质谱法检测淀粉状蛋白β制造技术

提供了用于检测或定量淀粉状蛋白β的方法。在具体的方面，本文提供了通过质谱法检测淀粉状蛋白β或其片段的方法。在另一方面，本文提供了用于测定淀粉状蛋白β42(Aβ42)与淀粉状蛋白β40(Aβ40)的比率的方法。在另一方面，本文提供了用于诊断或预后阿耳茨海默病或痴呆的方法。

Detection of amyloid beta protein by mass spectrometry

A method for detecting or quantifying amyloid beta is provided. In specific aspects, this paper provides a method to detect amyloid beta or its fragments by mass spectrometry. On the other hand, this paper provides a method for the determination of the ratio of amyloid beta 42 (A beta 42) and amyloid beta 40 (A beta 40). On the other hand, this article provides a method for diagnosis or prognosis of Alzheimer's disease or dementia.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】质谱法检测淀粉状蛋白β相关专利申请的交叉引用本申请要求2015年9月28日提交的美国临时申请号62/234,027和2016年1月12日提交的美国临时申请号62/277,772的权益，其每个通过引用以其全部并入本文。
本专利技术涉及淀粉状蛋白β的检测或定量。在具体的方面，本专利技术涉及通过质谱法检测淀粉状蛋白β或其片段的方法。
技术介绍
阿耳茨海默病是影响老年人群的最常见形式的痴呆。阿耳茨海默病的特征在于认知能力，具体而言，记忆和学习的进行性衰退。该疾病的标志之一是由淀粉状蛋白β(Aβ或Abeta)肽组成的神经炎性斑块。当前的预测或诊断阿耳茨海默病的临床诊断方法的准确度和灵敏度低。当前提供免疫试验以检测淀粉状蛋白β，其是预测进展至阿耳茨海默病的生物标志物。然而，值得关注的是使用当前可用的免疫试验观察到的结果中的实验室间变化。需要用于检测淀粉状蛋白β的准确的和灵敏的试验。
技术实现思路
本文提供了通过质谱法——包括串联质谱法——检测或测定样品中淀粉状蛋白β(Aβ)的量的方法。在某些实施方式中，本文提供的用于测定淀粉状蛋白β的量的方法包括(a)纯化样品中的淀粉状蛋白β；(b)电离样品中的淀粉状蛋白β；和(c)通过质谱法测定淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量；其中淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量与样品中淀粉状蛋白β的量相关。在某些实施方式中，本文提供的用于测定淀粉状蛋白β的量的方法包括(a)纯化样品中的淀粉状蛋白β；(b)电离样品中的淀粉状蛋白β以产生淀粉状蛋白β的先驱离子；(c)生成淀粉状蛋白β的一种或多种碎片离子；和(d)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；其中淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量与样品中淀粉状蛋白β的量相关。在某些实施方式中，本文提供的用于测定淀粉状蛋白β的量的方法包括(a)消化样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β的一种或多种片段；(b)纯化一种或多种淀粉状蛋白β片段；(c)电离一种或多种淀粉状蛋白β片段以产生先驱离子；(d)生成一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；其中离子(一种多种)的量与样品中淀粉状蛋白β片段(一种多种)的量相关。在某些实施方式中，本文提供了用于测定淀粉状蛋白β42(Aβ42)的量的方法。在一些实施方式中，Aβ42片段包括序列GAIIGLMVGGVVIA(SEQIDNO:4)。在一些实施方式中，方法包括(a)消化样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β42(Aβ42)；(b)纯化Aβ42；(c)电离Aβ42以产生先驱离子；(d)生成Aβ42的一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；其中离子(一种多种)的量与样品中Aβ42的量相关。