【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微生物，具体涉及一种表达猪轮状病毒抗原的重组植物乳杆菌及其应用。
技术介绍
1、在整个说明书中对现有技术的任何讨论都不应被视为承认这些现有技术是广为人知的，或构成本领域公知常识的一部分。
2、轮状病毒(rotavirus,rv)是一种双链核糖核酸病毒。在电镜显微镜下，轮状病毒呈光滑车轮状，病毒体呈圆球型，病毒直径为60-80nm，有双层衣壳，每层衣壳呈二十面体对称，核心为双股rna，由11个不连续的节段组成。共编码(vp1-vp4)、vp6和vp7共6个结构蛋白。研究表明，部分轮状病毒的晶体结构是由三层同心衣壳蛋白构成的20个面体。包裹基因组的最内层衣壳由vp2及少量的vp1和vp3组成，属于rv的核心蛋白。病毒蛋白含量最丰富的vp6构成中间层衣壳，vp7和vp4构成外层衣壳。并且根据外衣壳蛋白序列差异，把vp7和vp4分别划分为g基因型和p基因型。迄今为止，已经从人类和多种动物物种中鉴定出了36种g类型和51种p类型。同时对各蛋白功能也有了初步了解。如vp1对于病毒复制环节作用深远。vp3蛋白对于病毒的rna复制环节影响极大，在病毒与宿主细胞相互作用过程中具有关键的作用。vp4、vp7与病毒感染性有关，vp6具有双层结构，使内层核壳vp2与外层vp4和vp7充分接触形成三聚体，位于病毒的中间层，对病毒具有保护功能，表面存在mrna，是转录所必需的，具有遗传变异性，因此是物种的决定因素。
3、轮状病毒共包括(nsp1-nsp3)、(nsp4-nsp6)共6个非结构蛋白，其中nsp1分子量约为6.
技术实现思路
1、因此，本申请的目的是提供一种表达猪轮状病毒抗原的重组植物乳杆菌及其应用。所述重组植物乳杆菌中含有nsp4基因或vp6基因，所述nsp4基因的核苷酸序列如seq idno:1中所示，所述vp6基因的核苷酸序列如seq id no:2中所示。所述重组植物乳杆菌能够有效抑制猪轮状病毒的复制，预防和/或改善猪轮状病毒导致的腹泻，改善免疫和减轻炎症。
2、具体地，本专利技术提供了下述的技术方案。
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种重组植物乳杆菌，其整合有nsp4基因或vp6基因，其中，所述nsp4基因的核苷酸序列如seq id no:1中所示，所述vp6基因的核苷酸序列如seq id no:2中所示。
4、本专利技术所述所述重组植物乳杆菌可表达产生vp6蛋白或nsp4蛋白，其氨基酸序列分别如seq id no:3和seq id no:4中所示。
5、nsp4蛋白是轮状病毒的非结构蛋白之一，是一种多功能糖蛋白，由第10基因编码。nsp4蛋白在轮状病毒的复制、形态发生和致病性中发挥重要作用，被认为是世界上第一个病毒性肠毒素。作为一种肠毒素和分泌受体，对于病毒的致病性有很重要的联系。nsp4可以参与早期的rv感染，通过各种形态来影响细胞内的ca2+释放，并导致机体出现脱水情况，引起腹泻。诸多研究证实其不仅在制病机制中很重要，而且在猪轮状病毒复制环节发挥极大作用。nsp4的变异也可导致病毒的毒力。
6、vp6蛋白是轮状病毒的结构蛋白之一，由第6基因编码。vp6蛋白构成了轮状病毒的中间层衣壳，是最丰富和最稳定的蛋白，占病毒总蛋白质的50％以上，是病毒的核心蛋白质，决定轮状病毒的群特异性。vp6蛋白是轮状病毒的主要免疫原，能够诱导产生群特异性抗体，用于区分不同的轮状病毒群，并且参与轮状病毒的复制和形态发生。vp6蛋白可以与内层和外层衣壳蛋白相互作用，形成稳定的三层结构，并影响内层衣壳蛋白的转录活性。vp6蛋白还可以与非结构蛋白nsp4/nsp5相互作用，为新的双层颗粒(dlp)在胞浆中的受体，促进dlps从内质网出芽。vp6蛋白参与轮状病毒的致病性，可以通过多种机制引起细胞凋亡、细胞周期停滞、细胞骨架改变、细胞信号转导干扰等，导致细胞功能障碍和组织损伤，并促进病毒增殖。
7、dcpep(dendritic cell-targeting peptide)是一种靶向树突状细胞(dendriticcells,dcs)的肽段。树突状细胞是免疫系统中的重要细胞，它们在抗原呈递和启动免疫应答中扮演着关键角色。dcpep通常与特定的抗原基因相连，形成重组dna或蛋白质，以制作目的基因或蛋白。这种结合有助于将抗原直接呈递给树突状细胞，从而激活免疫应答。
8、在本专利技术的实施方式中，专利技术人尝试将nsp4基因片段或vp6基因片段与dcpep基因串联时，出现了重组菌株生长速度缓慢、稳定性差和蛋白免疫原性降低的问题。这可能是由于dcpep基因片段的串联增加了基因构造的总长度和复杂性，导致表达载体的不稳定性和重组细菌的代谢负担加重。此外，这种串联可能干扰了nsp4或vp6蛋白的正确折叠，影响其表位的暴露，从而降低了其活性和效率。蛋白质折叠不当还可能导致蛋白被细胞降解系统识别并分解，进一步减少蛋白的表达量。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述nsp4基因或vp6基因中还可以含有启动子、终止子和酶切位点基因，所述酶切位点比如为xba i(tctaga)和hind iii(aagctt)。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述重组植物乳杆菌以丙氨酸消旋酶基因缺陷型植物乳杆菌nc8/δalr为原始出发菌株，所述重组植物乳杆菌为nc8-psip409-pgsa'-vp6或nc8-psip409-pgsa'-nsp4。
