本发明专利技术涉及一种检测孔雀石绿的方法，具体属于电化学发光检测领域。以聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系，用电化学发光方法检测孔雀石绿。该方法的检测范围为5.0×10‑8～1.0×10‑5mol/L，最低检测限为1.5×10‑8mol/L。本发明专利技术检测孔雀石绿的成本低、灵敏度高、操作简单，选择性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测孔雀石绿的电化学发光方法，具体涉及一种以聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极为工作电极，定量检测水样中孔雀石绿的电化学发光分析方法。
技术介绍
孔雀石绿又称孔雀绿、碱性绿，是深绿色结晶状固体，具有杀灭鱼体寄生虫和霉菌等效果，成本低廉，因此得到了水产养殖户的青睐。但是孔雀石绿是一种致癌物质，并能在水产品体内长时间残留，可以通过食物链对人体产生致癌、致畸和致突变等副作用，与此同时含有孔雀石绿养殖废水的排放会导致水环境的污染。中国在2002年将孔雀石绿列入《食品动物禁用的渔药及其化合物清单》中，目前孔雀石绿的检测以免疫学检测法和理化检测法为主，免疫学检测主要用酶联免疫检测法，该方法检测的假阳性概率大；理化检测主要包括气相色谱质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱质谱串联检测法，这些方法存在测试需要专业技术人员操作、耗时长、成本高等缺点，因此专利技术一种高效、高灵敏和低成本检测孔雀石绿的方法至关重要。三联吡啶钌电化学发光具有操作简单、响应快、灵敏度高、检测下限低等优点，在电化学发光分析领域得到了广泛应用。该方法用于检测孔雀石绿，具有成本低、检测范围宽、测试迅速等优点。
技术实现思路
本专利技术需解决的问题是针对现有孔雀石绿的检测方法普遍存在需要昂贵的检测仪器、测试时间长和高成本等问题，提供一种低成本，操作简单，测试迅速的检测孔雀石绿的方法。为解决上述问题，本专利技术采用的方案是将聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系进行检测，具体步骤如下：(1)电聚合溶液的配制用pH＝7.0的0.1mol/L磷酸盐(PBS)缓冲溶液作为支持电解质，配制邻氨基酚磺酸溶液。(2)聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极的制备取25mL上述电聚合溶液，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，用循环伏安法电聚合20圈；用去离子水冲洗晾干，将其置于15mL三联吡啶钌的水溶液中吸附30min，然后用去离子水冲洗晾干，作为电化学发光测试的工作电极。(3)不同浓度孔雀石绿标准溶液的配制准确称取一定量的孔雀石绿固体，用去离子水配制1.0×10-3mol/L标准溶液，把一定量标准溶液加入磷酸盐缓冲溶液中，得到一系列不同浓度的孔雀石绿标准溶液，浓度范围为5.0×10-8～1.0×10-5mol/L。(4)标准曲线的绘制准确量取20mL步骤(3)配制的一系列孔雀石绿的标准溶液作为待测溶液，将步骤(2)得到的修饰电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系，将三电极体系置于一系列不同浓度的孔雀石绿pH＝10的PBS缓冲溶液中，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录E-ECL曲线，建立加入孔雀石绿前后的发光强度差值与孔雀石绿浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。(5)样品检测实际样品先过滤再调pH，按照与步骤(4)同样的电化学发光测试条件进行测试，记录发光强度，所得发光强度，用步骤(4)所得标准曲线所对应的线性回归方程计算出待检测样品中孔雀石绿的浓度。作为优选，步骤(1)所述的邻氨基酚磺酸浓度为4.0×10-3mol/L。作为优选，步骤(2)所述的三联吡啶钌浓度为1.0×10-4mol/L。作为优选，步骤(2)所述的循环伏安法电聚合条件为：扫描范围：0.1～1.5V；扫描速度：0.1V/s。作为优选，步骤(3)所述的缓冲溶液为pH＝10的0.1mol/L的PBS缓冲溶液。本专利技术的有益效果：本专利技术采用聚邻氨基酚磺酸来固定三联吡啶钌，利用邻氨基酚磺酸与三联吡啶钌之间存在的氢键作用，特别是邻氨基酚磺酸聚合成聚邻氨基酚磺酸时与三联吡啶钌的氢键作用会更强，使得邻氨基酚磺酸电聚合膜能够很好地固定三联吡啶钌得到修饰电极，并具有优异的吸附性能，对孔雀石绿产生吸附作用，其电极的制备方法简单，灵敏度高。用于检测孔雀石绿，能有效地检测出所含孔雀石绿样品中的浓度，成本低，灵敏度高，重现性好，检测范围宽，操作简单，测试迅速。附图说明图1是聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极在不同浓度孔雀石绿的磷酸盐缓冲溶液中的循环伏安发光曲线，其中孔雀石绿的浓度按曲线峰值高低从上到下依次为：5.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、5.