本发明专利技术公开了一种逆转录转座基因L1‑FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途。所述逆转录转座基因L1‑FGGY的核酸序列为SEQ ID NO.1。所述逆转录转座基因L1‑FGGY的上游检测引物核酸序列为SEQ ID NO.2；下游检测引物核酸序列为SEQ ID NO.3。所述逆转录转座抑制剂奈韦拉平或依法韦仑可以抑制逆转录转座基因L1‑FGGY的表达水平，用于治疗肺鳞癌。本发明专利技术公开的L1‑FGGY逆转录转座基因可以作为一个新的肿瘤标志物，对L1‑FGGY的检测可以用以进行肺鳞癌的早期诊断、分子分型，以及预后评估，同时L1‑FGGY还可能成为一个潜在的治疗靶点，应用于肺鳞癌的临床治疗，具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种逆转录转座基因L1-FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途
本专利技术涉及DNA重组技术，更具体地是一种逆转录转座基因L1-FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途。
技术介绍
肺癌是最常见的恶性肿瘤，目前在全世界范围内发病率及病死率均位居前列，5年生存率仅约15.6％，主要原因是约75％的患者在诊断时已是晚期肺癌，早期诊断的不足造成了肺癌患者的预后差。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％以上，主要包括肺腺癌、肺鳞癌和大细胞肺癌，其中肺鳞癌占NSCLC的30％左右。近年来，EGFR、ALK等肿瘤分子标志物的深入研究，大大促进了肺腺癌的分子诊断和靶向治疗。但是肺鳞癌中却缺乏有效的早期诊断和预后预测的分子标志物，这不仅影响肺鳞癌的早诊早治，也在一定程度上导致了肺鳞癌的临床疗效差强人意。目前相对肺腺癌，肺鳞癌的治疗手段非常少，只能依靠常规的放化疗。因此，针对肺鳞癌，依托目前快速发展的高通量基因检测和大数据分析技术，筛选可用于肺鳞癌的早期诊断、分子分型、预后评估和靶向治疗的基因标志物，同时探索有效的治疗方法及其适应症，对于肺鳞癌的精准诊疗具有至关重要的意义。肿瘤是由细胞中多种基因突变积累所引起的疾病。近年来，随着测序技术的发展，多种基因变异形式，包括点突变、插入/缺失、拷贝数变异、基因重排均被发现可参与肺癌的发生和发展过程，其中多种罕见基因重排，比如ALK融合和ROS1融合，成为肺腺癌诊治的关键靶点，但在肺鳞癌中却鲜见这些融合基因标志物。融合基因，属于一种染色体重排的现象，是指两个或多个基因的编码区首尾相连，位于同一套调控序列(包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等)控制之下，构成的嵌合基因。虽然融合基因近年来得到越来越多的关注，但实际上融合基因并不是肿瘤中最常见的基因重排现象。本实验室前期工作发现，在肺鳞癌中存在另一种高频的染色体重排的现象，它发生重排的区域不是基因的编码区，而是非编码区，这种非编码区的染色体重排被称为逆转录转座(retrotransposition)。逆转录转座在人类基因组中广泛发生，致使人类基因组中产生散在分布的重复序列，这些重复序列构成了人类大约一半的基因组DNA。有文献证实逆转录转座存在于多种肿瘤组织中，如结肠癌、前列腺癌、卵巢癌和肝癌，其发生频率高，可能是一种潜在的肿瘤基因标志物。但由于逆转录转座缺乏有效的筛选手段，因此针对其作为基因标志物的研究一直迟滞不前。近年来，随着高通量基因检测和生物信息分析技术的提高，多种不同形式的逆转录转座子被鉴定出来，并逐渐阐明其与多种疾病的相关性。逆转录转座被定义为通过转座元件将RNA中间体复制整合到基因组DNA的机制，主要包括3种类型：即长散布元件(LINE-1，也称为L1)，短散布元件(SINE)和长末端重复(LTR)。其中LINE-1是目前人体内存在的唯一具有自主转座活性的转座子，约占人类基因组的17％。LINE-1通过RNA中间体自我复制，并插入整合到基因组中，从而导致遗传的不稳定性，并影响附近基因的表达。1988年，科学家首次意识到逆转录转座的病理作用，Kazazian等发现LINE-1序列的插入可导致A型血友病，目前已证实由LINE-1介导的遗传疾病已经有超过100例的报道。研究显示，LINE-1的转座可以通过激活原癌基因或失活抑癌基因导致癌症发生。在乳腺导管腺癌中发现，LINE-1的转座能引起的MYC癌基因的重排和扩增，导致癌症发生。在结肠癌中，LINE-1转座插入APC抑癌基因的最后一个外显子后使APC基因失活，最终导致癌症发生。这两个研究结果为LINE-1转座影响目的基因的表达和功能，从而导致肿瘤发生提供了直接的证据。虽然，LINE-1的复制和转座可导致包括肿瘤在内的基因疾病，但对于其对肺鳞癌发生发展的影响目前尚无报道。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述问题，所提出一种逆转录转座基因L1-FGGY及其作为肺鳞癌标志物的用途。