一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激CAR-T细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激CAR‑T细胞的方法，S1、使用PBS与牛血清白蛋白、RPMI1640与胎牛血清分别配置Buffer与完全培养液；S2、震荡混匀链霉亲和素磁珠；S3、对S2中混匀的链霉亲和素磁珠分别与无菌双蒸水、生物素化肿瘤相关靶蛋白混合；S4、取靶向生物素化TAACAR‑T细胞至完全培养液中重悬；S5、设置空白组、对照组以及实验组，加入相同数目的CAR‑T细胞；S6、空白组添加完全培养液、对照组与链霉亲和素磁珠共培养、实验组与链霉素亲和素和生物素化TAA共培养；S7、检测空白组、对照组以及实验组培养上清细胞因子释放；此方法可在CAR‑T细胞体外培养中适时添加、去除“肿瘤细胞”，为探索CAR‑T细胞在接受肿瘤细胞刺激中表型、功能的变化及潜在机制提供便利。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医疗，具体涉及一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法。

技术介绍

1、嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)-t细胞免疫疗法是靶向免疫治疗的重要组分，在血液肿瘤的治疗中取得显著疗效。研究表明，car-t细胞会因肿瘤抗原的持续刺激而过度活化以至于走向衰老与耗竭，此与患者的不良预后密切相关，因此探索car-t细胞与肿瘤细胞相互作用时表型与功能发生的变化以及潜在机制对临床治疗有一定的指导作用，其中恰当的模型至关重要。

2、目前模拟car-t细胞与肿瘤细胞体内相互作用的方法是car-t细胞与肿瘤细胞体外共培养；然而，此模型中混杂的细胞种类限制了细胞计数、流式细胞术、转录组测序等常规实验方法的准确性。目前尚无成熟的方法替代肿瘤细胞瘤刺激car-t细胞，并且缺乏在体外car-t细胞培养中去除肿瘤抗原的方法，为此我们提出一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激CAR-T细胞的方法，其特征在于：具体方法如下：

2.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述S1具体为，使用PBS+0.1％牛血清白蛋白配制实验所需Buffer；使用PRMI1640+10％胎牛血清配制实验所需完全培养液。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述S2具体为，充分震荡混匀链霉亲和素磁珠，分别取实验所需3μL链霉亲和素磁珠至a无菌EP管与b无菌EP管中，加入1mL PBS并震荡混匀，于磁力架上静置1分钟后去上清...

【技术特征摘要】

1.一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：具体方法如下：

2.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：所述s1具体为，使用pbs+0.1％牛血清白蛋白配制实验所需buffer；使用prmi1640+10％胎牛血清配制实验所需完全培养液。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：所述s2具体为，充分震荡混匀链霉亲和素磁珠，分别取实验所需3μl链霉亲和素磁珠至a无菌ep管与b无菌ep管中，加入1ml pbs并震荡混匀，于磁力架上静置1分钟后去上清，重复此步骤3次，3μlpbs重选磁珠。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：所述s3具体为，分别取3μl无菌双蒸水、3μl浓度为0.1μg/μl生物素化蛋白与重悬后的a无菌ep管中磁珠、b无菌ep管中磁珠混匀后室温共孵育30分钟，加入1mlbuffer并轻柔混匀，于磁力架上静置1分钟后去上清，重复此步骤5次，a无菌ep管中溶液、b无菌ep管中溶液分别用150μl完全培养液重悬。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：所述s4具体为，取4x105靶向生物素化taa的car-t细胞，重悬至200μl完全培养液。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白磁珠偶联模拟肿瘤细胞刺激car-t细胞的方法，其特征在于：所述s5具体为，空白组、对照组、实验组均加入50μl靶向生物素化taa...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡豫，梅恒，雒文静，李成功，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：