多肽变体制造技术

本发明专利技术涉及多肽变体以及用于获得变体的方法。本发明专利技术还涉及编码这些变体的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

Polypeptide variant

The present invention relates to polypeptide variants and methods for obtaining variants. The invention also relates to polynucleotides encoding these variants; nucleic acid constructs, vectors, and host cells containing these polynucleotides; and methods for the use of these variants.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多肽变体序列表的引用本申请包括处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及相对于亲本DNA酶在一种或多种特性中展示出改变的新颖DNA酶变体，所述特性包括：清洗性能、洗涤剂稳定性和/或储存稳定性。本专利技术的变体适合用于在清洁过程和洗涤剂组合物中使用，如洗衣组合物和餐具清洗组合物，包括手洗和自动餐具清洗组合物。本专利技术还涉及编码这些变体的分离的DNA序列、表达载体、宿主细胞以及用于产生和使用本专利技术的DNA酶变体变体的方法。相关领域说明在许多自然、工业和医疗环境中，微生物一般附着于表面而生存，由包括生物聚合物和高分子的细胞外物质进行囊化。经粘液囊化的微生物所产生的层被称为生物膜。生物膜是细菌在自然环境中生长的主要模式，并且在生物膜中生长的细菌表现出独特的生理性质。与其浮游生长的对应物相比，生物膜中的细菌更耐受抗生素、UV照射、洗涤剂和宿主免疫应答。生物膜可以包括一种或多种微生物，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性菌、藻类、原生动物、和/或酵母或丝状真菌和病毒和/或噬菌体。有问题的生物膜的实例是牙菌斑，医学植入物的上的感染，还有船体上的初始污染。生物膜归因于人类许多感染的发病机理，并且就暴露面的生物污着而论在工业中是一项显著问题，其中生物膜定植可以形成能够破坏并且干扰工业方法和组分的局部生态系统的基础组分。当使用衣物(像T恤或运动衣)时，它们暴露于来自使用者的身体和来自它们使用的环境的其余部分的细菌。这些细菌中的一些能够粘附于衣物物品并且在该物品上形成生物膜。细菌的存在意味着，衣物物品变得粘稠，并且因此污垢粘附在粘稠区域上。这种污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物来去除。此外，当非常脏的衣物物品与不太脏的衣物物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污物倾向于附着于生物膜上。其结果是，该衣物物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。此外，这些细菌是难闻的气味的来源，在对衣物物品使用后产生难闻的气味。难闻的气味难以去除，并且即使在洗涤后仍可存在。这种难闻的气味的原因是细菌粘附到纺织品表面。由于粘附到纺织品上，即使洗涤后细菌仍可存在，并且继续成为难闻的气味的来源。国际专利申请WO2011/098579(纽卡斯尔大学(NewcastleUNIV.))和WO2014/087011(诺维信公司(NovozymesA/S))涉及细菌脱氧核糖核酸酶化合物以及用于破坏和预防生物膜的方法。
技术实现思路
本专利技术涉及与SEQIDNO:1相比具有至少一种改进的特性的DNA酶变体，该变体包含在选自以下列表的一个或多个位置处的修饰，该列表由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、185、186、187、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220和221，其中该变体具有与SEQIDNO:1具有至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％一致的氨基酸序列。本专利技术进一步涉及与SEQIDNO:1具有至少60％一致性的DNA酶亲本的变体，其中与SEQIDNO:1相比，所述变体包含以下修饰中的至少一个：V1*、V1A、V1D、V1E、V1F、V1G、V1H、V1I、V1K、V1L、V1M、V1N、V1P、V1Q、V1R、V1S、V1T、V1W、V1Y、P2*、P2A、P2D、P2E、P2F、P2G、P2H、P2I、P2K、P2L、P2M、P2N、P2Q、P2R、P2S、P2T、P2V、P2W、P2Y、V3*、V3A、V3C、V3D、V3E、V3F、V3G、V3H、V3I、V3K、V3L、V3M、V3N、V3P、V3R、V3S、V3T、V3W、V3Y、N4*、N4A、N4D、N4E、N4F、N4G、N4H、N4I、N4K、N4L、N4M、N4P、N4Q、N4R、N4S、N4T、N4V、N4W、N4Y、P5*、P5A、P5D、P5E、P5F、P5G、P5H、P5I、P5K、P5L、P5M、P5N、P5Q、P5R、P5S、P5T、P5V、P5W、P5Y、E6*、E6A、E6D、E6F、E6G、E6H、E6I、E6K、E6L、E6M、E6N、E6P、E6Q、E6R、E6S、E6T、E6V、E6W、E6Y、P7*、P7A、P7D、P7E、P7F、P7G、P7H、P7I、P7K、P7L、P7M、P7N、P7Q、P7R、P7S、P7T、P7V、P7W、P7Y、D8*、D8A、D8E、D8F、D8G、D8H、D8I、D8K、D8L、D8M、D8N、D8P、D8Q、D8R、D8S、D8T、D8V、D8W、D8Y、A9*、A9D、A9E、A9F、A9G、A9H、A9I、A9K、A9L、A9M、A9N、A9P、A9Q、A9R、A9S、A9T、A9V、A9W、A9Y、T10*、T10A、T10D、T10E、T10F、T10G、T10H、T10I、T10K、T10L、T10M、T10N、T10P、T10Q、T10R、T10S、T10V、T10W、T10Y、S11*、S11A、S11D、S11E、S11F、S11G、S11H、S11I、S11K、S11L、S11M、S11N、S11P、S11Q、S11R、S11T、S11V、S11W、S11Y、V12*、V12A、V12D、V12E、V12F、V12G、V12H、V12I、V12K、V12L、V12M、V12N、V12P、V12Q、V12R、V12S、V12T、V12W、V12Y、E13*、E13A、E13D、E13F、E13G、E13H、E13I、E13K、E13L、E13M、E13N、E1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA酶变体，其包括在对应于以下位置的一个或多个位置处的取代：SEQ ID NO:1的4、17、19、19、19、36、38、39、39、40、40、41、41、45、51、53、53、54、55、57、64、64、64、64、64、64、66、67、67、68、68、68、68、69、69、69、69、69、69、69、69、70、70、70、71、72、74、74、75、77、82、82、83、83、83、83、83、84、85、85、85、86、86、86、88、88、91、99、101、105、105、105、105、106、115、116、135、136、138、138、138、138、139、140、140、140、141、151、152、152、152、152、153、154、162、163、164、166、166、168、169、169、173、173、173、182、183、184、185、186、189、189、212、212和215，其中该变体与SEQ ID NO:1中显示的多肽具有至少80％的序列一致性，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中与SEQ ID NO 1相比，该变体具有改进的稳定性。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.14 DK PA2015006321.一种DNA酶变体，其包括在对应于以下位置的一个或多个位置处的取代：SEQIDNO:1的4、17、19、19、19、36、38、39、39、40、40、41、41、45、51、53、53、54、55、57、64、64、64、64、64、64、66、67、67、68、68、68、68、69、69、69、69、69、69、69、69、70、70、70、71、72、74、74、75、77、82、82、83、83、83、83、83、84、85、85、85、86、86、86、88、88、91、99、101、105、105、105、105、106、115、116、135、136、138、138、138、138、139、140、140、140、141、151、152、152、152、152、153、154、162、163、164、166、166、168、169、169、173、173、173、182、183、184、185、186、189、189、212、212和215，其中该变体与SEQIDNO:1中显示的多肽具有至少80％的序列一致性，其中该变体具有DNA酶活性，并且其中与SEQIDNO1相比，该变体具有改进的稳定性。2.如权利要求1所述的DNA酶变体，其中该变体包括选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：N4E、L17E、T19A、T19G、T19I、K36P、Q38P、S39V、S39R、A40P、A40H、L41T、L41H、V45H、L51G、K53T、K53P、G54P、A55P、N57H、E64A、E64Q、E64R、E64T、E64I、E64S、T66H、K67A、K67T、N68V、N68P、N68I、N68H、S69A、S69D、S69E、S69K、S69L、S69W、S69Y、S69Q、N70T、N70H、N70G、R71T、D72E、S74H、S74G、G75I、N77T、K82P、K82I、D83T、D83P、D83I、D83H、D83G、P84H、Q85T、Q85P、Q85H、K86T、K86P、K86H、G88P、G88H、A91P、W99T、A101W、K105E、K105N、K105T、K105D、S106T、S115T、L116I、Q135L、G136L、V138I、V138L、V138P、V138Q、L139A、N140R、N140L、N140A、G141L、F151R、D152Y、D152L、D152I、D152A、P153E、S154R、T162R、W163E、F164R、I166Y、I166R、K168N、F169R、F169E、A173I、A173R、A173T、S182R、N183E、D184I、K185Y、S186I、D189G、D189H、K212G、K212P和K215I，其中这些位置对应于SEQIDNO1的位置。3.根据权利要求1或2所述的DNA酶变体，其中与在SEQIDNO:1中显示的多肽相比，该DNA酶变体具有至少为1.1；1.5；2.0；3.0、3.5、4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10的改进因子(IF)。4.如权利要求1-3中任一项所述的变体，其中该变体与SEQIDNO:1的成熟多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性。5.如权利要求1-4中任一项所述的变体，其中与SEQIDNO:1相比，改变的总数目是1-20个，例如1-10个和1-5个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。6.一种组合物，其包括根据权利要求1至5中任一项所述的DNA酶变体，其中该组合物包括：a)至少0.002ppmDNA酶变体，任选地b)2wt％至60wt％的至少一种表面活性剂，任选地c)5wt％至50wt％的至少一种助洗剂，和/或任选地至少一种另外的酶。7.如权利要求6所述的组合物，其中该组合物是洗涤剂组合物。8.根据权利要求6至7中任一项所述的组合物，其中该组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：LH奥斯特加德，GJ阿贝尔，DMK克利特加德，AH约翰森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK