【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脂肪酶变体、编码这些变体的多核苷酸以及产生所述变体的方法。本专利技术还涉及包含本专利技术的脂肪酶变体的组合物和微囊组合物以及包含本专利技术的微囊组合物的液体产品。
技术介绍
1、脂肪酶是重要的生物催化剂，其已经示出对于不同应用是有用的。以商品名lipolasetm出售的野生型疏棉状嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosus)(同义词疏棉状腐质霉(humicola lanuginosa))脂肪酶及其变体已被商业化为洗涤剂组合物中的活性成分，用于通过水解甘油三酯生成脂肪酸来去除脂质污渍。
2、洗涤剂、清洁和/或织物护理组合物包含干扰脂肪酶去除脂质污渍的能力的活性成分。具有良好洗涤性能的许多已知的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶变体在洗涤期间形成产生气味的短链脂肪酸和/或具有短的储存稳定性。
3、因此，仍然需要和期望具有改善的洗涤性能、减少的气味产生和/或改善的储存稳定性/更长的保存期限/增加的热稳定性的脂肪酶。
技术实现思路
1、本专利技术涉及亲本脂肪酶的变体，该变体具有脂肪酶活性，与seq id no:2具有至少60％但小于100％的序列同一性，并且包含在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、e56r、d57n、v60e,k、k98i、n101d、r118f、g163s、y220f、t231r、n233r、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
2、此外，本专利技术涉及包含本专利技术的脂肪酶变
3、在一方面，本专利技术涉及微囊组合物，其中该微囊的膜通过使具有高于1kda分子量的多支化的多胺交联而产生，其中该微囊包含本专利技术的脂肪酶变体。
4、在又一方面，本专利技术涉及微囊组合物，这些微囊组合物包含被截留在由膜形成的隔室中的本专利技术的脂肪酶变体，该膜通过使(a)具有高于800da分子量的多支化的多胺和(b)具有小于300da分子量的脂肪胺或芳香胺的交联而产生；其中(a)/(b)的重量比在0.1至1000的范围内。
5、最后，本专利技术涉及包含本专利技术的微囊组合物的液体产品。
6、定义
7、脂肪酶：术语“脂肪酶(lipase)”、“脂肪酶(lipase enzyme)”、“脂肪分解酶”、“脂质酯酶”、“脂解多肽”以及“脂解蛋白”是指如酶命名法所定义的ec3.1.1类中的酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，ec3.1.1.3)、角质酶活性(ec3.1.1.74)、固醇酯酶活性(ec3.1.1.13)和/或蜡酯水解酶活性(ec3.1.1.50)。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序确定脂肪酶活性。在一方面，本专利技术的变体具有至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％的seq id no:2的多肽的脂肪酶活性。
8、等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体位点的基因的两种或多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可能导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可能编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
9、cdna：术语“cdna”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mrna分子进行反转录而制备的dna分子。cdna缺乏可以存在于对应基因组dna中的内含子序列。初始的初级rna转录物是mrna的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mrna。
10、编码序列：术语“编码序列”意指多核苷酸，该多核苷酸直接规定了变体的氨基酸序列。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如atg、gtg或ttg)开始并且以终止密码子(例如taa、tag或tga)结束。编码序列可为基因组dna、cdna、合成dna或其组合。
11、控制序列：术语“控制序列”意指对于表达编码本专利技术的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是原生的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是原生的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区域连接的特异性限制位点的目的，控制序列可以提供有接头。
12、表达：术语“表达”包括涉及变体产生的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
13、表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状dna分子，该分子包含编码变体的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
14、片段：术语“片段”意指具有在多肽的氨基和/或羧基末端不存在的一个或多个(例如若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一方面，片段包含seq id no:2的氨基酸1至269的数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，但是小于100％。
15、高严格条件：术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准dna印迹程序，在42℃在5x sspe、0.3％ sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在65℃使用2x ssc、0.2％ sds将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。
16、宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本专利技术的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
17、改善的特性：术语“改进的特性”意指与相对于亲本脂肪酶有所改进的变体相关的特征。此类改进的特性包括但不限于洗涤剂稳定性、具有存在蛋白酶的洗涤剂中的稳定性、蛋白酶稳定性、化学稳定性、氧化稳定性、ph稳定性、储存条件下的稳定性、以及热稳定性。
18、分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括：(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然相本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种亲本脂肪酶的变体，该变体具有脂肪酶活性，与SEQ ID NO:2具有至少60％但小于100％的序列同一性，并且包含在对应于R118F、G23S、D27N、A40I、F51I,L、E56R、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F、T231R、N233R、T244E和P256T的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
2.如权利要求1所述的变体，其中该变体包含在对应于T231R+N233R的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、F51I,L、E56R、D57N、V60E,K、K98I、N101D、R118F、G163S、Y220F、T244E和P256T的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
3.如权利要求1或2所述的变体，该变体包含对应于以下组取代中的任一种的取代：
4.如权利要求1-3中任一项所述的变体，其中该变体包含对应于E56R+T231R+N233R的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、F51I,L、D57N、V60E,K、K98I、N101D、R118F、G163S、Y2
5.如权利要求1-4中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于R118F+T231R+N233R的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、F51I,L、E56R、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F、T244E和P256T的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
6.如权利要求1-5中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于E56R+R118F+T231R+N233R的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、F51I,L、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F、T244E和P256T的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
7.如权利要求1-6中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于E56R+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、F51I,L、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
