地果组织培养及再生体系建立制造技术

本发明专利技术涉及地果组织培养繁殖方法。包括以下步骤：(1)外植体的消毒；(2)带芽茎段诱导增殖培养；(3)愈伤组织分化培养；(4)组培苗生根培养(5)炼苗与移栽。本发明专利技术通过对地果的不同外植体诱导培养的方法进行了改进，解决了增殖系数低，分化率低，生根周期长等问题，通过本方法培养出的地果组培苗很大程度上提高了增殖系数、分化率和生根率，成活率可达90％。

【技术实现步骤摘要】
地果组织培养及再生体系建立
：本专利技术属于植物组织培养
，设计一种培养方法，更具体的涉及一种新型园林观赏植物—地果的组织培养方法。
技术介绍
：地果(FicustikouaBur.)，又名地枇杷、野地瓜、地石榴等。为桑科榕属常绿匍匐木质藤本。地果株形整齐，在园林植物配置中是一种优良的地被植物，适宜于公园或易遭游人践踏的场所绿化。地果耐半阴、耐贫瘠，高度适中，茎蔓纵横交错，是防风固沙的优良植物。还可以在城市园林景观建设中作为立体绿化材料，亦可作观果、观叶吊挂盆景。地果生产中通常采用扦插和压条繁殖，繁殖系数也较低，生长缓慢，难以满足市场要求。利用植物组织培养技术，不仅可以提高繁殖速度，还可保持植物优良的观赏特性。对于实现产业化开发具有重要的意义。
技术实现思路
：针对目前技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种可操作性强、重现性高且可以有效提高增殖系数、分化率和生根率的组织培养方法。本专利技术采用的地果组织培养方法，包含带芽茎段的腋芽诱导与增殖，茎段愈伤组织的诱导与分化，不定芽的生根与移栽，步骤如下：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽、带芽茎段和叶片。(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽、茎段和叶片接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.02mg·L-1，氯苯氧乙酸(2,4-D)0.5mg·L-1；三种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1。20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(6)生根培养过程中，将(5)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。与现有方法相比，本专利技术具有的有益效果在于：1.本专利技术通过改进外植体消毒程序，对诱导培养基、分化增殖培养基和生根培养基的配方改良，以提高繁殖效率，解决了地果组培中容易污染，分化困难，增殖倍数低，不宜成活的问题，通过本方法培养出的地果长势较好。2.本专利技术在生根培养基中加入活性炭，活性炭可以模拟暗环境从而促进植物生根，还可以防止植物材料褐化。解决了组培实验中经常出现的褐化现象，以及地果生根时间漫长的问题。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步阐述本专利技术，这些实施例仅具有范例性质，而不对于本专利技术的范围构成任何限制。本
的普通技术人员应理解，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本专利技术的保护范围。实施例1一种地果组织培养方法，包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽。(2)顶芽愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0。(3)芽的继代增殖培养，将(2)中的带愈伤的顶芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(4)生根培养过程中，将(3)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；(5)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。实施例2一种地果组织培养方法，包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌带芽茎段。(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中茎段接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0。(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1。20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(6)生根培养过程中，将(5)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。实施例3一种地果组织培养方法，包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.地果的组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽、带芽茎段和叶片。(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)0.4mg·L‑1，20‑25g·L‑1蔗糖，6‑7g·L‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽、茎段和叶片接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)0.5mg·L‑1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L‑1；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L‑1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)0.4mg·L‑1，苯基噻二唑(TDZ)0.02mg·L‑1，氯苯氧乙酸(2,4‑D)0.5mg·L‑1；三种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20‑25g·L‑1蔗糖，6‑7g·L‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)2.0mg·L‑1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L‑1。20‑25g·L‑1蔗糖，6‑7g·L‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)1.0mg·L‑1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L‑1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L‑1，20‑25g·L‑1蔗糖，6‑7g·L‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(6)生根培养过程中，将(5)中高2‑3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L‑1，碳粉1.0g·L‑1，20‑25g·L‑1蔗糖，并调节pH值为5.8‑6.0；(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。...

【技术特征摘要】
1.地果的组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽、带芽茎段和叶片。(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽、茎段和叶片接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.02mg·L-1，氯苯氧乙酸(2,4-D)0.5mg·L-1；三种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦妮，李芊夏，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23