【技术实现步骤摘要】
生产米尔贝霉素的重组链霉菌及其制备方法和应用
本专利技术涉及分子生物学
,尤其涉及制备生产抗生素、特别是米尔贝霉素的重组工程化链霉菌的方法和获得的重组链霉菌及其应用。专利技术背景米尔贝霉素是一种大环内酯类驱虫药物,日本三共株式会社于1967年发现,经过多年改良于1986年正式以商品名米尔贝肟(milbemycinoxime)上市。米尔贝肟是米尔贝霉素A3和米尔贝霉素A4的肟衍生物,米尔贝肟对控制和预防大部分常见寄生虫疾病都有很好的效果。通常用来预防恶丝虫病,控制线虫、钩虫引发的犬、猫疾病及犬的鞭虫病。由于米尔贝肟杀虫活性高、毒性小,LD50是临床推荐用量的2000倍以上,同时对阿维菌素类药物敏感的犬毒性较小,所以具有很好的市场前景。目前能产米尔贝霉素的菌株有米尔贝霉素链霉菌(Streptomycesmilbemycinicus)、冰城链霉菌(Streptomycesbingchenggensis)、吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)例如吸水链霉菌金泪亚种(Streptomyceshygroscopicussubsp.aureolacrimosus)和灰产色链霉菌(Streptomycesgriseochromogenes)。它们除主要产生有效组分米尔贝霉素A3/A4外,还可产生近三十多种米尔贝霉素类似物,其中常见的有C5-O-甲基米尔贝霉素B2、B3、β1、β2、α9和α10(US4144352)。这些类似物的产生不仅会降低米尔贝霉素A3/A4的产量,而且会严重影响米尔贝霉素A3/A4后期的分离纯化。向文胜等报道通过 ...
【技术保护点】
一种重组链霉菌,相对于相应的野生型链霉菌或者产生该重组链霉菌的起始链霉菌,所述重组链霉菌选自如下的任一个、任两个、任三个或全部四个基因是失活的,例如是被敲除的:(i)编码SEQ ID NO:8所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca2;(ii)编码SEQ ID NO:9所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca3;(iii)编码SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca4;(iv)编码SEQ ID NO:11所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca5。
【技术特征摘要】
1.一种重组链霉菌,相对于相应的野生型链霉菌或者产生该重组链霉菌的起始链霉菌,所述重组链霉菌选自如下的任一个、任两个、任三个或全部四个基因是失活的,例如是被敲除的:(i)编码SEQIDNO:8所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca2;(ii)编码SEQIDNO:9所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca3;(iii)编码SEQIDNO:10所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca4;(iv)编码SEQIDNO:11所示氨基酸序列或与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的氨基酸序列的基因mpca5。2.权利要求1的重组链霉菌,其选自重组米尔贝霉素链霉菌(Streptomycesmilbemycinicus)、重组冰城链霉菌(Streptomycesbingchenggensis)、重组吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)例如重组吸水链霉菌金泪亚种(Streptomyceshygroscopicussubsp.aureolacrimosus)和重组灰产色链霉菌(Streptomycesgriseochromogenes)。3.权利要求1或2的重组链霉菌,其是以保藏号CGMCCNo.7677保藏在CGMCC的米尔贝霉素链霉菌的重组菌株,其中相对于CGMCCNo.7677链霉菌,所述重组菌株中的基因mpca2、基因mpca3、基因mpca4和基因mpca5的任一个、任两个、任三个或全部四个是失活的。4.权利要求1-3任一项的重组链霉菌,其中所述重组链霉菌的基因组中选自如下的一个或多个核苷酸序列是缺失或敲除的:(i)SEQIDNO:7所示的974-2452位核苷酸或其片段、或具有与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的核苷酸序列的片段,例如SEQIDNO:7所示的x-y位核苷酸,其中x是974至1581的任一整数,y是1834至2452的任一整数,如SEQIDNO:7所示的1581-1834位核苷酸,(ii)SEQIDNO:7所示的2449-3606位核苷酸或其片段、或具有与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的核苷酸序列的片段,例如SEQIDNO:7所示的x-y位核苷酸,其中x是2449至2894的任一整数,y是3305至3606的任一整数,如SEQIDNO:7所示的2894-3305位核苷酸,;(iii)SEQIDNO:7所示的3828-4892位核苷酸或其片段、或具有与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的核苷酸序列的片段,例如SEQIDNO:7所示的x-y位核苷酸,其中x是3828至3889的任一整数,y是4495至4892的任一整数,如SEQIDNO:7所示的3889-4495位核苷酸,(iv)SEQIDNO:7所示的620-892位核苷酸或其片段、或具有与其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列相同性的核苷酸序列的...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄隽,党福军,周军,徐晴雨,李娜,
申请(专利权)人:浙江海正药业股份有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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