sCD100蛋白在制备慢性HBV感染治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了sCD100蛋白在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用，并进一步提供了一种治疗慢性HBV感染的药物，其活性成分包括sCD100蛋白。本发明专利技术采用HBV慢性复制小鼠模型、以及体外给予sCD100和HBV特异性多肽处理CHB患者的PBMCs来对sCD100蛋白抗病毒免疫调控作用进行了验证，该发现在临床应用上有重要意义。

Application of sCD100 protein in the preparation of drugs for chronic HBV infection

The present invention provides the application of sCD100 protein in the preparation of drugs for the treatment of chronic HBV infection, and further provides a drug for treating chronic HBV infection, and the active components include sCD100 protein. The present invention uses HBV chronic replication mouse model as well as sCD100 and HBV specific polypeptides in vitro to treat CHB patients with PBMCs to verify the antiviral immunomodulatory effect of sCD100 protein, and the discovery is of great significance in clinical application.

【技术实现步骤摘要】
sCD100蛋白在制备慢性HBV感染治疗药物中的应用
本专利技术涉及免疫学和医学
，特别涉及一种sCD100蛋白在制备慢性HBV感染治疗药物中的应用，所述sCD100蛋白在慢性HBV感染特异性免疫治疗中具有抗病毒免疫调控作用。
技术介绍
乙型肝炎病毒感染是全球性的公共卫生问题，慢性HBV感染在我国尤为严重。目前临床抗病毒治疗药物主要为两大类：①干扰素α(如PEG-IFNα，即聚乙二醇化干扰素)，但仅在约30％患者体内诱导持续的抗病毒应答，且副作用较大；②核苷(酸)类似物(如拉米夫定、恩替卡韦等)，可有效抑制病毒复制，但无直接的免疫调节作用，难以彻底清除HBV，需长期甚至终生用药，且存在病毒耐药变异及停药后病毒血症反弹等问题1-2。因此，探寻更有效的CHB免疫治疗策略具有重要意义。细胞毒性T淋巴细胞在清除HBV感染的肝细胞中发挥关键作用3。在适应性细胞免疫应答中，CD8+T细胞活化有赖于双信号：①CD8+T细胞的T细胞受体识别抗原提呈细胞表面MHCI类分子提呈的抗原肽，通过第一信号；②APC与T细胞表面共刺激分子相互作用提供共刺激信号(第二信号)。活化的CD8+T细胞经历克隆扩增而分化为效应性CTL和记忆性T细胞4。已有研究显示，病毒感染会引起肝内APC细胞功能分化成熟从而诱导效应性CD8+T细胞的生成，但是这一过程并不依赖于经典的共刺激分子(如CD80/CD86等)的调控，提示肝内T细胞免疫存在新的共刺激分子调控机制5。目前，仍不清楚在急性自限性HBV感染过程中HBV特异性CD8+T细胞是通过何种机制打破肝内免疫耐受而发挥其抗病毒活性的。以上涉及的文献包括：1.Locarnini,S.,Mason,W.S.CellularandvirologicalmechanismsofHBVdrugresistance.JHepatol44,422-431(2006).2.Zoulim,F.,Locarnini,S.HepatitisBvirusresistancetonucleos(t)ideanalogues.Gastroenterology137,1593-1608e1591-1592(2009).3.Liu,J.,Kosinska,A.,Lu,M.,Roggendorf,M.NewtherapeuticvaccinationstrategiesforthetreatmentofchronichepatitisB.VirolSin29,10-16(2014).4.Schuch,A.,Hoh,A.,Thimme,R.TheroleofnaturalkillercellsandCD8(+)TcellsinhepatitisBvirusinfection.FrontImmunol5,258(2014).5.Thomson,A.W.,Knolle,P.A.Antigen-presentingcellfunctioninthetolerogenicliverenvironment.NatRevImmunol10,753-766(2010)
