一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物、其制法及其医药用途制造技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物(I)，其制法及其医药用途。药理实验证明，本发明专利技术物具有显著的抗肿瘤细胞增殖的活性，可用于临床预防或治疗肿瘤疾病。

Nitric oxide donor podophyllotoxin derivative, preparation method and medicinal use thereof

The invention relates to the field of pharmaceutical chemistry, in particular to a nitric oxide donor podophyllotoxin derivative (I), a preparation method thereof and a pharmaceutical application thereof. Pharmacological experiments show that the invention has remarkable anti-tumor cell proliferation activity and can be used for clinical prevention or treatment of tumor diseases.

【技术实现步骤摘要】
一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物、其制法及其医药用途
本专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物(I)，它们的制备方法以及在预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
鬼臼毒素是一种芳基萘内酯类木脂素，主要来源于鬼臼属植物。研究结果显示，鬼臼毒素是一个具有多种药用功能的天然产物，药理活性包括抗病毒、抗肿瘤和杀虫等。不过，鬼臼毒素具有较强的不良反应，对消化系统和免疫系统的毒性强，不能内服。目前，鬼臼毒素主要作为外部用药，用于治疗皮肤类疾病，如尖锐湿疣、扁平疣等。通过对鬼臼毒素的结构进行改造修饰研究后，人们发现了两个鬼臼毒素类临床抗肿瘤药物：依托泊苷和替尼泊苷。近年来的研究显示，虽然依托泊苷和替尼泊苷对多种癌症具有治疗作用，但是容易产生耐药性，从而降低治疗效果。一氧化氮(NO)是一种内源性物质，具有许多重要生物学功能，并参与调节机体多种生理病理过程。研究表明，NO能够显著增强抗肿瘤药物的活性，从而降低其有效剂量，有利于减轻化疗药物的毒副作用；另外，NO还能够通过自身介导的多种机制以增强肿瘤细胞的化疗敏感性，如增加肿瘤微环境中的血液输送、抑制转录因子低氧诱导因子-1、核因子κB、药物外排泵以及半胱氨酸蛋白酶家族蛋白等，进一步增强抗肿瘤药物对多药耐药肿瘤细胞的杀伤效果。为了发现具有高效低毒的抗肿瘤先导化合物，我们利用药物化学领域的药效团拼合原理，在鬼臼毒素结构中引入NO供体基团，得到了结构新颖的一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物。
技术实现思路
本专利技术涉及药物化学领域，其目的是涉及一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物(I)的制备方法以及在预防或治疗肿瘤的药物中的用途。药理实验显示，本专利技术物对敏感人慢性髓系白血病细胞(K562)和耐药人慢性髓系白血病细胞(K562/VCR和K562/ADR)具有极强的体外抑制活性。因此，本专利技术的式(I)化合物可用于临床预防或治疗肿瘤疾病。本专利技术的化合物通式(I)如下：其中，n代表：1、2、3、4或5。本专利技术所述的药物组合物，其中含有有效剂量的本专利技术物，剂型包括片剂、喷雾剂、酊剂、颗粒剂、混悬剂、胶囊剂、缓释剂、贴剂、凝胶剂、注射剂和栓剂等制剂学上常规的剂型形式。本通式(I)所示化合物的制备方法如下：其中a～b代表反应条件：a：试剂为氯代酰氯；溶剂为四氢呋喃或二氯甲烷；缚酸剂为碳酸钾或三乙胺；反应温度为15～35℃；b：试剂为硝酸银；溶剂为乙腈；反应温度为80℃。药理活性实验证明，本专利技术物对敏感人慢性髓系白血病细胞(K562)和耐药人慢性髓系白血病细胞(K562/VCR和K562/ADR)具有极强的体外抑制活性。以下是本专利技术部分化合物的药理活性测试方法及结果：CCK-8法测试体外抗肿瘤活性阳性药：阿霉素(ADR)实验方法：取处于指数生长期的细胞，计数、配制成浓度为3.5×104个/mL的细胞悬液，96孔细胞培养板中每孔加入100μL细胞悬液，随后置于37℃，5％CO2培养箱中培养24小时。用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100μL相应的目标产物培养基，同时设立阴性对照组，阳性对照组，96孔细胞培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养72小时。加入CCK-8试剂(10μL)，继续孵化3小时。酶标仪读出每孔的OD值，计算每组抑制率，再由统计软件计算出半数抑制浓度(IC50)值。