在某些实施方式中，本文提供了用于测定淀粉状蛋白β40(Aβ40)的量的方法。在一些实施方式中，Aβ40片段包括序列GAIIGLMVGGVV(SEQIDNO:2)。在一些实施方式中，方法包括(a)消化样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β40(Aβ40)；(b)纯化Aβ40；(c)电离Aβ40以产生先驱离子；(d)生成Aβ40的一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；其中离子(一种多种)的量与样品中Aβ40的量相关。在某些实施方式中，本文提供了用于测定淀粉状蛋白β42(Aβ42)和淀粉状蛋白β40(Aβ40)的量的方法。在一些实施方式中，方法包括(a)消化样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β42(Aβ42)和淀粉状蛋白β40(Aβ40)；(b)纯化Aβ42和Aβ40；(c)电离Aβ42和Aβ40以产生先驱离子；(d)生成Aβ42和Aβ40的一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；其中离子(一种多种)的量与样品中Aβ42和Aβ40的量相关。在某些实施方式中，本文提供了用于测定淀粉状蛋白β42(Aβ42)与淀粉状蛋白β40(Aβ40)的比率的方法。在一些实施方式中，方法包括(a)消化样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β42(Aβ42)和淀粉状蛋白β40(Aβ40)；(b)纯化Aβ42和Aβ40；(c)电离Aβ42和Aβ40以产生先驱离子；(d)生成Aβ42和Aβ40的一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的离子(一种或多种)的量；和(f)测定Aβ42与Aβ40的比率。在一些实施方式中，方法包括测定Aβ40与Aβ42的比率。在某些实施方式中，本文提供了阿耳茨海默病或痴呆的诊断或预后方法，方法包括通过质谱法测定测试样品中淀粉状蛋白β的量；其中异常水平的淀粉状蛋白β预测或诊断阿耳茨海默病。在一些实施方式中，方法可以包括：(a)纯化样品中的淀粉状蛋白β；(b)电离样品中的淀粉状蛋白β；和(c)通过质谱法测定淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量；和(d)淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量与样品中淀粉状蛋白β的量相关；其中异常水平的淀粉状蛋白β预测或诊断阿耳茨海默病。在一些实施方式中，方法包括测定淀粉状蛋白β片段的比率。在一些实施方式中，方法包括测定淀粉状蛋白β42(Aβ42)与淀粉状蛋白β40(Aβ40)的比率。在一些实施方式中，方法包括测定淀粉状蛋白β42(Aβ40)与淀粉状蛋白β40(Aβ42)的比率。在某些实施方式中，本文提供的方法包括预处理与样品接触的器材的表面。在一些实施方式中，预处理包括使用防止淀粉状蛋白β或其片段粘附至表面的试剂预涂覆器材的表面。在一些实施方式中，预处理包括细菌溶胞产物预处理。在一些实施方式中，预处理包括大肠杆菌溶胞产物预处理。在一些实施方式中，大肠杆菌溶胞产物包括胰蛋白酶消化的大肠杆菌溶胞产物。在一些实施方式中，预处理的器材包括但不限于试管或平板、吸管端(pipettetip)、样品制备设备、液相色谱设备、和质谱设备。在某些实施方式中，本文提供的方法包括使用稳定淀粉状蛋白β或其片段的试剂处理或培育样品。在一些实施方式中，本文提供的方法包括使用淀粉状蛋白β抗体处理或培育样品。在一些实施方式中，本文提供的方法包括使用至少两种不同的淀粉状蛋白β抗体处理或培育样品。在一些实施方式中，淀粉状蛋白β抗体包括结合至淀粉状蛋白β的C-端的抗体。在一些实施方式中，淀粉状蛋白β抗体包括结合至淀粉状蛋白β的N-端的抗体。在一些实施方式中，稳定淀粉状蛋白β的试剂包括载脂蛋白。在一些实施方式中，稳定淀粉状蛋白β的试剂包括载脂蛋白E2。在一些实施方式中，稳定淀粉状蛋白β的试剂包括载脂蛋白E4。在一些实施方式中，稳定淀粉状蛋白β的试剂包括结合至淀粉状蛋白β的C-端的抗体、结合至淀粉状蛋白β的N-端的抗体、载脂蛋白E2、载脂蛋白E4、或其组合。在一些实施方式中，本文提供的稳定淀粉状蛋白β的试剂给予-70℃下至少1个月的稳定性。在一些实施方式中，本文提供的稳定淀粉状蛋白β的试剂给予-70℃下至少2个月的稳定性。