11、在本专利技术的一些实施方式中，专利技术人还尝试了其他宿主菌株，比如乳酸球菌等，结果发现重组植物乳杆菌具有更好的生长能力、表达能力和对环境压力具有更好的耐受性，比如耐受胃肠道的酸性环境和胆盐。
12、在本专利技术的第二方面，提供了一种组合物，其含上述第一方面中所述的重组植物乳杆菌。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述组合物含有重组植物乳杆菌nc8-psip409-pgsa'-vp6和nc8-psip409-pgsa'-nsp4中的至少一种。在一种较为优选的实施方式中，所述组合物含有重组植物乳杆菌nc8-psip409-pgsa'-vp6和nc8-psip409-pgsa'-nsp4两者。
14、在本专利技术的第三方面，提供了本专利技术上述第一方面中所述的重组植物乳杆菌或上述第二方面中所述的组合物在制备抗猪轮状病毒的产品中的应用。
15、在本专利技术的第四方面，提供了本专利技术上述第一方面中所述的重组植物乳杆菌或上述第二方面中所述的组合物在制备预防和/或改善猪轮状病毒性腹泻的产品中的应用。
16、在本专利技术的第五方面，提供本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株重组植物乳杆菌，其特征在于，其含有NSP4基因或VP6基因，所述NSP4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1中所示，所述VP6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2中所示。
2.根据权利要求1中所述的重组植物乳杆菌，其特征在于，所述NSP4基因或VP6基因中还可以含有启动子、终止子和酶切位点基因；
3.根据权利要求1所述的重组植物乳杆菌，其特征在于，所述重组植物乳杆菌以丙氨酸消旋酶基因缺陷型植物乳杆菌NC8/Δalr为原始出发菌株，所述重组植物乳杆菌为NC8-pSIP409-pgsA'-VP6或NC8-pSIP409-pgsA'-NSP4；
4.一种组合物，其含有权利要求1至3中任一项所述的重组植物乳杆菌。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物含有重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA'-VP6和/或NC8-pSIP409-pgsA'-NSP4。
6.权利要求1至3中任一项所述的重组植物乳杆菌或权利要求4或5中所述的组合物在制备抗猪轮状病毒的产品中的应用。
7.权利要求
8.权利要求1至3中任一项所述的重组植物乳杆菌或权利要求4或5中所述的组合物在制备减轻炎症和/或增强机体免疫力的产品中的应用。
9.权利要求1至3中任一项所述的重组植物乳杆菌或权利要求4或5中所述的组合物在制备具有下述至少一种功能的产品中的应用：
10.根据权利要求6至9中任一项所述的产品，其特征在于，所述产品包括药品、饲料、微生态制剂和科研试剂。
...【技术特征摘要】
1.一株重组植物乳杆菌，其特征在于，其含有nsp4基因或vp6基因，所述nsp4基因的核苷酸序列如seq id no:1中所示，所述vp6基因的核苷酸序列如seq id no:2中所示。
2.根据权利要求1中所述的重组植物乳杆菌，其特征在于，所述nsp4基因或vp6基因中还可以含有启动子、终止子和酶切位点基因；
3.根据权利要求1所述的重组植物乳杆菌，其特征在于，所述重组植物乳杆菌以丙氨酸消旋酶基因缺陷型植物乳杆菌nc8/δalr为原始出发菌株，所述重组植物乳杆菌为nc8-psip409-pgsa'-vp6或nc8-psip409-pgsa'-nsp4；
4.一种组合物，其含有权利要求1至3中任一项所述的重组植物乳杆菌。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物含有重组植物乳杆菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：王春凤，石春卫，牛天明，王秀全，杨桂连，杨文涛，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：
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