一种Gal‑1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法技术

本发明专利技术属于医疗领域，公开了一种Gal‑1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法，包括：一部分Gal‑1缺陷小鼠用Gal‑1腹腔注射，每日一次，共7天；分别从Gal‑1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal‑1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA 1mg/只灌胃，每天一次，共7天。建立食物过敏动物模型，测定速发性食物过敏的有关指标和迟发性肠过敏有关指标；测定免疫耐受有关指标，包括肠粘膜耐受型DC，Treg，耐受型B细胞计数和免疫耐受分子的测定。本发明专利技术的模型能诱导出抗原特异性调节性T细胞，恢复病人体内的抗原特异性免疫耐受，从而抑制过敏反应。

A Gal 1 in the induction of immune tolerance observation model and establishing method

The invention belongs to the medical field, discloses a Gal 1 in the induction of immune tolerance observation model and establishing method, including: a part of the Gal 1 deficient mice with Gal 1 intraperitoneal injection, once a day, a total of 7 days; 1 respectively from Gal deficient mice, B6 mice and Gal 1 injected mice small intestine, installed in the Ussing chamber with OVA system; the establishment of immune tolerance for antigen; OVA 1mg/ orally, once a day, a total of 7 days. An animal model of food allergy was established, and the related indexes of fast food allergy and delayed intestinal hypersensitivity were determined. The indexes related to immune tolerance were determined, including intestinal mucosa tolerance type DC, Treg, tolerance type B cell count and immune tolerance molecule. The model of the present invention can induce antigen-specific regulatory T cells and restore antigen-specific immune tolerance in patients, thereby inhibiting allergic reactions.

