多重患者样品中的睾丸酮的质谱法测定制造技术

本文提供了利用不同质量的至少两种不同的衍生化试剂高通量定量睾丸酮的方法。在另一个方面，本文提供了用单一质谱测定法确定多个人类样品的每个中的睾丸酮的量的方法，其通过使多个人类样品的每个经受不同的衍生化试剂以在多个样品的每个中生成不同衍生化的睾丸酮；将多个样品组合以形成多重样品；并且通过质谱法定量每个样品中的睾丸酮的量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多重患者样品中的睾丸酮的质谱法测定相关专利申请的交叉引用本申请要求2018年3月16日提交的美国临时申请号62/644,351的权益，其通过引用以其整体并入本文。
技术介绍
睾丸酮(4-雄烯-17β-醇-3-酮)是类固醇激素，并且是男性中的主要雄激素。男性睾丸酮降低的主要原因包括低促性腺素性功能减退症、睾丸衰竭、高泌乳素血症、垂体机能减退、一些类型的肝肾疾病和严重疾病。在女性中，正常水平的雄激素可以提供雌激素产生的底物。女性的血清睾丸酮水平升高可能表明多囊卵巢综合征和肾上腺增生以及其他病况。女性睾丸酮过多的临床表现包括不孕、多毛症、闭经和肥胖。需要准确且有效地测量睾丸酮。
技术实现思路
本文提供了利用至少两种不同质量的不同衍生化试剂对睾丸酮进行高通量定量的方法。在某些实施方式中，本文提供了在一次质谱测定法中检测多个患者样品的每个中的睾丸酮的量的方法。该方法包括不同地处理每个患者样品以形成多个处理的样品，其中，由于处理，可通过质谱法将每个处理的样品中的睾丸酮与其他处理的样品中的睾丸酮区分开；将该处理的样品组合以形成多重样品；使该多重样品在适于生成通过质谱法可检测的一种或多种离子的条件下经受电离源，其中由来自每个处理的样品的睾丸酮生成的一种或多种离子不同于来自其他处理的样品的睾丸酮的一种或多种离子；通过质谱法检测来自每个处理的样品中的睾丸酮的一种或多种离子的量；并且将来自每个处理的样品中的睾丸酮的一种或多种离子的量与每个患者样品中睾丸酮的量相关联。在某些实施方式中，本文提供的方法包括用单次质谱测定法确定多个人类样品的每个中睾丸酮的量，该方法包括：i)使该多个人类样品中的每个经受不同衍生化试剂以在该多个样品的每个中生成不同衍生化的睾丸酮；ii)将该多个样品组合以形成多重样品；并且iii)通过质谱法对每个样品中睾丸酮的量进行定量。在一些实施方式中，本文提供的方法包括用单次质谱测定法确定两个人类样品中睾丸酮的量，该方法包括：i)使两个人类样品的每个经受不同的衍生化试剂以在两个样品的每个中生成不同衍生化的睾丸酮；ii)将该两个样品组合以形成多重样品；并且iii)通过质谱法对每个样品中睾丸酮的量进行定量。在某些实施方式中，本文提供的衍生化试剂包括羟胺或甲氧基胺。在一些实施方式中，本文提供的方法是完全自动化的。在一些实施方式中，本文提供的方法是无抗体的方法。在一些实施方式中，本文提供的纯化包括使用固相提取(SPE)提取血清。在一些实施方式中，SPE是阴离子交换固相提取。在一些实施方式中，SPE是混合模式阴离子交换固相提取。在一些实施方式中，将所提取的样品浓缩。在一些实施方式中，本文提供的纯化包括液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。在一些实施方式中，液相色谱法包括高湍流液相色谱法(HTLC)。在优选的实施方式中，电离包括加热电喷雾电离(HESI)。在优选的实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。在一些实施方式中，电离包括大气压化学电离(APCI)。在一些实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。在一些实施方式中，本文提供的方法包括对于羟胺衍生化的睾丸酮，测量质荷比为304.18±0.5的前体离子的量。在一些实施方式中，本文提供的方法包括对于甲氧基胺衍生化的睾丸酮，测量质荷比为318.21±0.5的前体离子的量。在一些实施方式中，本文提供的方法包括对于羟胺衍生化的睾丸酮，测量质荷比为112.05±0.5或124.05±0.5的碎片离子的量。在一些实施方式中，本文提供的方法包括对于甲氧基胺衍生化的睾丸酮，测量质荷比为126.07±0.5、138.07±0.5或152.08±0.5的碎片离子的量。在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括添加内标。在一些实施方式中，该内标被同位素标记。在一些实施方式中，本文提供的方法包括测量质荷比为307.19±0.5(羟胺衍生化)或321.21±0.5(甲氧基胺衍生化)的内标前体离子和/或质荷比为127.06±0.5(羟胺衍生化)或129.07±0.5(甲氧基胺衍生化)的产物离子的量。在某些实施方式中，本文提供的样品多重化比单一测定或色谱柱多重化快至少2倍。