狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法技术

本发明专利技术公开了一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：(1)取狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体，对外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体切块后，接种于不定芽诱导培养基，诱导培养；(3)将诱导培养得到的丛生芽切成含有芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养；(4)增殖培养后切下单芽，接种至生根培养基；(5)将切下的单芽在生根培养基培养后，放置于室外自然条件下，然后移出并洗净基部残留的培养基，杀菌后假植在苗床上。本发明专利技术以狭叶龙舌兰走茎苗为外植体，建立了其离体组培快繁方法。本发明专利技术的方法可获得大量狭叶龙舌兰离体再生植株，缩短了育苗周期，为满足园林绿化工程对其需求量提供了强有力的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法
本专利技术涉及植物组培领域，特别涉及一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法。
技术介绍
狭叶龙舌兰又称假菠萝麻，为龙舌兰科龙舌兰属多年生常绿大型草本植物。其一个生命周期长达10年以上，整个生命周期产叶量1000片以上，每年产叶90-100片。叶密生，短而多刺，叶片长50-70cm，纤维率约4％，束纤维拉力约80kg/g·30cm。由于其叶片数多，是杂交选育以叶纤维为生产目的的龙舌兰麻新品种的重要亲本。也可用于南方园林建设和城市绿化，以供观赏。因其叶缘叶尖有刺，也可种植取代篱笆和栅栏。此外，其叶片富含海柯皂甙元(hecogenin)和替告皂甙元(tigogenin)。狭叶龙舌兰叶片所含的总皂甙元中的替告皂甙元的含量占约60％，作为甾体原料在合成蛋白同化激素药物中具有广阔的应用前景。目前，狭叶龙舌兰主要以走茎苗和钻芯苗繁殖。尚未见有狭叶龙舌兰组织培养快繁的相关报道。狭叶龙舌兰主要通过无性繁殖的方式繁殖。由于其开花需10年以上，因此利用其开花之后的株芽进行无性繁殖所需周期太长。其走茎苗的数量也相对有限。采用除顶端优势获取钻芯苗方法的增殖系数也不高，且从钻芯到长出幼苗需数月时间，不足以满足园林绿化市场的需求。
技术实现思路
为了解决现有技术的问题，本专利技术提供了一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法。所述技术方案如下：一方面，一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，包括以下步骤：(1)取狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体，对所述外植体进行消毒；(2)将消毒后的所述外植体切块后，接种于不定芽诱导培养基，诱导培养；(3)将诱导培养得到的丛生芽切成含有芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养；(4)增殖培养后切下单芽，接种至生根培养基；(5)将切下的所述单芽在所述生根培养基培养后，放置于室外自然条件下，然后移出并洗净基部残留的培养基，杀菌后假植在苗床上。进一步的，步骤(5)具体为：将切下的单芽在生根培养基培养25-30天后，放置于室外自然条件下8-12天，然后移出并洗净基部残留的培养基，用70％托布津1000倍溶液浸泡后假植在苗床上。进一步的，不定芽诱导培养基为添加1.0-4.0mg/L6-BA、0.1-1.0mg/LNAA、6.5g/L琼脂、30g/L蔗糖的SH培养基，调节pH为5.8。具体的，所述不定芽诱导培养基为添加0.2mg/LNAA、4.0mg/L6-BA、6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的SH培养基，培养基的pH为5.8。进一步的，丛生芽增殖培养基为添加0-1.0mg/LNAA、0.5-5.0mg/L6-BA、0-1.0mg/LTDZ、6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的SH培养基，培养基的pH为5.8。具体的，所述丛生芽增殖培养基为添加0.2mg/LNAA、3.0mg/L6-BA、1mg/LTDZ、6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的SH培养基，培养基的pH为5.8。进一步的，生根培养基为添加6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的1/2MS培养基，培养基的pH为5.8。进一步的，步骤(2)中，培养条件为光照时间12-14h/日，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx，培养35-40天。进一步的，步骤(3)中，培养条件为光照时间12-14h/日，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx，培养25-30天。进一步的，步骤(4)中，培养条件为光照时间12-14h/日，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx，培养25-30天。进一步的，步骤(2)中，将消毒后的所述外植体纵切2-4块。进一步的，步骤(3)中，将所述丛生芽纵切成含有1-2个芽的小块。进一步的，步骤(4)中，增殖培养后，切下高度3cm以上的单芽。进一步的，步骤(1)对外植体进行消毒的具体方法为：将外植体剥去外叶，用饱和十二烷基苯磺酸钠溶液漂洗，再用流动水冲洗；然后在无菌条件下，用70％乙醇浸泡外植体，之后用无菌水冲洗，再用0.1％的升汞浸泡，期间不时振荡容器；最后用无菌水振荡冲洗，用灭菌吸水纸吸干水分。进一步的，步骤(5)中，苗床组成为粗河沙:泥炭土＝1:1，并且苗床预先用1％高锰酸钾消毒。进一步的，步骤(5)中幼苗假植在苗床上后，夏季搭建荫棚，每天晚间淋水一次；冬季覆盖薄膜保温。本专利技术实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本专利技术的狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，以狭叶龙舌兰走茎苗为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根和炼苗移栽等过程建立了其离体组培快繁方法，通过本专利技术的方法可获得大量狭叶龙舌兰离体再生植株，缩短了育苗周期，为满足园林绿化工程对其需求量提供了强有力的技术支撑。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施方式作进一步地详细描述。实施例(1)外植体消毒选取株高约10厘米的狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体材料。将外植体剥去外叶后，用饱和十二烷基苯磺酸钠溶液漂洗5-15min，再用流动自来水冲洗20-30min。在超净工作台无菌条件下，用70％乙醇浸泡外植体1min，之后用无菌水冲洗2-3次，再用0.1％的升汞处理10-25min，期间不时振荡容器。最后用无菌水振荡冲洗3-5次。用灭菌吸水纸吸干水分。(2)诱导培养将步骤(1)消毒处理后的外植体纵切2-4块，接种于不定芽诱导培养基，不定芽诱导培养基以SH培养基为基础，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)作为外源激素以及6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖。其中6-BA浓度为1.0-4.0mg/L，NAA浓度为0.1-1.0mg/L，培养基的pH为5.8。培养条件为日光照时间12-14h，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx。培养结果显示，当6-BA浓度为4.0mg/L，NAA浓度为0.2mg/L时，丛生芽长势最好。(3)继代增殖培养在不定芽诱导培养基培养35-40天后，将丛生芽纵切成含有1-2个芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养。丛生芽增殖培养基以SH培养基为基础，添加外源激素NAA、6-BA和TDZ(噻苯隆)，以及6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖。按表1添加不同量的外源激素配置丛生芽增殖培养基，并在培养基中添加6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖，调节培养基的pH为5.8。在日光照时间12-14h，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx的条件下进行培养，结果见表1。表1不同丛生芽增殖培养基培养结果从表1中可以看出随着6-BA和TDZ浓度的增加，增殖系数增大；当NAA浓度达到一定程度时反而会抑制增殖，增值系数降低。说明细胞分裂素浓度的增加能明显提高增殖效率。最终确定丛生芽增殖培养基中添加的NAA的浓度为0-1.0mg/L，6-BA的浓度为0.5-5.0mg/L，TDZ的浓度为0-1.0mg/L。(4)生根培养在丛生芽增殖培养基培养25-30天后，切下高度3cm以上的单芽，然后接种至生根培养基培养。按照表2配置不同的生根培养基，并在培养基中添加6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖，调节培养基的pH为5.8。在日光照时间12-14h，培养温度27±2℃，光照强度2000Lx的条件下进行培养，结果见表2。表2不同生根培养基培养结果培养基mg/L接种苗数生根株生根率％1/2MS1009595MS1009898MS+N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体，对所述外植体进行消毒；(2)将消毒后的所述外植体切块后，接种于不定芽诱导培养基，诱导培养；(3)将诱导培养得到的丛生芽切成含有芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养；(4)增殖培养后切下单芽，接种至生根培养基；(5)将切下的所述单芽在所述生根培养基培养后，放置于室外自然条件下，然后移出并洗净基部残留的培养基，杀菌后假植在苗床上。