8.如权利要求1-7中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于F51I,L+E56R+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
9.如权利要求1-8中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于G23S+F51I,L+E56R+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于D27N、A40I、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
10.如权利要求1-9中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于D27N+F51I,L+E56R+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、A40I、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
11.如权利要求1-10中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于A40I+F51I,L+E56R+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、D57N、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
12.如权利要求1-11中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于F51I,L+E56R+D57N+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、V60E,K、K98I、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
13.如权利要求1-12中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于F51I,L+E56R+D57N+K98I+R118F+T231R+N233R+P256T的位置处的取代以及在对应于G23S、D27N、A40I、V60E,K、N101D、G163S、Y220F和T244E的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
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【技术特征摘要】
1.一种亲本脂肪酶的变体，该变体具有脂肪酶活性，与seq id no:2具有至少60％但小于100％的序列同一性，并且包含在对应于r118f、g23s、d27n、a40i、f51i,l、e56r、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f、t231r、n233r、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
2.如权利要求1所述的变体，其中该变体包含在对应于t231r+n233r的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、e56r、d57n、v60e,k、k98i、n101d、r118f、g163s、y220f、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
3.如权利要求1或2所述的变体，该变体包含对应于以下组取代中的任一种的取代：
4.如权利要求1-3中任一项所述的变体，其中该变体包含对应于e56r+t231r+n233r的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、d57n、v60e,k、k98i、n101d、r118f、g163s、y220f、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
5.如权利要求1-4中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于r118f+t231r+n233r的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、e56r、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
6.如权利要求1-5中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于e56r+r118f+t231r+n233r的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f、t244e和p256t的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
7.如权利要求1-6中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于e56r+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、f51i,l、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
8.如权利要求1-7中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
9.如权利要求1-8中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于g23s+f51i,l+e56r+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于d27n、a40i、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
10.如权利要求1-9中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于d27n+f51i,l+e56r+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、a40i、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
11.如权利要求1-10中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于a40i+f51i,l+e56r+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、d57n、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
12.如权利要求1-11中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、v60e,k、k98i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
13.如权利要求1-12中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+k98i+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、v60e,k、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
14.如权利要求1-13中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+k98i+r118f+g163s+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、v60e,k、n101d、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
15.如权利要求1-14中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+k98i+r118f+g163s+t231r+n233r+t244e+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、v60e,k、n101d和y220f的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
16.如权利要求1-15中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+v60e,k+k98i+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
17.如权利要求1-16中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于f51i,l+e56r+d57n+n101d+k98i+r118f+t231r+n233r+p256t的位置处的取代以及在对应于g23s、d27n、a40i、v60e,k、n101d、g163s、y220f和t244e的位置处的一个或多个(例如若干个)取代。
18.如权利要求1-17中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于
19.如权利要求1-18中任一项所述的变体，其中该变体包含在对应于以下组取代之一的位置处的取代：
20.如权利要求1-19中任一项所述的变体，该变体是选自由以...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·D·G·P·托斯卡诺，T·A·波尔森，C·H·汉森，L·鲍恩斯加德，K·吉布森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：
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