在一些实施方式中，本文提供的稳定淀粉状蛋白β的试剂给予-70℃下至少3个月的稳定性。在一些实施方式中，本文提供的稳定淀粉状蛋白β的试剂给予通过冻融循环的稳定性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于测定样品中淀粉状蛋白β的量的方法，所述方法包括：(a)纯化所述样品中的淀粉状蛋白β；(b)电离所述样品中的淀粉状蛋白β以产生淀粉状蛋白β的先驱离子；(c)生成淀粉状蛋白β的一种或多种碎片离子；和(d)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的所述离子(一种或多种)的量；其中所述淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量与所述样品中淀粉状蛋白β的量相关。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.28 US 62/234,027;2016.01.12 US 62/277,7721.用于测定样品中淀粉状蛋白β的量的方法，所述方法包括：(a)纯化所述样品中的淀粉状蛋白β；(b)电离所述样品中的淀粉状蛋白β以产生淀粉状蛋白β的先驱离子；(c)生成淀粉状蛋白β的一种或多种碎片离子；和(d)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的所述离子(一种或多种)的量；其中所述淀粉状蛋白β离子(一种或多种)的量与所述样品中淀粉状蛋白β的量相关。2.权利要求1所述的方法，其中所述纯化包括液相色谱法。3.权利要求2所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。4.权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括C-4分析柱。5.权利要求1所述的方法，进一步包括使用防止淀粉状蛋白β粘附至表面的试剂预处理与所述样品接触的器材的所述表面。6.权利要求5所述的方法，其中所述试剂是大肠杆菌溶胞产物。7.权利要求1所述的方法，进一步包括使用稳定淀粉状蛋白β的试剂培育所述样品。8.权利要求7所述的方法，其中所述试剂包括结合至淀粉状蛋白β的C-端的抗体、结合至淀粉状蛋白β的N-端的抗体、载脂蛋白E2、载脂蛋白E4、或其组合。9.权利要求7所述的方法，其中所述试剂给予通过至少三个冻融循环的稳定性。10.权利要求7所述的方法，其中所述试剂给予-70℃下至少2个月的稳定性。11.权利要求1所述的方法，其中所述方法包括混合模式阴离子交换提取。12.权利要求1所述的方法，其中所述电离包括加热电喷雾电离(HESI)。13.权利要求1所述的方法，其中所述电离包括以正模式进行电离。14.权利要求1所述的方法，其中所述生成碎片离子包括使用20V至45V之间的碰撞能量。15.权利要求1所述的方法，其中所述淀粉状蛋白β包括具有序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV(SEQIDNO:1)的Aβ40或具有序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQIDNO:3)的Aβ42。16.权利要求1所述的方法，进一步包括添加内标。17.权利要求16所述的方法，其中所述内标是同位素标记的。18.权利要求17所述的方法，其中所述内标包括13C15N标记。19.权利要求1所述的方法，其中所述方法的定量限小于或等于10ng/mL。20.权利要求1所述的方法，其中所述样品是脑脊液(CSF)。21.用于测定样品中淀粉状蛋白β的量的方法，所述方法包括：(a)消化所述样品中的淀粉状蛋白β以生成淀粉状蛋白β的一种或多种片段；(b)纯化所述一种或多种淀粉状蛋白β片段；(c)电离所述淀粉状蛋白β片段(一种多种)以产生先驱离子；和(d)生成一种或多种碎片离子；和(e)通过质谱法测定来自步骤(c)或(d)或二者的所述离子(一种或多种)的量；其中所述离子(一种或多种)的量与所述样品中淀粉状蛋白β片段(一种多种)的量相关。22.权利要求21所述的方法，其中所述纯化包括液相色谱法。23.权利要求22所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。24.权利要求21所述的方法，其中所述方法进一步包...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·陈，D·韦伯，N·克拉克，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US