用于治疗补体介导的疾病的组合物和方法技术

提供了具有表达盒的重组载体，所述表达盒包含修饰的人因子H(hfH)基因，其中所述hfH基因编码hfH蛋白变体，所述hfH蛋白变体包含SCR1‑4、19‑20和以下的一个或多个：SCR7、SCR17和/或SCR18。也提供了包含该载体的药物组合物及其在治疗AMD和/或其它补体相关疾病中的用途。

Compositions and methods for the treatment of complement mediated diseases

The expression box is provided with a recombinant vector containing the modified human factor H (hfH) gene, in which the hfH gene encodes a variant of hfH protein, and the hfH protein variant contains one or more of SCR1 4, 19, 20 and below: SCR7, SCR17 and / or SCR18. Pharmaceutical compositions containing the carrier and their use in the treatment of AMD and / or other complement related diseases are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗补体介导的疾病的组合物和方法关于联邦资助的研究或开发的声明本专利技术是在国立卫生研究院奖励的补助金No.AI085596下通过政府支持完成的。政府在本专利技术中具有某些权利。专利技术背景补体系统是在宿主防御中起关键作用的先天免疫的一部分。补体可以由三种不同的途径，即经典、旁路和凝集素途径活化。在它们中，旁路途径是独特的，因为它不仅代表一种独立的途径，通过该途径，补体通过“慢速运转（tick-over）”机制被活化，而且它也放大由另外两种途径起始的补体活化。旁路途径要求C3、因子B(fB)、因子D(fD)和备解素(fP)的参与。所有途径在C3活化步骤汇合，由此旁路途径放大环开始起作用。无论发生哪种途径的补体活化，活化的补体产生三种类型的效应物功能：用C3b/iC3b/C3d对靶的调理作用，以促进吞噬作用和清除、促炎介质C3a和C5a的产生，以及通过终末补体活化效应物C5b-9，也称作膜攻击复合物(MAC)的直接细胞攻击。通过B细胞和小结树突细胞上的补体受体(CRs)如CR2，以及白细胞如巨噬细胞和单核细胞上的过敏毒素受体C3a受体(C3aR)和C5a受体(C5aR)的活化，补体也与适应性免疫系统相互作用并交叉调节适应性免疫系统，并由此在B和T细胞免疫中起调节作用。许多人类疾病是由补体失调导致的，所述补体失调导致补体介导的自体组织损伤。补体失调可以产生自补体调节物或调节物相关基因中的体细胞或种系突变，所述突变使得这些调节物不再正常起作用。这种类型的实例包括造血干细胞中编码GPI锚生物合成中的关键酶的PIG-A基因的突变，并且所述突变导致阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者的血细胞上DAF和CD59的表达缺乏。因此，PNH患者的红细胞和血小板不能受到保护以避免补体攻击，并且他们发生血管内溶血和血小板活化，导致贫血和血栓形成发作。第二个实例是膜调节物MCP或液相调节物fH或fI中的突变，其使得肾中补体的旁路途径过度活化，导致C3肾小球病或非典型溶血尿毒综合征(aHUS)的发病机理。除了导致DAF、CD59、fH、fI和MCP的表达缺乏或功能障碍的这种罕见和高外显率突变（highpenetrantmutations），在fH中存在单核苷酸多态性(SNP)，其更普遍且外显率更低，但仍然被鉴定出通过补体介导的机理促成疾病发病机理。一个非常充分表征的实例是fH中的Y420H多态性与年龄相关性黄斑变性(AMD)的强关联。因此，补体调节物功能障碍或序列变异可能导致常见以及罕见人类疾病。补体失调可能不仅产生自调节性突变/多态性，也产生自编码旁路途径的关键成分，即C3和fB的基因中的突变，以及由抗调节物或补体蛋白如fH、C3或fB的自身抗体的存在而产生。目前理解，C3或fB中的某些突变将得到当活化时形成异乎寻常稳定的旁路途径C3转化酶C3bBb的蛋白，所述C3转化酶C3bBb抗调节蛋白的调节，这继而会导致补体失调和过度活化。