新颖根特节杆菌菌株制造技术

本发明专利技术涉及对产气荚膜梭菌具有活性的根特节杆菌菌株，其选自以下菌株：2014年2月19日以编号DSM 28444提交DSMZ的AP1、2014年2月19日以编号DSM 28445提交DSMZ的AP2、2014年2月19日以编号DSM 28446提交DSMZ的AP3，或者2014年2月19日以编号DSM 28447提交DSMZ的AP4。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在动物饲料中且更特别对于鸡饲料具有作为益生菌的益处的新颖细菌菌株。
技术介绍
有些细菌菌株具有释放对其竞争剂有抑菌或杀菌效果的物质的能力。这些抗微生物物质能够具有有机物性质，例如有机酸或过氧化氢(Ross等，Int.J.FoodMicrobiol.79,3-16,2002)，或者具有肽性质。而且，属于抗生素类的酶促合成抗微生物肽(Mootz等，Curr.Opin.Chem.Biol.1,543-551,1997；Keating等，Curr.Opin.Chem.Biol.3,598-606,1999),以及由核糖体途径产生的形成细菌素类的肽(Jacob等，Ann.Inst.Pasteur(巴黎)84,222-224,1953)是显著的。细菌素在研究领域和工业领域引起了越来越大的兴趣；特别在畜牧业中，他们可能为抗生素应用提供替代的方案(Luchansky,AntonieVanLeeuwenhoek76,335,1999；O'Sullivan等，Biochemistry84,593-604.2002)。在过去的几年里研发了这些细菌素的许多异源表达系统。具体而言，Morisset等(Morisset等，Appl.Environ.Microbiol.,70,4672-4680,2004)已经在肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种DSM20484中生产了肠膜菌素Y105变体，其为由肠膜明串珠菌肠膜亚种Y105产生的IIa类细菌素。同样地，Flynn等(Microbiol.,148,973-984,2002)在植物乳杆菌、乳酸乳球菌和蜡状芽孢杆菌宿主中实施了ABP-118基因，即原先由唾液乳杆菌唾液亚种UCC118产生的IIb类细菌素的表达。此外，实施了多种试验以在大肠杆菌细菌(McCormick等，Appl.Environ.Microbiol.,64,4757-4766,1998；Garneau等，Appl.Environ.Microbiol.,69,1352-1358,2003；Biet等，Microbiol.,144,2845-2854,1998；Miller等，Appl.Environ.Microbiol.,64,14-20,1998；Richard等，J.Bacteriol.,186,4276-4284,2004；Kloche等，Appl.Microbiol.Biotechnol.,67:532-538,2005)、酿酒酵母(Schoeman等，Yeast,15,647-656,1999；VanReenen等，Int.J.FoodMicrobiol.,81,29-40,2003)，以及在乳酸菌(Rodriguez等，Int.J.FoodMicrobiol.,80,101-116,2003)中表达细菌素基因。因而开展了许多工作，以鉴定新颖细菌素以及产生细菌素的新颖细菌菌株。消化生态系统由丰富且非常复杂的、分组为细菌、酵母和古细菌的微生物群组成。这一微生物群本质上是厌氧的，并且主要发现的是类杆菌属、真细菌属、梭菌属、瘤胃球菌属、双歧杆菌属和梭形杆菌属细菌(Suau等，Appl.Environ.Microbiol.65,4799-4807,1999)。该微生物群对于宿主的健康具有重要影响。其具体参与源自食物的代谢化合物的毒化和解毒作用(HughesandRowland,MicrobialEcologyHealthDisease2,179-185,2000)。其也能够调节肠细胞的功能表达(Bry等，Science273,1380-1383.1996；Hooper等，Science291,881-884.2001)。最后，其在保护宿主免受潜在外源致病菌侵染方面起到至关重要的作用(Ducluzeau等，MicrobialEcologyandIntestinalInfections,1988.Fons等，MicrobialEcologyinHealthandDisease2,240-246,2000)。产气荚膜梭菌属于已知的肠病原菌，其为革兰氏阳性的严格厌氧菌，能够产生孢子并在环境中广泛分布。这一病原菌能够源自食物，但也能够在肠中以低浓度存在，并且响应应激效应开始增殖并分泌毒素。产气荚膜梭菌菌株根据其产生的毒素被归为5种毒素型(Petit等，TrendsMicrobiol.7,104-110,1999)。A型产气荚膜梭菌菌株是造成人类胃肠疾病的原因。1997年，美国报道了超过245,000例的产气荚膜梭菌感染病例。这导致41人住院治疗，其中7人死亡(Mead等，Emerg.Infect.Dis.5,607-625,1999)。A型和C型产气荚膜梭菌菌株分别是家禽和猪中引起坏死性肠炎的原因。