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、5.0×10-6mol/L和1.0×10-5mol/L。图2是加入孔雀石绿前后发光强度的差值和孔雀石绿浓度的标准曲线。具体实施方式本专利技术下面结合实施例作进一步详述：实施例1：(1)聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极的制备取25mL邻氨基酚磺酸电聚合溶液，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，用循环伏安法电聚合20圈，用去离子水冲洗晾干，将其置于15mL1.0×10-4mol/L三联吡啶钌的水溶液中吸附30min，然后用去离子水冲洗晾干，作为电化学发光测试的工作电极。(2)标准曲线的绘制以聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系，并以pH＝10的0.1mol/LPBS缓冲液为空白溶液检测发光强度，将三电极体系置于一系列孔雀石绿浓度(5.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、5.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、5.0×10-6mol/L和1.0×10-5mol/L)pH＝10的PBS缓冲溶液中，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录E-ECL曲线，建立加入孔雀石绿前后的发光强度差值与孔雀石绿浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。线性回归方程的检测范围为5.0×10-8～1.0×10-5mol/L，最低检测限为1.5×10-8mol/L。(3)样品的检测取人工养鱼场水样过滤后，用0.1mol/L的PBS缓冲溶液调pH至10，取20mL所得溶液用于电化学发光检测，按照与步骤(2)相同的电化学测试方法对待测样品溶液进行测试，所得发光强度值差值用步骤(2)所得标准曲线所对应的线性回归方程计算出待检测样品中孔雀石绿的浓度，其结果列于表1中。对比实施例1：(1)三联吡啶钌修饰玻碳电极的制备将玻碳电极置于15mL1.0×10-4mol/L三联吡啶钌的水溶液中吸附30min，然后用去离子水冲洗晾干，作为电化学发光测试的工作电极。(2)标准曲线的绘制以三联吡啶钌修饰玻碳电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系，并以pH＝10的0.1mol/LPBS缓冲液为空白溶液检测发光强度，将三电极体系置于一系列孔雀石绿浓度(5.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、5.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、5.0×10-6mol/L和1.0×10-5mol/L)pH＝10的PBS缓冲溶液中，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录E-ECL曲线，建立加入孔本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测孔雀石绿的电化学发光方法，其特征在于：所述方法为：以聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系进行检测。
【技术特征摘要】
1.一种检测孔雀石绿的电化学发光方法，其特征在于：所述方法为：以聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘汞电极作为参比电极，组成三电极体系进行检测。2.根据权利要求1所述的检测孔雀石绿的电化学发光方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：(1)电聚合溶液的配制用pH＝7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液作为支持电解质，配制邻氨基酚磺酸溶液；(2)聚邻氨基酚磺酸—三联吡啶钌修饰玻碳电极的制备取25mL上述电聚合溶液，在-1.5～2.0V的电化学窗口范围内，用循环伏安法电聚合20圈；用去离子水冲洗晾干，将其置于15mL三联吡啶钌的水溶液中吸附30min，然后用去离子水冲洗晾干，作为电化学发光测试的工作电极；(3)不同浓度孔雀石绿标准溶液的配制准确称取一定量的孔雀石绿固体，用去离子水配制1.0×10-3mol/L标准溶液，把标准溶液加入pH＝10的磷酸盐缓冲溶液中，得到一系列浓度范围为5.0×10-8～1.0×10-5mol/L的孔雀石绿标准溶液；(4)标准曲线的绘制准确量取20mL步骤(3)配制的孔雀石绿的标准溶液作为待测溶液，把步骤(2)得到的修饰电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极，饱和甘...
【专利技术属性】
技术研发人员：兰秋凤，王文昌，陈小卉，陈智栋，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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