在抗补体调节物的自身抗体的情况下，它们通常模拟编码所述蛋白的基因中的突变，结果是所述蛋白在液相中或在细胞表面上的功能性效力降低。分开地，称作C3肾炎因子（C3nephriticfactors，C3nef）的抗C3b自身抗体能够结合和稳定所述旁路途径C3转化酶C3bBb，由此实现与C3或fB基因突变产生的作用相同的延长该转化酶的半衰期和活性的作用。总体上，存在由补体活化级联的失调引起的过度补体活化导致的常见和罕见人类疾病。补体失调的基础机理是可变的，一些是由于基因突变，另一些是由于自身抗体，并且突变的基因或自身抗体的靶可以是旁路途径的调节蛋白或成分。目前的治疗方法致力于开发结合并阻断特定旁路途径或终末途径（terminalpathway）补体成分的试剂例如mAbs、肽或其它小分子。一个临床上验证的实例是依库珠单抗（Eculizumab），即一种抗补体C5的人源化mAb，其已被批准用于PNH和aHUS的治疗。其它已被描述的方法包括抗fB、fD或fP的mAbs，和结合并抑制C3的环肽。这些方法的限制是它们需要患者的重复和不方便的IV给药。此外，由于它们阻断旁路途径或终末途径，它们具有损害宿主防御的风险。实际上，进行依库珠单抗治疗的患者必须进行针对导致致死性脑膜炎的细菌菌株的接种，并且这些患者在用批准的mAb药物治疗前也进行预防性抗生素治疗。在其它方法中，测试了重组调节蛋白，如可溶性DAF、CR1、CRIg和包含fH的最小结构域（N末端短共有重复序列[SCR]1-5和C末端SCR19-20）的蛋白或fH和CR2之间的融合蛋白(TT30)。参见，例如，美国专利公开号US2013/0296255；美国专利公开号2008/0221011。但是，所述蛋白作为治疗性药物的大规模异源表达需要显著的努力，并且动物研究显示了它们在施用之后的体内清除速度快(NicholsEM,BarbourTD,PappworthIY,WongEK,PalmerJM,SheerinNS,PickeringMC,MarchbankKJ.KidneyInt.2015Jul29.doi:10.1038/ki.2015.233.;Fridkis-HareliM,StorekM,MazsaroffI,RisitanoAM,LundbergAS,HorvathCJ,HolersVM,Blood.2011Oct27;118(17):4705-13.doi:10.1182/blood-2011-06-359646.Epub2011Aug22.)，使得所述治疗策略麻烦和较不实用，因为将需要多次和频繁施用所述蛋白药物。本领域仍然需要可用于以更高和持续时间更长的效力治疗补体介导的疾病的组合物。专利技术概述一方面，本专利技术提供重组载体，其中包装了表达盒，所述表达盒包含工程化的人补体调节因子H(fH)基因，所述基因可操作性连接于指导其表达的表达控制序列，其中所述hfH基因编码保持补体调节功能的可溶性hfH蛋白变体，其中所述fH变体包含短共有重复序列(shortconsensusrepeat，SCR)1、2、3、4、19和20，以及以下的至少一个：SCR7、SCR17和/或SCR18，其中在给受试者施用所述载体并表达之后，所述hfH变体的可检测血浆水平在所述受试者中存在至少一周。另一方面，本专利技术提供重组AAV载体，其中包装了表达盒，所述表达盒包含工程化的人补体调节因子H(fH)基因，所述基因可操作性连接于指导其表达的表达控制序列，其中所述hfH基因编码保持补体调节功能的可溶性hfH蛋白变体，其中所述fH变体包含短共有重复序列(SCR)1、2、3、4、19和20，其中在给受试者施用所述载体并表达之后，所述hfH变体的可检测的治疗上有用的血浆水平在所述受试者中存在至少约一个月。另一方面，提供了药物组合物，其包含载体(carrier)和/或赋形剂和本文描述的重组载体（vector），所述重组载体表达fH变体。另一方面，提供了用于通过给受试者送递本文描述的载体而治疗补体相关病症的方法。补体相关病症可以是膜性增生性肾小球肾炎、非典型溶血尿毒综合征(aHUS)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、微血管病性溶血性贫血、血小板减少症、急性肾功能衰竭、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、精神本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组载体，其中包装了表达盒，所述表达盒包含工程化的人补体调节因子H(hfH)基因，所述基因可操作性连接于指导其表达的表达控制序列，其中所述hfH基因编码保持补体调节功能的可溶性hfH蛋白变体，其中所述fH变体包含：短共有重复序列(SCR) 1、2、3、4、19、20和以下的一个或多个：SCR7、17和/或18，其中在给受试者施用所述载体并表达之后，所述hfH变体的可检测血浆水平在所述受试者中存在至少一周。