本专利技术是按照以下技术方案实现的。一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1-FGGY，所述逆转录转座基因L1-FGGY的核酸序列为SEQIDNO.1。进一步的，所述逆转录转座基因L1-FGGY的上游检测引物核酸序列为SEQIDNO.2；下游检测引物核酸序列为SEQIDNO.3。进一步的，逆转录转座抑制剂抑制逆转录转座基因L1-FGGY的表达水平，用于治疗肺鳞癌。进一步的，所述逆转录转座抑制剂为奈韦拉平或依法韦仑。一种逆转录转座基因L1-FGGY作为肺鳞癌标志物的应用。进一步的，所述逆转录转座基因L1-FGGY的核酸序列为SEQIDNO.1。进一步的，所述逆转录转座基因L1-FGGY的上游检测引物核酸序列为SEQIDNO.2；下游检测引物核酸序列为SEQIDNO.3。进一步的，逆转录转座抑制剂抑制逆转录转座基因L1-FGGY的表达水平，用于治疗肺鳞癌。进一步的，所述逆转录转座抑制剂为奈韦拉平或依法韦仑。本专利技术获得了如下有益效果。本专利技术通过细胞实验和动物实验发现L1-FGGY的高表达能够增加肺鳞癌细胞增殖和侵袭的能力，并且促进小鼠肺鳞癌的发生发展。同时，利用逆转录转座的抑制剂处理，证实了针对逆转录转座基因L1-FGGY为靶点进行治疗的效果。本专利技术揭示L1-FGGY逆转录转座基因可能作为一个新的肿瘤标志物，对L1-FGGY的检测可以用以进行肺鳞癌的早期诊断、分子分型，以及预后评估，同时L1-FGGY还可能成为一个潜在的治疗靶点，应用于肺鳞癌的临床治疗。附图说明图1是本专利技术定量检测L1-FGGY逆转录转座基因在肺鳞癌和癌旁组织中的表达图；图2是本专利技术在细胞水平上验证L1-FGGY逆转录转座基因的存在及其与肺癌发生的相关性图；图3是本专利技术L1-FGGY逆转录转座基因的表达量与患者总生存之间的关系图；图4是本专利技术逆转录转座基因L1-FGGY的表达量与肺鳞癌细胞增殖能力、侵袭潜能、凋亡数量的关系图；图5是本专利技术奈韦拉平或依法韦仑对L1-FGGY表达水平、肺鳞癌细胞的增殖能力，细胞侵袭数量的影响图；图6是本专利技术小鼠体内逆转录转座基因L1-FGGY的表达对肺鳞癌发生发展的影响图。具体实施方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述。一、核酸序列L1-FGGY逆转录转座基因序列：二、实验方法1.临床样本收集本专利技术共收集来自于2004年10月至2006年10月期间，肺部肿瘤科就诊并接受部分肺切除手术治疗的肺鳞癌患者样本110例。在这110例肺鳞癌细胞癌样本中，有52例是同时收集了其癌旁正常组织的。这些患者包括89名男性和20名女性，中位年龄为62岁(39-84岁)。这些患者都被确诊为肺鳞癌，临床分期为I期30例，II期34例，III期35例，和IV期10例)。在进行肺切除手术前，未进行包括化疗或放疗在内的治疗。术后随访时间67-96个月。2.PCR检测(1)Trizol法提取总RNA①收集的组织样本，加入适量的Trizol，吹打后移入无酶Eppendorf管中。确保细胞完全裂解，液体基本澄清。②将上述Eppendorf管室温静置5min，加入氯仿(200μl/1mlTrizol)，上下颠倒混匀，室温静置10min，4℃，12000g，离心15min。③小心吸取上层水相置于另一个新的无酶Eppendorf管中，加入等体积异丙醇，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1‑FGGY，其特征在于：所述逆转录转座基因L1‑FGGY的核酸序列为SEQ ID NO.1。
【技术特征摘要】
1.一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1-FGGY，其特征在于：所述逆转录转座基因L1-FGGY的核酸序列为SEQIDNO.1。2.根据权利要求1所述的一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1-FGG，其特征在于：所述逆转录转座基因L1-FGGY的上游检测引物核酸序列为SEQIDNO.2；下游检测引物核酸序列为SEQIDNO.3。3.根据权利要求1所述的一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1-FGG，其特征在于：逆转录转座抑制剂抑制逆转录转座基因L1-FGGY的表达水平，用于治疗肺鳞癌。4.根据权利要求3所述的一种作为肺鳞癌标志物的逆转录转座基因L1-FGG，其特征在于：所述逆转录转座抑制剂为奈韦拉平或依法韦仑。5.一种逆转录转座基因L1-FGGY作为肺鳞癌标志...
【专利技术属性】
技术研发人员：于津浦，刘芃芃，张蕊，
申请(专利权)人：天津医科大学肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：天津,12
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