体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种肿瘤3D集体侵袭模型及其构建方法，制备肿瘤多细胞类器官团，细胞中含有光转换荧光蛋白，将其包被于I型鼠尾胶中进行3D培养，体外模拟肿瘤细胞的生长状态、增殖方式和侵袭方式，该模型研究的是肿瘤多细胞球体类器官的集体侵袭作用，更能模拟肿瘤细胞在体内集体侵袭方式，采用激光共聚焦显微镜进行光漂白后，可以在缺乏特异性生物学标记物的情况下对集体侵袭细胞中的Leader Cells与Follower Cells进行区分，并可通过荧光流式分选获得目的区域的肿瘤细胞进行后续实验研究。

【技术实现步骤摘要】
体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法
本专利技术涉及医药生物学领域，具体涉及一种体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法。
技术介绍
传统的观察体外肿瘤细胞3D模型研究，一种是将单个肿瘤细胞包被入matrigelmatrix胶或者I型鼠尾胶原中进行培养及观察；另一种是将新鲜肿瘤组织标本剪碎处理后，把肿瘤组织小块包被入I型鼠尾胶原中进行培养及观察。传统的单个肿瘤细胞体外3D生长模型能直观观察肿瘤细胞在胶内的生长增殖变化等，但无法观察细胞侵袭情况，难以模拟肿瘤细胞在体内集体侵袭方式；包被I型鼠尾胶原中的新鲜肿瘤组织块是多细胞组织块，虽可观察细胞侵袭生长，但组织块中除肿瘤细胞外还混有多种细胞成分(如血管内皮细胞、成纤维细胞、肌细胞等)，发生侵袭的细胞不能直接判定是否为肿瘤细胞，且难以获得目的区域的肿瘤细胞，尤其是在缺乏特异性生物学标记的情况下，难以对集体侵袭细胞中的LeaderCells和FollowerCells进行区分，不利于对于肿瘤侵袭的后续深入研究。
技术实现思路
基于此，针对上述问题，本专利技术的其中一个目的在于提供一种构建体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型，该模型能够模拟肿瘤细胞集体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养得到肿瘤多细胞球体；所述肿瘤多细胞球体中的肿瘤细胞可表达光转换荧光蛋白；(2)向培养皿中加入I型鼠尾胶原与所述肿瘤多细胞球体的混合液；待凝固后，加入培养基、继续培养；(3)所述肿瘤多细胞球体在I型鼠尾胶原内伸展侵袭生长，至出现明显的集体侵袭细胞群时，使用激光共聚焦显微镜对所需区域的肿瘤细胞进行激光漂白荧光蛋白光转化，使所需区域的肿瘤细胞中的光转换荧光蛋白由绿色荧光转换为红色荧光；(4)加入胶原酶消化、离心、重悬，制得细胞悬液；(5)流式细胞仪分选以获得所需区域的肿瘤细胞。

【技术特征摘要】
1.一种体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养得到肿瘤多细胞球体；所述肿瘤多细胞球体中的肿瘤细胞可表达光转换荧光蛋白；(2)向培养皿中加入I型鼠尾胶原与所述肿瘤多细胞球体的混合液；待凝固后，加入培养基、继续培养；(3)所述肿瘤多细胞球体在I型鼠尾胶原内伸展侵袭生长，至出现明显的集体侵袭细胞群时，使用激光共聚焦显微镜对所需区域的肿瘤细胞进行激光漂白荧光蛋白光转化，使所需区域的肿瘤细胞中的光转换荧光蛋白由绿色荧光转换为红色荧光；(4)加入胶原酶消化、离心、重悬，制得细胞悬液；(5)流式细胞仪分选以获得所需区域的肿瘤细胞。2.根据权利要求1所述的体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，所述培养得到肿瘤多细胞球体的步骤包括：向肿瘤细胞中转染入可表达光转换荧光蛋白的质粒，利用超高速流式细胞分选系统分选出可进行光转换荧光肿瘤细胞；采用悬滴培养法或微孔板培养法，将所述光转换荧光肿瘤细胞培养成肿瘤多细胞球体。3.根据权利要求2所述的体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，所述利用超高速流式细胞分选系统分选为：分选至少两次，每次间隔大于7天。4.根据权利要求2所述的体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，所述微孔板培养法为：计数5000-10000个肿瘤细胞重悬液，将其加入96孔黑色圆底超低吸附球体培养微孔板。5.根据权利要求1所述的体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)为，先在激光共聚焦培养皿中均匀铺设一层I型鼠尾胶原，再向激光...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁莉，王斐斐，朱孝辉，丁彦青，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44