ApoE基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及基因工程及分子生物学领域，一种ApoE基因检测引物组，包括rs429358引物组和rs7412引物组中的至少一种，所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段；所述rs7412引物组用于扩增含rs7412位点的核酸片段。本发明专利技术还提供了一种ApoE基因检测试剂盒和检测方法。采用本发明专利技术的ApoE基因检测引物组扩增含待测位点的核酸片段，降低了扩增多个靶位点的可能性，提高了对含待测位点的核酸片段扩增的特异性和灵敏度，降低了假阳性率；同时，采用第二代高通量基因测序技术，使得对待测位点的检测周期短，通量高。

【技术实现步骤摘要】
ApoE基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种ApoE基因引物组、检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
ApoE基因与多种心脑血管疾病密切相关，其编码的载脂蛋白E（ApolipoproteinE，ApoE）参与高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管疾病的整个发生发展过程，ApoE基因多态性是这些疾病早期及发展过程中个体差异的主要原因。根据ApoE表型提出ApoE基因模型，认为ApoE的合成是由位于一个基因位点上的三个等位基因所控制，即E2、E3和E4，每一个等位基因对应于一个主要异构体产生三种纯合子(E2/2，E3/3，E4/4)和三种杂合子(E2/3，E2/4，E3/4)共六种常见表型。ApoE3/3型又称野生型。ApoE是一个多态性蛋白，有三个常见的异构体，即E2、E3和E4。ApoE的氨基酸序列的112位（Cys112Arg，rs429358，以下简称358）和158位（Arg158Cys，rs7412，以下简称412）两种氨基酸残基即精氨酸（Arg）和半胱氨酸（Cys）的交换决定了异构体的种类。ApoE4在这两个位置上都是Arg；E2都是Cys；112位为Cys和158位是Arg者为ApoE3异构体。自然人群中，基因频率E3分布最高，ApoE3/3表型分布约70%。另外国内外多项研究发现，ApoE基因是目前已知的阿尔茨海默病最密切的遗传标志物，ApoE4携带者阿尔茨海默病的易感性增加。ApoE突变后，其与LDL-R的亲和力发生改变。携带一个E4等位基因的个体其发展为AD的可能性高于无E4等位基因的个体约3-4倍。E4等位基因在普通人群中比例大约为15%，而在AD患者中的比例可达40%。ApoE4是AD的重要危险因素。通过检测ApoE的基因型，可了解是否为AD易感人群，继而从病因学延缓AD的发生、发展；并定期检查，以便早诊断、早治疗、最大程度的降低疾病造成的损害。通过对患者的ApoE基因进行检测，得到特定位点的基因型，以基因检测结果作为中间结果的信息的方法，不属于疾病的诊断方法；以基因型的检测结果来确定药物的选择，就可以实现个体化用药，避免对免疫抑制剂不良反应。目前对基因突变和基因多态性的检测，常见有直接测序法、基因芯片杂交法、Taqman荧光探针法、等位基因特异性扩增法（AmplificationRefractoryMutationSystemRealTimePCR，ARMS-RTPCR）、等位基因特异性扩增法（AmplificationRefractoryMutationSystemRealTimePCR，ARMS-RTPCR）等。上述方法灵敏度低、假阳性率高、耗时较长，通量小。因此，需要一种新的检测ApoE基因基因突变的试剂盒及检测方法，使得对ApoE基因突变的灵敏度高，假阳性率低，且检测周期短。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种ApoE基因检测试剂盒及检测方法，旨在解决现有技术中ApoE基因检测灵敏度低、假阳性率高、周期长，通量小的技术问题。本专利技术提供了一种ApoE基因检测引物组，一种ApoE基因检测引物组，包括rs429358引物组和rs7412引物组中的至少一种；所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段，包括rs429358上游引物和rs429358下游引物，所述rs429358上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的序列，所述rs429358下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17或SEQIDNO:18的序列；所述rs7412引物组用于扩增含rs7412位点的核酸片段，包括rs7412上游引物和rs7412下游引物，所述rs7412上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20或、SEQIDNO:21的序列，所述rs7412下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:22的序列。优选的，所述rs429358引物组包括ApoE引物组和rs429358内引物组；所述rs7412引物组包括ApoE引物组和rs7412内引物组；所述ApoE引物组用于扩增ApoE基因片段，所述rs429358内引物组用于扩增含rs429358位点的ApoE基因片段；所述rs7412内引物组用于扩增含rs7412位点的ApoE基因片段。本专利技术还提供了一种ApoE基因检测试剂盒，所述ApoE基因检测试剂盒包括上述任一种ApoE基因检测引物组。优选的，所述ApoE基因检测试剂盒还包括接头，所述接头上含有标签序列，所述接头用于直接与含rs429358位点和/或rs7412位点的扩增产物连接。优选的，所述ApoE基因检测试剂盒还包括rs429358测序引物和/或rs7412测序引物，所述rs429358测序引物具有SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:35的序列；所述rs7412测序引物具有SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:38的序列。