在家禽中，坏死性肠炎是一种迅速发展的急性病理，其死亡率能够达到每天1至2％。除了其对于动物健康的影响以外，这种病理因此能够产生显著的经济影响。直至1999年，通过使用抗生素作为生长因子而使这种疾病得到很好的控制。但是，为避免选择抗性细菌以及因此避免降低抗生素在人类中的功效，欧盟在1999年部分禁止，然后在2006年完全禁止抗生素在动物饲料中的应用。由于该禁令，由产气荚膜梭菌在家禽和猪中引起的坏死性肠炎在欧洲不再受到控制。1999年和2000年报告给家禽饲养流行病学观察国家网络(RNOEA)(AFSSAPloufragan)的病例数量显著增加(Valancony,BulletinofGTV12,9-12,2001)。Dabard等(Appl.Environ.Microbiol.,67,4111-4118,2001)显示，分离自人的显性菌群的活泼瘤胃球菌El菌株能够产生被称为瘤胃球菌素A或RumaA的抗微生物物质，其积聚在培养上清液中。其涉及属于硫醚抗生素家族的细菌素，对梭菌的各种致病性菌株均有活性。活泼瘤胃球菌是一种严格厌氧菌,其属于在梭菌目中的毛螺菌科。专利申请WO2008/152252涉及活泼瘤胃球菌细菌菌株(以编号I-3705提交CNCM)，以及对产气荚膜梭菌具有抗菌活性的肽RumC1、RumC2和RumC3，以及编码这些肽的基因。截至目前，以控制和治疗与产气荚膜梭菌增殖相关疾病为目的的对于替代解决方案的研究因而具有至关重要性。本专利技术令人惊奇地允许鉴定对产气荚膜梭菌具有抗菌活性(作为细菌素)的新颖根特节杆菌菌株合成肽。
技术实现思路
本专利技术涉及对产气荚膜梭菌具有活性的根特节杆菌菌株，其选自：2014年2月19日以编号DSM28444提交DSMZ的根特节杆菌AP1、2014年2月19日以编号DSM28445提交DSMZ的根特节杆菌AP2、2014年2月19日以编号DSM28446提交DSMZ的根特节杆菌AP3，或者2014年2月19日以编号DSM28447提交DSMZ的根特节杆菌AP4。在本专利技术的全文中，对产气荚膜梭菌的活性能够被定义为抑制靶细菌生长或发育的能力或者杀死靶细菌的能力。抗微生物活性的测量技术是本领域技术人员已知的。对产气荚膜梭菌的活性能够通过如下文实施例4中第4.3点或专利申请WO2008/152252中(且更具体在23和24页“2.对于液体样品的抗微生物活性测试”或第24页“3.对于在琼脂培养基中生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对产气荚膜梭菌具有活性的根特节杆菌菌株，其选自以下菌株：2014年2月19日以编号DSM 28444提交DSMZ的AP1、2014年2月19日以编号DSM 28445提交DSMZ的AP2、2014年2月19日以编号DSM 28446提交DSMZ的AP3，或者2014年2月19日以编号DSM 28447提交DSMZ的AP4。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.17 FR 14/555361.一种对产气荚膜梭菌具有活性的根特节杆菌菌株，其选自以下菌株：2014年2月19日以编号DSM28444提交DSMZ的AP1、2014年2月19日以编号DSM28445提交DSMZ的AP2、2014年2月19日以编号DSM28446提交DSMZ的AP3，或者2014年2月19日以编号DSM28447提交DSMZ的AP4。2.一种对产气荚膜梭菌具有活性的化合物，其自根据权利要求1所述的细菌菌株中分离。3.根据权利要求2所述的化合物，其序列选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.16。4.一种编码对产气荚膜梭菌具有活性的化合物的多核苷酸，其选自：-序列号SEQIDNo.17至SEQIDNo.32，-与根据序列号SEQIDNo.17至SEQIDNo.32的序列中的任一种的多核苷酸杂交的多核苷酸，或者-编码根据权利要求1至2中任一项所述的化合物的多核苷酸。5.一种表达盒，其特征在于其在转录方向上包括：-在宿主生物中起作用的启动子，-根据权利要求4所述的多核苷酸，-在所述宿主生物中起作用的终止序列。6.一种载体，其包括根据权利要求4所述的多核苷酸和/或根据权利要求5所述的表达盒。7.一种由根据权利要求4所述的多核苷酸、根据权利要求5所述的表达盒和/或根据权利要求6所述的载体转化的宿主生物。8.一种组合物，其包括根据权利要求1所述的菌株的至少一种发酵液和/或根据权利要求7所述的宿主生物的一种发酵液和/或至少一种根据权利要求2或权利要求3中任一项所述的化合物。9.根据权利要求13所述的组合物，其以液体或者粉末的形式存在。10.一种营养添加剂，其至少包括根据权利要求1所述的根特节杆菌菌株，和/或至少一种根据权利要求7所述的宿主生物，和/或根据权利要求1所述的菌株的至少一种发酵液，和/或根据权利要求7所述的宿主生物，和/或至少一...

【专利技术属性】
技术研发人员：安格·皮若尔，米歇尔·冯斯，卡洛琳·米兰德，埃斯特尔·德维兰蒂，拉姆亚·哈亚特，
申请(专利权)人：安迪苏法国联合股份有限公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR