一种纳豆激酶干燥保护剂制造技术

本发明专利技术公开了一种纳豆激酶干燥保护剂，它包括：海藻糖；还包括麦芽糊精；海藻糖和麦芽糊精的质量比为2:1~4；制备方法，它包括：按海藻糖、麦芽糊精质量比为2:1~4分别称取海藻糖与麦芽糊精，加入蒸馏水中，搅拌，获得纳豆激酶干燥保护剂；一种纳豆激酶干燥方法，它包括：将纳豆激酶粗酶液与一种纳豆激酶干燥保护剂按体积比1:2~5混合，均质，喷雾干燥，收集纳豆激酶酶粉；生产的纳豆激酶酶活平均值为(210200±19126)FU/g；本发明专利技术优点在于：1）利用豆渣为基质生产纳豆激酶，提高豆渣附加值，其酶活性与大豆基质的纳豆激酶产量媲美；2）降低了干燥过程酶活性损失，提高纳豆激酶稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种纳豆激酶干燥保护剂
本专利技术属于食品加工领域，具体涉及一种纳豆激酶干燥保护剂。
技术介绍
1987年，日本Sumi博士于纳豆中发现了一种能有效溶解心脏和大脑中血栓的酶—纳豆激酶（Nattokinase，NK），从此开始了对NK的应用与研究。纳豆激酶由食品纳豆中提取或纳豆菌发酵生产，是一种分子量远远小于UK、SK、tPA的蛋白质，是由纳豆在发酵过程中产生的丝氨酸蛋白酶，可将纤维蛋白水解成小肽和氨基酸，并具有良好的溶栓能力，且在降血压，预防心脑血管疾病等方面也具有一定疗效。目前医学上批准应用的溶栓药物有：链激酶（Streptokinase，SK）和尿激酶（Urkinase，UK）等，但它们均在一定程度上有某种缺陷，如药效时间短、易出血等。与现有的溶栓类药物相比，纳豆激酶源自传统食品，不仅价格低廉，安全性高，且纳豆激酶体内半衰期长，可被肠道吸收，不易引起出血，在体内作用迅速、持续时间长，还能激活体内的tPA，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性，因此受到了生物医学和食品界的广泛关注。近年来，国内市场上纳豆激酶胶囊种类繁多，但纳豆激酶的溶纤度和活性却相对较低。如何提高纳豆激酶经干燥过程后的活性和稳定性，从而扩大其商业和临床方面的应用是目前该酶的研究热点。我国是大豆的故乡，豆制品行业每年约产生数千万吨湿豆渣，如此大的产量却只能用作动物饲料甚至被丢弃浪费十分可惜，究其原因是由于豆渣的热能低、口感差，对其综合利用是增加其附加值和减少环境污染的重要途径，因此，近年来，豆渣的综合利用已成为各国研究工作者关注的问题之一。豆渣中含有丰富的纤维素、蛋白质、脂肪、维生素和微量元素，且豆渣中所含热量很少，其中纤维素的含量占据了干物质的一半，是极好的膳食纤维原料。若以豆渣为原料生产富含纳豆激酶的产品，是提高豆渣品质和附加值的非常可行的途径。我们的前期研究表明，豆渣为基质生产纳豆激酶，其酶活性与大豆基质的纳豆激酶产量媲美，但是并没有研究其干燥工艺及酶活稳定性。目前报道的纳豆激酶干燥方法一般为真空冷冻干燥法和喷雾干燥法，但是干燥过程酶活性损失严重。因此开发一种能够降低纳豆激酶在干燥过程酶活性损失的保护剂具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种能够降低纳豆激酶在干燥过程酶活性损失的纳豆激酶干燥保护剂。一种纳豆激酶干燥保护剂，它包括：海藻糖；所述的一种纳豆激酶干燥保护剂，还包括麦芽糊精；所述的海藻糖和麦芽糊精的质量比为2:1~4；所述的海藻糖和麦芽糊精的质量比为2:1。一种纳豆激酶干燥保护剂的制备方法，它包括：按海藻糖、麦芽糊精质量比为2:1~4分别称取海藻糖与麦芽糊精，加入蒸馏水，搅拌，获得纳豆激酶干燥保护剂。一种纳豆激酶干燥方法，它包括：将纳豆激酶粗酶液与所述的一种纳豆激酶干燥保护剂按体积比1:2~5混合，均质，喷雾干燥，收集纳豆激酶酶粉；所述的纳豆激酶粗酶液，是由下述方法制备的：1）发酵剂的制备：纳豆芽孢杆菌粉，用无菌水溶解，稀释，接入到含1~3%琼脂的LB培养基上培养15~20h，挑取单菌落接入LB液体培养基中，活化，按2~4%接种量接于LB液体培养基，35~38℃培养10~15h；冷冻离心，将离心后的菌体洗涤，重悬，使菌悬液浓度调整至107CFU/mL，获得发酵剂；2）豆渣的发酵：大豆用水浸泡12~16h，沥水，按质量比1:5~10加水，磨浆，过滤，得到新鲜豆渣，调整豆渣的水分含量80~90%，高温灭菌，冷却，按6~10%的接种量接种至步骤1）的发酵剂中，35~40℃恒温发酵22~26h，0~4℃后熟20~30h；3）纳豆激酶粗酶液的制备：步骤2）后熟的豆渣，按重量比1：3~7加生理盐水，0~4℃浸提4~8h，以3000~4000r/min离心10min，收集上清液，用0.22~0.45µm的微孔滤膜除菌，得到纳豆激酶粗酶液；所述的均质为9000~12000r/min均质1~3分钟；所述的喷雾干燥条件为进口温度140~160℃，出口温度70~80℃，蠕动泵转速为240~440mL/h。本专利技术提供了一种纳豆激酶干燥保护剂，它包括：海藻糖；还包括麦芽糊精；海藻糖和麦芽糊精的质量比为2:1~4；制备方法，它包括：按海藻糖、麦芽糊精质量比为2:1~4分别称取海藻糖与麦芽糊精，加入蒸馏水中，搅拌，获得纳豆激酶干燥保护剂；一种纳豆激酶干燥方法，它包括：将纳豆激酶粗酶液与一种纳豆激酶干燥保护剂按体积比1:2~5混合，均质，喷雾干燥，收集纳豆激酶酶粉；生产的纳豆激酶酶活平均值为(210200±19126)FU/g；本专利技术优点在于：1）利用豆渣为基质生产纳豆激酶，提高豆渣附加值，其酶活性与大豆基质的纳豆激酶产量媲美；2）降低了干燥过程酶活性损失，提高纳豆激酶稳定性。附图说明图1纳豆芽孢杆菌显微镜形态；图2不同喷雾干燥条件下纳豆激酶的活性；（a）进口温度对酶活的影响，（b）蠕动泵转速对酶活的影响，（c）保护剂类型对酶活的影响；图3不同保护剂下冷冻干燥后纳豆激酶稳定性的比较结果；（a）海藻糖保护剂，（b）麦芽糊精保护剂，（c）乳清蛋白粉保护剂，（d）混合保护剂Ⅰ，（e）混合保护剂Ⅱ；图4不同保护剂下喷雾干燥后纳豆激酶稳定性的比较结果；（a）海藻糖保护剂，（b）麦芽糊精保护剂，（c）乳清蛋白粉保护剂，（d）混合保护剂Ⅰ，（e）混合保护剂Ⅱ。具体实施方式实施例1纳豆激酶粗酶液的制备1、菌种的活化与菌悬液的制备购买纳豆芽孢杆菌粉，用无菌水溶解，稀释成10-3至10-6不同梯度平板划线于含有2%琼脂的LB培养基上培养18h进行镜检如图1，然后挑取单菌落接入LB液体培养基中，活化三代，然后按3%接种量接于LB液体培养基中120rpm，37℃培养12h；菌液在高速冷冻离心机中，4℃、8000r/min离心10min；将离心后的菌体用无菌水洗涤两次，重悬，使菌悬液浓度调整至107CFU/mL，作为发酵剂。2、鲜豆渣的发酵将大豆在室温下用蒸馏水浸泡14h后进行磨浆（大豆：水=1：9（w/w））,用100目滤布过滤，得到新鲜豆渣，调整豆渣的水分含量约为85%，于121℃灭菌20min。冷却后按8%(v/w)的接种量接种107CFU/mL的纳豆芽孢杆菌发酵剂。将接种纳豆芽孢杆菌的豆渣于38℃恒温培养箱中前期发酵24h后，放置于4℃冰箱中后熟24h。3、纳豆激酶粗酶液的制备后熟后的豆渣中按重量比1：5(W/W)加入无菌生理盐水，4℃浸提6h，以3800r/min离心10min，收集上清液；将上清液依次用0.45µm和0.22µm的微孔滤膜除菌，得到纳豆激酶粗酶液，放置于4℃冰箱中冷藏备用。实施例2纳豆激酶干燥保护剂的制备分别制备海藻糖保护剂、混合保护剂Ⅰ、混合保护剂Ⅱ、麦芽糊精保护剂、乳清蛋白粉保护剂，用于后续实验，制备方法具体如下：1、海藻糖保护剂：称取海藻糖18g，加入100mL蒸馏水中搅拌均匀至无颗粒存在；2、混合保护剂Ⅰ：分别称取麦芽糊精6g、海藻糖12g，加入100mL蒸馏水中搅拌均匀至无颗粒存在；3、混合保护剂Ⅱ：分别称取麦芽糊精6g、β-环状糊精2g、乳清蛋白粉10g加入100mL蒸馏水中搅拌均匀至无颗粒存在；4、麦芽糊精保护剂：称取麦芽糊精18g，加入100mL蒸馏水中搅拌均匀至无颗粒存在；5、乳清蛋白粉保护剂：称取乳清蛋白粉18g，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纳豆激酶干燥保护剂，其特征在于：海藻糖和麦芽糊精按质量比2:1~4混合，制成水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种纳豆激酶干燥保护剂，其特征在于：海藻糖和麦芽糊精按质量比2:1~4混合，制成水溶液。2.根据权利要求1所述的一种纳豆激酶干燥保护剂，其特征在于：所述的海藻糖和麦芽糊精的质量比为2:1。3.根据权利要求1、2所述的一种纳豆激酶干燥保护剂，其特征在于：所述的水溶液中海藻糖和麦芽糊精重量之和为水溶液的10-20%。4.一种纳豆激酶制备方法，它包括：将纳豆激酶粗酶液与所述的一种纳豆激酶干燥保护剂按体积比1:2~5混合，均质，喷雾干燥，收集纳豆激酶酶粉。5.根据权利要求4所述的一种纳豆激酶制备方法，其特征在于：所述的纳豆激酶粗酶液，是由下述方法制备的：1）发酵剂的制备：纳豆芽孢杆菌粉，用无菌水溶解，稀释，接入到含1~3%琼脂的LB培养基上培养15~20h，挑取单菌落接入LB液体培养基中，活化，按2~4%接种量接于LB液体培养基，35~38℃培养10~15h；冷冻离心，将离心后的菌体洗涤，重悬，使...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴春红，于洪良，程璐，张媛媛，王海，王玉华，刘俊梅，于寒松，代伟长，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22