在某些实施方式中，本文提供的样品多重化比单一测定快至少3倍。在某些实施方式中，本文提供的样品多重化比单一测定快至少4倍。在某些实施方式中，该方法的定量限小于或等于10ng/dL。在一些实施方式中，该方法的定量限小于或等于5ng/dL。在一些实施方式中，该方法的定量限小于或等于4ng/dL。在一些实施方式中，该方法的定量限小于或等于3ng/dL。在一些实施方式中，该方法的定量限小于或等于2ng/dL。在一些实施方式中，该方法的定量限小于或等于1ng/dL。在一些实施方式中，本文提供的方法包括在2.5ng/dL至2,000ng/dL范围内的定量线性。在一些实施方式中，本文提供的方法包括在1ng/dL至2,000ng/dL范围内的定量线性。在一些实施方式中，本文提供的方法包括在8至1,200ng/dL下1％至11％或1％至9％或2％或11％的测量不精确度(CV)。在一些实施方式中，本文提供的方法包括95％和105％之间或90％至110％之间的回收率。在一些实施方式中，本文提供的方法包括高达10,000ng/dL的临床可报告范围(CRR)。在某些实施方式中，样品是体液。在一些实施方式中，样品是血浆或血清。在一些实施方式中，样品是全血。在一些实施方式中，样品是唾液或尿液。在一些实施方式中，样品是脑脊液(CSF)。在一些实施方式中，方法可以包括将试剂以足使样品脱蛋白的量添加至该样品。合适的测试样品包括可能含有目标分析物的任何测试样品。在一些优选的实施方式中，样品是生物样品；即，从任何生物来源，比如动物、细胞培养物、器官培养物等获得的样品。在某些优选的实施方式中，样品从哺乳动物比如狗、猫、马等获得。特别优选的哺乳动物是灵长类，最优选的是男性或女性人类。特别优选的样品包括血液、血浆、血清、毛发、肌肉、尿液、唾液、泪液、脑脊液或其他组织样品。这种样品，例如，可以从患者获得；即，活着的人，男性或女性，其为了疾病或病况的诊断、预后或治疗而将自身置于临床环境中。测试样品优选地从患者，例如，血清获得。如本文所使用，除非另有说明，否则单数形式“一个(a、an)”和“所述(the)”包括复数引用。因而，例如，提及“一种蛋白”的包括多种蛋白分子。如本文所使用，术语“纯化(purification)”或“纯化(purifying)”不是指从样品去除除了目标分析物(一种或多种)以外的所有材料。相反，纯化是指相对于样品中可能干扰目标分析物的检测的其他成分富集一种或多种目标分析物的量的步骤。本文通过各种方式纯化样品，以使得能够去除一种或多种干扰物质，例如，将会干扰通过质谱法检测所选的T母离子和子离子的一种或多种物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用单次质谱测定法确定多个人类样品的每个中的睾丸酮的量的方法，所述方法包括：/ni)使多个人类样品的每个经受不同的衍生化试剂以在所述多个样品的每个中生成不同衍生化的睾丸酮；/nii)将所述多个样品组合以形成多重样品；和/niii)通过质谱法定量每个样品中所述睾丸酮的量。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180316 US 62/644,3511.一种用单次质谱测定法确定多个人类样品的每个中的睾丸酮的量的方法，所述方法包括：
i)使多个人类样品的每个经受不同的衍生化试剂以在所述多个样品的每个中生成不同衍生化的睾丸酮；
ii)将所述多个样品组合以形成多重样品；和
iii)通过质谱法定量每个样品中所述睾丸酮的量。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述衍生化试剂选自氯化羟胺和氯化甲氧基胺。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括液相色谱法。


4.根据权利要求3所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。


5.根据权利要求3所述的方法，其中所述液相色谱法包括高湍流液相色谱法(HTLC)。


6.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括加热电喷雾电离(HESI)。


7.根据权利要求6所述的方法，其中所述电离是正离子模式。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括测量质荷比选自304.18±0.5和318.21±0.5的一种或多...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·M·戈尔德曼，S·戈尔德曼，J·科莱蒂，N·克拉克，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US