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一种将成纤维细胞体外重编为Sertoli细胞的方法及其应用技术

技术编号:19448029 阅读:53 留言:0更新日期:2018-11-14 17:08
本发明专利技术公开了一种将成纤维细胞体外重编为Sertoli细胞的方法及其应用。该方法包括如下步骤:向成纤维细胞中导入在Sertoli细胞中特异表达的荧光蛋白报告系统;再导入提高NR5A1蛋白的表达量和/或活性的物质;加入G418,培养3‑7d;弃液相,加入用于培养成纤维细胞的培养基,继续培养3‑7d;从培养体系中分离Sertoli细胞。实验证明,采用上述方法制备的细胞完全获得了Sertoli细胞的特征,如具有吸引内皮细胞、形成脂滴、与生殖细胞互作、抑制淋巴细胞的生长及白细胞介素的产生、免疫豁免能力等特性。本发明专利技术在不孕不育的治疗、异体移植和细胞治疗等领域具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种将成纤维细胞体外重编为Sertoli细胞的方法及其应用
本专利技术属于细胞培养领域,具体涉及一种将成纤维细胞体外重编为Sertoli细胞的方法及其应用。
技术介绍
根据世界卫生组织的统计,不孕不育困扰着世界上15%左右的夫妇。其中,男性因素占据40%-60%的比重,具体反映在精细胞数量或者质量的缺陷上。人类多能性干细胞,具有分化为人体各种细胞类型的潜力。体外分化干细胞为有功能的精细胞,为不孕不育的治疗提供了一种切实可行的途径。Sertoli细胞是睾丸体细胞的一种,与生殖细胞一起存在于生精小管中,对精子发生的触发和调控具有举足轻重的作用。对于精子体外分化体系的构建,Sertoli细胞将是不可或缺的组成成分。此外,睾丸中的Sertoli细胞还演化出了特殊的免疫豁免属性,可以保护生殖细胞免遭免疫系统的攻击。Sertoli细胞的这个特性已被应用于细胞、组织、器官异体移植等治疗领域,用以减轻宿主对移植细胞的免疫排斥,从而提高细胞的存活率。另外,Sertoli细胞本身还可以用作基因工程细胞,用于携带和表达特定的治疗蛋白或者药物。由此可见,Sertoli细胞是一种非常有应用潜力的细胞;但受来源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备Sertoli细胞的方法,包括步骤a2):增加成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量和/或活性。

【技术特征摘要】
1.一种制备Sertoli细胞的方法,包括步骤a2):增加成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量和/或活性。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述“增加成纤维细胞中NR5A1蛋白的表达量和/或活性”为向成纤维细胞中导入提高NR5A1蛋白的表达量和/或活性的物质。3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤a2)为:增加成纤维细胞中“NR5A1蛋白的表达量和/或活性”和“蛋白质组合的表达量和/或活性”;所述蛋白质组合为GATA4蛋白、WT1蛋白、SOX9蛋白和DMRT1蛋白中的至少一种。4.如权利要求3所述的方法,其特征在于:所述“增加成纤维细胞中‘NR5A1蛋白的表达量和/或活性’和‘蛋白质组合的表达量和/或活性’”为向成纤维细胞中导入“提高NR5A1蛋白的表达量和/或活性的物质”和“提高蛋白质组合的表达量和/或活性的物质”。5.如权利要求1至4任一所述的方法,其特征在于:所述方法还包括步骤a1):向成纤维细胞中导入在Sertoli细胞中特异表达的荧光蛋白报告系统;所述在Sertoli细胞中特异表达的荧光蛋白报告系统中,由在Sertoli细胞中特异表达的启动子启动荧光蛋白的表达;在进行所述步骤a2)前先进行所述步骤a1)。6.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述在Sertoli细胞中特异表达的启动子为AMH基因的启动子。7.如权利要求6所述的方法,其特征在于:所述AMH基因的启动子的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。8.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或红色荧光蛋白。9.如权利要求1至8任一所述的方法,其特征在于:所述方法还包括步骤a3)-a6):a3)完成步骤a2)后,向成纤维细胞的培养体系中加入G418,得到药筛体系;a4)完成步骤a3)后,取所述药筛体系,培养3-7d;a5)完成步骤a4)后,弃液相,加入用于培养成纤维细胞的培养基,继续培养3-7d;a6)从完成步骤a5)后培养体系中分离Sertoli细胞。10.如权利要求9所述的方法,其特征在于:所述步骤a6)中,分离Sertoli细胞是通过分离可以发出荧光的细胞实现的...

【专利技术属性】
技术研发人员:纪家葵梁健霖
申请(专利权)人:清华大学
类型:发明
国别省市:北京,11

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