【技术特征摘要】
1.一种狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取狭叶龙舌兰健康走茎苗作为外植体，对所述外植体进行消毒；(2)将消毒后的所述外植体切块后，接种于不定芽诱导培养基，诱导培养；(3)将诱导培养得到的丛生芽切成含有芽的小块，转入丛生芽增殖培养基进行增殖培养；(4)增殖培养后切下单芽，接种至生根培养基；(5)将切下的所述单芽在所述生根培养基培养后，放置于室外自然条件下，然后移出并洗净基部残留的培养基，杀菌后假植在苗床上。2.如权利要求1所述的狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：将切下的单芽在生根培养基培养25-30天后，放置于室外自然条件下8-12天，然后移出并洗净基部残留的培养基，用70％托布津1000倍溶液浸泡后假植在苗床上。3.如权利要求2所述的狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基为添加1.0-4.0mg/L的6-BA、0.1-1.0mg/LNAA、6.5g/L琼脂、30g/L蔗糖的SH培养基，调节pH为5.8；所述丛生芽增殖培养基为添加0-1.0mg/LNAA、0.5-5.0mg/L6-BA、0-1.0mg/LTDZ、6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的SH培养基，所述丛生芽增殖培养基的pH为5.8；所述生根培养基为添加6.5g/L琼脂和30g/L蔗糖的1/2MS培养基，所述生根培养基的pH为5.8。4.如权利要求3所述的狭叶龙舌兰组织培养快速繁育方法，其特征在于，所述步骤(2)中培养条件为光照时间1...

【专利技术属性】
技术研发人员：金刚，陈涛，黄显雅，覃剑峰，王丽萍，黄秋伟，崔明勇，覃旭，张继，
申请(专利权)人：广西壮族自治区亚热带作物研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45