检监测移植物临床特征和形态仍然是检测肾衰竭的基础,但是这种方法创伤较大。到目前为止,尽管有很多针对肾移植失败的预测的研究,也已经确定了几个候选的监测肾移植后慢性抗宿主疾病生物标志物,但是还没有鉴定的建立有广泛的临床功能或能够取代肾活检的有效的候选生物标志物。从微创获得的血清样本得到的预测生物标志物可以改善肾移植排斥或衰竭过程的早期诊断,有助于识别肾移植后排斥反应风险特别高的患者,从而帮助量身定制治疗方案和进行定期随访检查。人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高,正常人的范围为3.90~6.16mmol/L。目前,医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度,暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20~80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1%。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明,细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘 ...
【技术保护点】
1.用于鉴定肾移植术后的预后生物标记物,其特征在于:所述预后生物标记物为血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖及葡萄糖与甘露糖浓度的比值(G/M浓度比)。
【技术特征摘要】
1.用于鉴定肾移植术后的预后生物标记物,其特征在于:所述预后生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖及葡萄糖与甘露糖浓度的比值(G/M浓度比)。2.根据权利要求1所述的用于鉴定肾移植术后的预后生物标记物的定量分析方法,其特征在于;该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法,包括以下具体步骤:(1)调节pH为7-14:取待检测的血清样品加超纯水于EP管中,加入氢氧化钠,涡旋混匀;(2)PMP衍生:每个样品加入PMP,涡旋混匀,离心后置于烘箱反应;(3)加酸中和反应:将烘箱内的样品取出,放置冷却,每个样品加入盐酸,涡旋混匀;(4)萃取:每管加入有机溶剂,涡旋,离心,移除下层有机溶剂,保留上清;(5)将样品离心,取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中,盖紧盖子,离心,待用于高效液相分析;(6)绘制甘露糖和葡萄糖的标准曲线;(7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)的标准曲线比对并分析计算,确定甘露糖、葡萄糖的浓度以及G/M浓度比。3.根据权利要求2所述的用于鉴定肾移植术后的预后生物标记物的定量分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱为Agilent1260高效液相系统,AgilentPoroshellEC-C18色谱柱(4.6mm×100mm,2.7μm),所述步骤(5)中的色谱条件为:检测波长:254nm,带宽4nm;参比波长:350nm,带宽100nm;柱温:37℃;流速:1mL/min;进样体积:20μL;流动相:A相为乙腈,B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸缓冲溶液。4.根据权利要求3所述的用于鉴定肾移植术后的预后生物标记物...
【专利技术属性】
技术研发人员:张丽娟,何燕利,徐岩,
申请(专利权)人:青岛大学附属医院,
类型:发明
国别省市:山东,37
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