【技术实现步骤摘要】
一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法
本专利技术属于医疗领域，尤其涉及一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法。
技术介绍
免疫耐受是指机体免疫系统接受某种抗原作用后产生的特异性的免疫无应答状态。对特异性抗原产生免疫耐受的个体，再次接触该抗原刺激后，不发生免疫应答或不能发生用常规方法可检测到免疫应答。因此正常的免疫耐受机制对维持机体健康至关重要。目前对免疫耐受产生的机制还不十分明了。虽然近年来国际上和国内对损害免疫耐受的因素研究进展很快，但对于使已经形成的免疫耐受损伤的恢复及其导致的疾病的康复还远不能令人满意。动物实验和临床研究表明，免疫耐受失常和多种疾病的发病有关，例如过敏性疾病(如哮喘、食物过敏)，自身免疫性疾病(如糖尿病、系统性红斑狼疮)以及某些非特异性炎症病(如炎症性肠病)等。这些疾病的发病人数众多，每年治疗这些疾病的医疗费用耗资巨大。因此，由于免疫耐受失常而引起的疾病对人类的健康和社会经济有重大的负面影响。Gal-1是凝集素家族成员之一。凝集素(Lectins)是一类非抗体、对糖蛋白上的糖类具有高度特异性的结合蛋白；具有凝集细胞和沉淀聚糖的作用。在哺乳动物体内已发现15种Gal亚型。由于免疫细胞表面富含糖蛋白，Gal-1能通过和糖蛋白(例如T细胞受体，CD45，CD43，CD7，CD3，CD2，前B细胞受体等)结合而调节免疫细胞的功能。研究表明，Gal-1能调节DC的活性，增强IL-10的表达，引起T细胞凋亡，使Treg活化，为Treg的免疫抑制功能所必需，调节B细胞的生命周期，诱导长寿浆母细胞(LLPC)表达免疫耐受分子TGF-β。哮喘病人体内Gal-1的水平下降；结肠炎小鼠肠粘膜中Gal-1显著减少。食物过敏小鼠的免疫细胞Gal-1含量显著降低，并和血清TNF-α水平呈负相关关系(p<0.01)；哮喘病人和慢性结肠炎也有这些现象。TNF-α可以抑制Gal-1在免疫细胞中表达。受Gal-1作用后，IEC可表达TGF-β，对微生物产物引起的炎症反应(如分泌IL-8)也明显降低。综上所述，现有技术存在的问题是：在脱敏治疗中，注射少量抗原试图使过敏病人产生免疫耐受；但抗原进入人体后激活了肥大细胞，释放过敏介质，抑制了免疫耐受成分的产生；因而治疗效果不佳，或产生不了治疗效果。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法。本专利技术是这样实现的，一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型，所述Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型为：Gal-1和肥大细胞表面的IgE高亲和力受体结合，阻断特异性抗原和肥大细胞膜上的IgE高亲和力受体结合；使肥大细胞稳定，不释放过敏性介质；进入体内的特异性抗原即获得机会诱导、产生抗原特异性免疫调节细胞，使机体恢复或重建抗原特异性免疫耐受；从而抑制抗原特异性Th2反应，产生永久性的治疗效果。本专利技术的另一目的在于提供一种所述Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法，所述构建方法包括：步骤一，一部分Gal-1缺陷小鼠用Gal-1腹腔注射，每日一次，共7天；分别从Gal-1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal-1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；步骤二，用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA1mg/只灌胃，每天一次，共7天。步骤三，建立食物过敏动物模型，测定速发性食物过敏的有关指标和迟发性肠过敏有关指标；步骤四，测定免疫耐受有关指标，包括肠粘膜耐受型DC，Treg，耐受型B细胞计数和免疫耐受分子的测定。进一步，所述步骤一中Gal-1腹腔注射0.25mg/只。进一步，所述食物过敏动物模型从5周，致敏小鼠坐或/和Gal-1处理；治疗1周后，用特异性抗原OVA致小鼠免疫，第二天处死小鼠，观察肠道过敏反应。本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术的模型能诱导出抗原特异性调节性T细胞，恢复病人体内的抗原特异性免疫耐受，从而抑制过敏反应；表明Gal-1有免疫调节功能；肠粘膜是形成口服耐受的重要器官；本专利技术进一步观察Gal-1对肠粘膜的免疫耐受特性的调节；并且从观察IEC在诱导和维持肠粘膜免疫耐受中的作用这一全新的切入点着手，揭示IEC在免疫耐受方面的功能，揭示肠粘膜诱导免疫耐受的内在机制。附图说明图1是本专利技术实施提供的Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的建立方法流程图。图2是本专利技术实施提供的Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的建立方法实现流程图。图3是本专利技术实施提供的过敏反应动物模型结果示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理作详细的描述。本专利技术实施例提供的Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型为：Gal-1可以和肥大细胞表面的IgE高亲和力受体结合，阻断特异性抗原和肥大细胞膜上的IgE高亲和力受体结合；从而使肥大细胞稳定，不释放过敏性介质；进入体内的特异性抗原即获得机会诱导、产生抗原特异性免疫调节细胞，使机体恢复或重建抗原特异性免疫耐受；从而抑制抗原特异性Th2反应，产生永久性的治疗效果。已经在长达一年的动物实验中得到证明。如图1所示，本专利技术实施例提供的Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的建立方法包括以下步骤：S101：一部分Gal-1缺陷小鼠用Gal-1腹腔注射(0.25mg/只；注射Gal-1的时间和剂量可根据实验结果调整)，每日一次，共7天；分别从Gal-1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal-1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；S102：用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA1mg/只灌胃，每天一次，共7天。S103：建立食物过敏动物模型，测定速发性食物过敏的有关指标和迟发性肠过敏有关指标；S104：测定免疫耐受有关指标，包括肠粘膜耐受型DC，Treg，耐受型B细胞计数和免疫耐受分子的测定。食物过敏动物模型从5周，致敏小鼠坐或/和Gal-1处理。治疗1周后，用特异性抗原OVA致小鼠免疫，第二天处死小鼠，观察肠道过敏反应。结果表明：坐便组小鼠体重明显下降。在Gal-1/小鼠坐组体重constantlysimilar向天真的对照小鼠。小鼠不降体重Gal-1(图3A)。单核细胞大量浸润，肥大细胞和eosinophilsin在坐组观察肠粘膜，这是明显不与Gal-1/小鼠坐治疗(图3B-D；图3F)。血清组胺，肥大细胞脱颗粒的标志物，在坐组明显高于的Gal-1/坐组(图3E)。肠上皮细胞屏障通透性葡聚糖在Gal-1/坐组也比在坐组明显减少(图3F)。本专利技术实施例还可以建立一个过敏性哮喘小鼠模型来测试Gal-1在机体免疫耐受中的作用。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Gal‑1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法，其特征在于，所述Gal‑1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法包括：步骤一，一部分Gal‑1缺陷小鼠用Gal‑1腹腔注射，每日一次，共7天；分别从Gal‑1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal‑1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；步骤二，用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA 1mg/只灌胃，每天一次，共7天。步骤三，建立食物过敏动物模型，测定速发性食物过敏的有关指标和迟发性肠过敏有关指标；步骤四，测定免疫耐受有关指标，包括肠粘膜耐受型DC，Treg，耐受型B细胞计数和免疫耐受分子的测定。

【技术特征摘要】
1.一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法，其特征在于，所述Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法包括：步骤一，一部分Gal-1缺陷小鼠用Gal-1腹腔注射，每日一次，共7天；分别从Gal-1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal-1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；步骤二，用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA1m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨平常，李小西，李茂刚，徐灵芝，谢瑞娣，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44