T细胞受体缺陷型T细胞组合物制造技术

本发明专利技术涉及修饰的T细胞，制备和使用分离的、修饰的T细胞的方法以及使用所述分离的、修饰的T细胞来解决疾病和病症的方法。在一个实施方案中，本发明专利技术广义上涉及TCR缺陷型T细胞、其分离群体以及包含它们的组合物。在本发明专利技术的另一个实施方案中，所述TCR缺陷型T细胞被设计成表达功能性非TCR受体。本发明专利技术还涉及制备所述TCR缺陷型T细胞的方法，和使用所述TCR缺陷型T细胞、其群体或包含它们的组合物来减少或改善或预防或治疗疾病和病症的方法。

【技术实现步骤摘要】
T细胞受体缺陷型T细胞组合物本分案申请是基于申请号为201380034582.9、申请日为2013年4月30日、申请人为“达特茅斯大学理事会”、专利技术名称为“T细胞受体缺陷型T细胞组合物”的原始中国专利申请(原国际申请号为PCT/US2013/038921)的分案申请。本专利技术在美国国家卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的合同号CA130911的政府支持下进行。政府享有本专利技术的某些权利。相关申请的交叉引用本申请是2012年4月19日提交的美国专利申请号13/502,978的部分继续申请，该申请是2010年10月29日提交的国际专利申请号PCT/US2010/54846的国家阶段申请，其要求2009年10月29日提交的美国临时专利申请号61/255,980的优先权权益，所述申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。专利技术背景专利
本专利技术涉及TCR缺陷型T细胞、制备和使用TCR缺陷型T细胞的方法以及使用这些TCR缺陷型T细胞来解决疾病和病症的方法。在一个实施方案中，本专利技术广义上涉及TCR缺陷型T细胞、其分离群体以及包含它们的组合物。在本专利技术的另一个实施方案中，所述TCR缺陷型T细胞被进一步设计成表达功能性非TCR受体。本专利技术还涉及制备所述TCR缺陷型T细胞的方法和使用所述TCR缺陷型T细胞、其群体或包含它们的组合物来减少或改善或预防或治疗疾病和病症的方法。相关技术描述全球癌症负担在1975年与2000年之间加倍，并且癌症被预期到2010年成为世界范围内死亡的主要原因。根据美国癌症协会，预计到2020年再次加倍并且到2030年达到三倍。因此，需要更有效的疗法来治疗各种形式的癌症。理想地，任何癌症疗法应是有效的(杀死癌细胞)、靶向的(即选择性的，以避免杀死健康细胞)、永久的(以避免复发和转移)和可负担得起的。护理大多数癌症的目前标准无法满足这些标准中的一些或全部。细胞免疫疗法已显示产生特异性肿瘤消除并且具有提供特异性和有效癌症疗法的潜力(Ho,W.Y.等2003.CancerCell3:1318-1328；Morris,E.C.等2003.Clin.Exp.Immunol.131:1-7；Rosenberg,S.A.2001.Nature411:380-384；Boon,T.和P.vanderBruggen.1996.J.Exp.Med.183:725-729)。T细胞由于其选择性识别和强大的效应机制而经常一直是用于癌症免疫疗法的选择的效应细胞。T细胞使用其T细胞受体(TCR)来识别在自身主要组织相容性复合物(MHC)背景下源自内部细胞蛋白质的特异性肽。本领域公认TCR复合物通过二聚体形成和这些二聚体(TCR-α/β，CD3-γ/ε、CD3-δ/ε和CD3-ζ二聚体)缔合成可输出到细胞表面的一种TCR复合物来以精确方式缔合。任何这些复合物不能适当地形成将抑制TCR组装和表达(Call,M.E.等,(2007)NatureRev.Immunol.,7:841-850；Call,M.E.等,(2005)Annu.Rev.Immunol.,23:101-125)。相应TCR链中的特定氨基酸残基已被鉴别为对于正确二聚体形成和TCR组装来说重要的。具体地说，对于TCR-α来说，跨膜部分中的这些关键氨基酸是精氨酸(用于与CD3-ζ缔合)和赖氨酸(用于与CD3-ε/δ二聚体缔合)。对于TCR-β来说，跨膜部分中的关键氨基酸是赖氨酸(用于与CD3-ε/γ二聚体缔合)。对于CD3-γ来说，跨膜部分中的关键氨基酸是谷氨酸。对于CD3-δ来说，跨膜部分中的关键氨基酸是天冬氨酸。对于CD3-ε来说，跨膜部分中的关键氨基酸是天冬氨酸。对于CD3-ζ来说，跨膜部分中的关键氨基酸是天冬氨酸(Call,M.E.等,(2007)NatureRev.Immunol.,7:841-850；Call,M.E.等,(2005)Annu.Rev.Immunol.,23:101-125)。源自肿瘤中改变的或突变的蛋白质的肽可由特异性TCR识别。若干关键研究已导致与特定肿瘤相关的抗原的鉴别，所述抗原一直能够诱导患者中的有效细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答(Ribas,A.等2003.J.Clin.Oncol.21:2415-2432)。T细胞效应机制包括直接杀死肿瘤细胞的能力和产生活化其它宿主免疫细胞并且改变局部肿瘤微环境的细胞因子。理论上，T细胞能够鉴别并破坏表达单一突变肽的肿瘤细胞。使用对MART1或gp100具有特异性的CTL克隆与低剂量IL-2的过继性免疫疗法已有效降低或稳定一些患者中的肿瘤负担(Yee,C.等2002.Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:16168-16173)。其它方法使用具有限定抗肿瘤受体的T细胞。这些方法包括用识别肿瘤肽和MHC、源自偶联至适当信号传导元件的单链抗体片段(scFv)的嵌合抗原受体(CARS)的新的抗原特异性T细胞受体来遗传修饰CTL或使用嵌合NK细胞受体(Ho,W.Y.等2003.CancerCell3:431-437；Eshhar,Z.等1993.Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:720-724；Maher,J.和E.T.Davies.2004.Br.J.Cancer91:817-821；Zhang,T.等2005.Blood106:1544-1551)。基于细胞的疗法用于常规化学疗法或辐射治疗已失败或已复发(经常已尝试多于一种类型的疗法)的患者中。来自可能已经历几轮化学疗法的患有晚期癌症的患者的免疫细胞不如健康个体一样稳健地应答。此外，癌症患者经常是老年人并且可能患有其它疾病，所述其它疾病可限制其免疫细胞成为引发的效应细胞的潜力，甚至在体外活化和扩增之后。另外，每个癌症患者必须提供足够数量的其自身免疫细胞以便使所述免疫细胞被工程化来表达新的免疫受体。因为每种疗法必须针对患者进行定制，所以这一过程从作出决定进行所述疗法的时间起需要数周；同时，癌症继续生长。美国专利申请公布号US2002/0039576公开了一种用于调节T细胞活性的方法，其中所使用的T细胞具有CD3+-αβ-TcR+CD4-CD8-CD28-NK1.1-的表型。美国专利申请公布号US2006/0166314公开了使用突变T细胞来治疗癌症，其中所述T细胞是具有T细胞应答介导的MDM2蛋白质特异性αβ-T细胞受体的T细胞。癌症不是其中T细胞操作可为有效疗法的唯一疾病。已知T细胞上的活性T细胞受体对于刺激免疫系统活性的身体应答来说是关键的。例如，已显示T细胞受体多样性在移植物抗宿主病(GVHD)、特别是慢性GVHD中起作用(Anderson等(2004)Blood104:1565-1573)。事实上，施用T细胞受体抗体已显示减少急性GVHD的症状(Maeda等(2005)Blood106:749-755)。仍然需要用于治疗某些疾病和病症的更有效的基于T细胞的疗法和基于设计新的T细胞类型的治疗方法。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术广义上涉及不表达功能性T细胞受体(TCR)的分离的、修饰的T细胞。在这个实施方案中，T细胞是在功能性TCR表达中缺乏TCR。在本专利技术的另一个实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生分离的T细胞受体(TCR)缺陷型T细胞的方法，其包括在所述T细胞中表达TCR抑制分子(TIM)，所述TCR抑制分子通过减少或阻断TCR复合物的组分的表达而使所述TCR复合物不稳定，其中所述TIM是显性失活抑制蛋白。

【技术特征摘要】
2012.04.30 US 13/459,6641.一种产生分离的T细胞受体(TCR)缺陷型T细胞的方法，其包括在所述T细胞中表达TCR抑制分子(TIM)，所述TCR抑制分子通过减少或阻断TCR复合物的组分的表达而使所述TCR复合物不稳定，其中所述TIM是显性失活抑制蛋白。2.如权利要求1所述的方法，其中所述TIM通过减少或阻断T细胞表面的所述TCR复合物的组分的表达而使所述TCR复合物不稳定。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述TIM具有编码截短的CD3ζ多肽的核酸序列。4.如前述任一项权利要求所述的方法，其中所述TIM具有编码SEQIDNO:69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99或101的截短的CD3ζ多肽的核酸序列。5.如权利要求4所述的方法，其中编码截短的CD3ζ多肽的核酸序列包含SEQIDNO:68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98或100的核酸序列。6.如前述任一项权利要求所述的方法，其中T细胞中表达的唯一TIM是截短的CD3ζ多肽。7.如前述任一项权利要求所述的方法，其中T细胞被进一步工程化来表达嵌合肿瘤靶向受体。8.如前述任一项权利要求所述的方法，其中T细胞是人T细胞。9....

【专利技术属性】
技术研发人员：C·L·森特曼，
申请(专利权)人：达特茅斯大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国,US