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.24 US 62/2320081.重组载体，其中包装了表达盒，所述表达盒包含工程化的人补体调节因子H(hfH)基因，所述基因可操作性连接于指导其表达的表达控制序列，其中所述hfH基因编码保持补体调节功能的可溶性hfH蛋白变体，其中所述fH变体包含：短共有重复序列(SCR)1、2、3、4、19、20和以下的一个或多个：SCR7、17和/或18，其中在给受试者施用所述载体并表达之后，所述hfH变体的可检测血浆水平在所述受试者中存在至少一周。2.权利要求1的重组载体，其中所述hfH变体进一步包含另外的hfHSCR，所述另外的hfHSCR由SCR5、SCR6、SCR8、SCR16或其组合组成。3.权利要求1或2的重组载体，其中所述fH基因缺乏至少SCR5、SCR9、SCR10、SCR11、SCR12、SCR13、SCR14和/或SCR15的编码序列。4.权利要求1的重组载体，其中所述fH变体在一个或多个所述SCRs中包含至少一个糖基化位点。5.权利要求1的重组载体，其中所述fH变体包含选自以下的一个或多个的SCR结构域的组合：(a)SCR1、2、3、4、7和19-20;(b)SCR1-4、6、7和19-20;(c)SCR1-4、7、8和19-20;(d)SCR1-4、6、7、8和19-20;(e)SCR1-4、17、19-20;(f)SCR1-4和18-20;(g)SCR1-4和17-20;(h)SCR1-4、7和18-20;(i)SCR1-4、6、7和18-20;(j)SCR1-4、7、8和18-20;(k)SCR1-4、6-8和18-20,(l)SCR1-4、7和17-20;(m)SCR1-4、6、7和17-20;(n)SCR1-4、7、8和17-20；或(o)SCR1-4、6-8和17-20。6.权利要求5的重组载体，其中表达的hfH变体具有图4的氨基酸序列[SEQIDNO:43]。7.权利要求1-6的任一项的重组载体，其中所述载体选自腺伴随病毒载体、腺病毒载体、RNA病毒载体、慢病毒载体和痘苗病毒载体。8.重组AAV载体，其中包装了表达盒，所述表达盒包含工程化的人补体调节因子H(fH)基因，所述基因可操作性连接于指导其表达的表达控制序列，其中所述hfH基因编码保持补体调节功能的可溶性hfH蛋白变体，其中所述fH变体包含：短共有重复序列(SCR)1、2、3、4、19和20，其中在给受试者施用所述载体并表达之后，所述hfH变体的可检测的治疗上有用的血浆水平在所述受试者中存在至少约一个月。9.权利要求8的重组载体，其中所述hfH变体的可检测的血浆水平存在至少约6个月。10.权利要求8的重组载体，其中可检测的血浆水平存在至少约10个月。11.权利要求8的重组AAV载体，其中所述fH变体进一步包含另外的hfHSCR，所述另外的hfHSCR由(a)SCR7、SCR17和/或SCR18和(b)以下的至少一个：SCR6、SCR8和SCR16，或其组合组成。12.权利要求11的重组AAV载体，其中所述hfH变体包含SCR结构域SCR1-4、7、19和20。13.权利要求12的重组AAV载体，其中所述hfH变体包含位于一个或多个所述SCRs之间的至少一个1至约18个氨基酸的接头。14.权利要求13的重组AAV载体，其中所述hfH变体包含SCR1-(L1)-SCR2-(L2)-SCR3-(L3)-SCR4-(L4)-(SCR6-(L4'))-SCR7-(L5)-(SCR8-(L5'))-(SCR16-(L5"))-(SCR17-(L5"'))-(SCR18-(L5""))-SCR19-(L6)-SCR20，其中()表示任选的成分，"L"是指接头，且L1、L2、L3、L4、L4'、L5、L5'、L5"、L5"'、L5""和L6中的每一个可以不存在或独立地选自约1至约12至约18个氨基酸的氨基酸序列。15.权利要求8-14的任一项的重组AAV载...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋文超，D古利帕利，三轮隆史，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：美国,US