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了具有免疫活性sCD100蛋白在慢性HBV感染特异性免疫治疗中的应用，sCD100蛋白可以促进肝内HBV特异性T细胞活化发挥免疫治疗作用。本专利技术第一方面提供了sCD100蛋白在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用。具体的，所述药物中sCD100蛋白具有增强肝内HBV特异性CD8+T细胞免疫应答进而促进HBV病毒清除的作用。在本专利技术的实施例中，采用HBV慢性复制小鼠模型、以及体外给予sCD100和HBV特异性多肽处理CHB患者的PBMCs来对sCD100蛋白的作用进行了验证。具体的，采用6-8周龄的雄性C57/BL小鼠，用质粒pAAV/HBV1.2经尾静脉高压水注射建立HBV慢性复制小鼠模型，定期采集外周血液样本检测血清HBsAg、HBeAg；小鼠慢性HBV复制模型体内给予sCD100蛋白治疗，检测血清HBsAg、HBeAg水平变化发现sCD100蛋白可导致病毒清除加速。体外给予sCD100和HBV特异性多肽处理CHB患者的PBMCs，通过流式细胞术检测发现可增强部分CHB患者HBV特异性CD8+T细胞免疫应答。本专利技术第二方面提供了治疗慢性HBV感染的药物，其活性成分包括sCD100蛋白。具体的，所述治疗慢性HBV感染的药物成分还可包括药学上可接受的药用赋形剂或药用辅料。所述治疗慢性HBV感染的药物的给药方式可以是多样化的，包括但不限于口服给药、静脉注射给药等方式，对应的，该药物的剂型也可以是多样化的，如胶囊剂等适合口服给药的剂型、及注射剂等剂型。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了新的促进肝内HBV特异性CD8+T细胞活化共刺激因子，进而达到促进HBV病毒清除的免疫治疗策略，在慢性HBV感染过程中，给予外源性sCD100治疗可以促进病毒清除，sCD100蛋白发挥了重要的抗病毒免疫调控作用，该发现在临床应用上有重要意义。附图说明图1为给予外源性sCD100蛋白处理后慢性HBV复制小鼠表面抗原清除示意图；图2为给予外源性sCD100蛋白处理后慢性HBV复制小鼠e抗原清除示意图；图3为给予外源性sCD100处理后增强CHB患者CD8+T细胞免疫应答示意图。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术提供的sCD100蛋白在制备慢性HBV感染治疗药物中的应用予以进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。实施例1本实施例构建了小鼠HBV慢性复制模型，通过该模型验证sCD100蛋白在慢性HBV感染特异性免疫治疗中的抗病毒免疫调控作用。具体步骤包括：6-8周雄性C57BL/6小鼠10只，通过高压尾静脉注射方式在5-8秒内将质粒公司制备好的质粒pAAV/HBV1.2按照6μg/只小鼠快速通过小鼠尾静脉推注进体内，构建HBV慢性复制模型，将实验小鼠分为两组，每组5只。实验组在第7天和14天通过普通尾静脉注射sCD100蛋白，每次每只小鼠注射50ug；对照组注射相应剂量的生理盐水。在处理时间第4、7、11、14、18、21、25、28天采集小鼠眼眶外周血，10000g离心10分钟收集上清，按照商业化HBsAgELISA试剂盒步骤，将血清10倍稀释后检测HBsAgOD值，结果如图1所示，从图1可以看出给予外源性sCD100蛋白处理可使慢性HBV复制小鼠表面抗原提前清除。实施例2本实施采用实施例1的小鼠HBV慢性复制模型，通过该模型验证sCD100蛋白在慢性HBV感染特异性免疫治疗中的抗病毒免疫调控作用。具体步骤包括：采用如实施例1的方法处理实验小鼠，在处理时间采集小鼠眼眶外周血，10000g离心10分钟收集上清，按照商业化HBeAgELISA试剂盒步骤，将血清10倍稀释后检测HBeAgOD值，结果如图2所示，从图2可以看出给予外源性sCD100蛋白处理可使慢性HBV复制小鼠e抗原提前清除。实施例3随机取4例符合慢乙肝诊断标准的患者抽取肱静脉血3ml装入肝素管中，反复颠倒保证充分抗凝；淋巴细胞分离管空管在室温20℃，2本文档来自技高网...

【技术保护点】
sCD100蛋白在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.sCD100蛋白在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用。2.如权利要求1所述的sCD100蛋白在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用，其特征在于：所述药物中sCD...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘嘉，王璐，杨尚青，杨东亮，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：湖北,42