一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，三碘甲状腺原氨酸校准品，三碘甲状腺原氨酸质控品。本发明专利技术的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

A total three iodine thyroid gland magnetic particle chemiluminescence immunoassay kit and its preparation method

The invention relates to a total triiodothyronine magnetic particle chemiluminescence immunoassay kit and a preparation method thereof. The kit includes streptavidin-coated magnetic particle suspension, alkaline phosphatase-labeled triiodothyronine derivative, biotin-labeled triiodothyronine antibody. Test diluent, three iodine thyroid gland acid calibration product, three iodine thyroid gland acid quality control product. Compared with the existing kit, the kit has the advantages of simpler preparation process, lower cost, wider detection range and better stability.

【技术实现步骤摘要】
一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫检测分析
，涉及检测血清中总三碘甲状腺原氨酸TT3含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
3，5，3′三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）是一种对各种靶器官起作用的重要甲状腺激素，分子量为651，血浆中半衰期为1.5天。大约80%的T3形成于外周组织，由T4在脱碘酶的作用下脱碘转化而来，其余的T3是由于甲状腺球蛋白的水解而被释放进入血液循环。T3的分泌受促甲状腺激素（TSH）和促甲状腺激素释放激素（TRH）的调节，而T3的水平对TSH也存在负反馈调节。T3是通过与血清中的运载蛋白结合而被转运的，主要有甲状腺素结合球蛋白（TBG），前白蛋白和白蛋白，只有约0.4%的T3是游离的，但游离T3（FT3）才真正具备激素的生物活性。体内TT3的浓度受甲状腺激素结合蛋白的浓度的影响，而FT3不受影响，TT3和FT3保持动态平衡，维持正常的甲状腺功能，所以TT3的定量检测对早期的甲状腺疾病诊断非常有价值。用于体内总三碘甲状腺原氨酸测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I125标记三碘甲状腺原氨酸半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供总三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本专利技术公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的总三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。本专利技术采用的技术方案为：一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，总三碘甲状腺原氨酸校准品，总三碘甲状腺原氨酸质控品。进一步的，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0。所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质。所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体。进一步的，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁颗粒悬浮于磁微粒包被物缓冲液中悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。进一步的，所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为稀释于酶标记物缓冲液中的碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物，所述碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:800；酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。进一步的，所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为稀释于生物素标记物缓冲液中的生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体；所述生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；所述生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0。进一步的，所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为8-苯胺-1-萘磺酸（ANS），所述测试稀释液的浓度范围为0.01%～1%，优选的浓度为0.1%；所述缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4；所述三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为0，0.50，1.00，2.00，4.00，8.00ng/mL；校准品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4；所述三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为1.00，4.00ng/mL；所述质控品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH值为7.4。进一步的，所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式如下：或所述三碘甲状腺原氨酸衍生物N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式如下：进一步的，所述三碘甲状腺原氨酸衍生物是通过以下工艺步骤制备的：S1.三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯的制备：取三碘甲状腺原氨酸加入到蒸馏水中，再加入硫酸铜，在100℃水浴中回流反应5小时，冷却至室温后，过滤除去固体杂质，然后将滤液冰浴降温2小时有结晶析出，用乙醇重结晶，得到白色片状结晶三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯；S2.N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物的制备：取三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯溶解于50mM柠檬酸溶液（PH4.0）中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，避光条件下2～8℃反应8h，过色谱柱收集N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物的洗脱液，浓缩后，用无水乙醇重结晶，得到白色针状结晶N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与三碘甲状腺原氨酸合成物，即得三碘甲状腺原氨酸衍生物。一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的制备方法，包括：（1）碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物制备方法：将碱性磷酸酶加入碳酸钠缓冲液(pH8.0)中，加入三碘甲状腺原氨酸衍生物（T3-NHS），在温度为4℃～37℃反应0.5～24小时后，然后用ProteinG亲和柱(GE公司)纯化酶标抗体，得到三碘甲状腺原氨酸酶结合物，将三碘甲状腺原氨酸酶结合物稀释于酶标记物缓冲液中，所述三碘甲状腺原氨酸酶结合物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:1000；（2）生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体制备方法：将三碘甲状腺原氨酸抗体（小鼠，单克隆）加入碳酸钠缓冲液(pH8.0)中，加入生物素衍生物，在温度为4℃～本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，总三碘甲状腺原氨酸校准品，总三碘甲状腺原氨酸质控品。

【技术特征摘要】
1.一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，总三碘甲状腺原氨酸校准品，总三碘甲状腺原氨酸质控品。2.根据权利要求1所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质；所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体。3.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁颗粒悬浮于磁微粒包被物缓冲液中悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL；所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH为7.0。4.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为稀释于酶标记物缓冲液中的碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物，所述碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:800；酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。5.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为稀释于生物素标记物缓冲液中的生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体；所述生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000，优选的稀释比例为1:500；所述生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为8.0。6.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述测试稀释液为含有解离剂的缓冲液，其中解离剂为8-苯胺-1-萘磺酸（ANS），所述测试稀释液的浓度范围为0.01%～1%，优选的浓度为0.1%；所述缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4；所述三碘甲状腺原氨酸校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为0，0.50，1.00，2.00，4.00，8.00ng/mL；校准品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4；所述三碘甲状腺原氨酸质控品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将三碘甲状腺原氨酸纯品稀释至工作浓度，分别为1.00，4.00ng/mL；所述质控品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH值为7.4。7.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式如下：或所述三碘甲状腺原氨酸衍生物N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式如下：。8.根据权利要求1或2所述的一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述三碘甲状腺原氨酸衍生物是通过以下工艺步骤制备的：S1.三碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯的制备：取三碘甲状腺原氨酸加入到蒸馏水...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明勇，姜雪莲，张玲，胡洁，黄伟，
申请(专利权)人：湖南远璟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43