部分化合物体外抗肿瘤活性结果如下：表1本专利技术部分化合物对K562、K562/VCR和K562/ADR的体外抗增殖活性结果表明，本专利技术物对K562、K562/VCR和K562/ADR三种肿瘤细胞株具有极强的体外抑制活性。其中，化合物I-1的活性最强，对K562、K562/VCR和K562/ADR的IC50值分别为0.007±0.001μM、0.008±0.001μM和0.007±0.001μM，结果显示其对耐药细胞株的抗增殖作用与敏感细胞株抑制作用相当。同时，本专利技术化合物I-1和I-2对K562、K562/VCR和K562/ADR三种肿瘤细胞株的抑制活性也显著强于临床药物阿霉素。具体实施方式仪器与试剂熔点为SGWX-4熔点仪，核磁共振仪为Agilent-NMR-400型，质谱仪为AgilentAccurate-Mass-Q-TOF-MS6520型，其它所用试剂为分析纯。下面的实施例用于具体说明本专利技术物的制备，但本专利技术并不局限于下列实施例。实施例1：4-α-[2-硝酸酯基-乙酸酯]-鬼臼毒素(I-1)的制备鬼臼毒素(0.06g,0.14mmol)加入到二氯甲烷(3mL)中，再加入三乙胺(0.1mL,0.7mmol)，反应液冷却至0℃，搅拌下滴加氯代乙酰氯(1.5eq)。滴毕，反应液升至25℃，搅拌反应1小时。饱和氯化铵溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取三次，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到中间体III-1。上述粗品溶解在乙腈(1mL)中，加入硝酸银(10eq)，80℃条件下，避光搅拌反应24小时。过滤，滤液浓缩得到粗品，经柱层析纯化得到淡黄色固体4-α-[2-硝酸酯基-乙酸酯]-鬼臼毒素(I-1)，收率37％。Mp:102-104℃；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.71(s,1H),6.56(s,1H),6.36(s,2H),6.05-6.00(m,3H),5.02(s,2H),4.62(s,1H),4.38(t,J＝8.0Hz,1H),4.19(t,J＝9.6Hz,1H),3.82(s,3H),3.76(s,6H),2.97-2.84(m,2H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.17,166.46,152.71,148.55,147.81,134.40,132.65,126.74,109.88,107.94,106.61,101.77,75.68,70.85,67.02,60.76,56.12,45.45,43.65,38.39,29.69；HRMS-ESI(m/z):calcdforC24H27N2O12[M+NH4]+535.1559,found535.1556.实施例2：4-α-[4-硝酸酯基-丁酸酯]-鬼臼毒素(I-2)的制备将氯代丁酰氯代替氯代乙酰氯，按实施例1所述的方法，其余所需原料、试剂同实施例1，得到浅灰色固体4-α-[4-硝酸酯基-丁酸酯]-鬼臼毒素(I-2)，收率29％。Mp:72-73℃；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.75(s,1H),6.55(s,1H),6.38(s,2H),6.00(d,J＝4.0Hz,2H),5.92(d,J＝8.8Hz,1H),4.61(s,1H),4.56(t,J＝6.0Hz,2H),4.38(t,J＝7.2Hz,1H),4.20(t,J＝9.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.76(s,6H),2.95-2.79(m,2H),2.66-2.51(m,2H),2.14(t,J＝6.4Hz,2H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.53,172.77,152.64,148.21,147.63,134.71,132.39,127.96,109.77,108.06,106.87,101.64,74.12,71.75,71.25,60.76,56.16,45.57,43.69,38本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物及其医药用途其特征在于：结构式为式(I)：

【技术特征摘要】
1.一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物及其医药用途其特征在于：结构式为式(I)：其中，n代表：1、2、3、4或5。2.一氧化氮供体型鬼臼毒素衍生物中通式(I)化合物的制备方法，其特征包括：其中n的定义同权利要求1；即n代表：1、2、3、4或5；其中a～b代表反应条件：a：试剂为氯代酰氯；溶剂为四氢呋喃或二氯甲烷；缚酸剂为碳酸钾或三乙胺；反应温度为15～35℃；b：试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：王京，张磊，龙丽文，徐应淑，陈永正，杨成莉，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52