优选的，所述ApoE基因检测试剂盒还包括无荧光标记的寡聚核苷酸探针。本专利技术还提供了一种ApoE基因检测方法，包括以下步骤：A、采用rs429358引物组，对含rs429358位点的核酸片段进行扩增，得rs429358扩增产物；或利用rs7412引物组，对含rs7412位点的核酸片段进行扩增，得rs7412扩增产物；所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段，包括rs429358上游引物和rs429358下游引物，所述rs429358上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的序列，所述rs429358下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17或SEQIDNO:18的序列；所述rs7412引物组包括rs7412上游引物和rs7412下游引物，所述rs7412上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20或SEQIDNO:21的序列，所述rs7412下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:22的序列；B、在所述rs429358扩增产物和/或rs7412扩增产物上连接接头，得到rs429358文库分子和/或rs7412文库分子；C、采用第二代高通量基因测序技术对所述文库分子进行测序，确定rs429358和/或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ApoE基因检测引物组，其特征在于，包括rs429358引物组和rs7412引物组中的至少一种；所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段，包括rs429358上游引物和rs429358下游引物，所述rs429358上游引物具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的序列，所述rs429358下游引物具有SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的序列；所述rs7412引物组用于扩增含rs7412位点的核酸片段，包括rs7412上游引物和rs7412下游引物，所述rs7412上游引物具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的序列，所述rs7412下游引物具有SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:22的序列。...

【技术特征摘要】
1.一种ApoE基因检测引物组，其特征在于，包括rs429358引物组和rs7412引物组中的至少一种；所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段，包括rs429358上游引物和rs429358下游引物，所述rs429358上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的序列，所述rs429358下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17或SEQIDNO:18的序列；所述rs7412引物组用于扩增含rs7412位点的核酸片段，包括rs7412上游引物和rs7412下游引物，所述rs7412上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20或SEQIDNO:21的序列，所述rs7412下游引物具有SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:22的序列。2.根据权利要求1所述的ApoE基因检测引物组，其特征在于，所述rs429358引物组包括ApoE引物组和rs429358内引物组；所述rs7412引物组包括ApoE引物组和rs7412内引物组；所述ApoE引物组用于扩增ApoE基因片段，所述rs429358内引物组用于扩增含rs429358位点的ApoE基因片段；所述rs7412内引物组用于扩增含rs7412位点的ApoE基因片段。3.一种ApoE基因检测试剂盒，其特征在于，所述ApoE基因检测试剂盒包括权利要求1或2所述的ApoE基因检测引物组。4.根据权利要求3所述的ApoE基因检测试剂盒，其特征在于，所述ApoE基因检测试剂盒还包括接头，所述接头上含有标签序列，所述接头用于直接与含rs429358位点和/或rs7412位点的扩增产物连接。5.根据权利要求3所述的ApoE基因检测试剂盒，其特征在于，所述ApoE基因检测试剂盒还包括rs429358测序引物和/或rs7412测序引物，所述rs429358测序引物具有SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34或SEQIDNO:35的序列；所述rs7412测序引物具有SEQIDNO:36、SEQIDNO:37或SEQIDNO:38的序列。6.根据权利要求3所述的ApoE基因检测试剂盒，其特征在于，所述ApoE基因检测试剂盒还包括无荧光标记的寡聚核苷酸探针。7.一种ApoE基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采用rs429358引物组，对含rs429358位点的核酸片段进行扩增，得rs429358扩增产物；或利用rs7412引物组，对含rs7412位点的核酸片段进行扩增，得rs7412扩增产物；所述rs429358引物组用于扩增含rs429358位点的核酸片段，包括rs429358上游引物和rs429358下游引物，所述rs429358上游引物具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛司潼，黄思强，
申请(专利权)人：深圳华因康基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44