独特容器中的样本的微生物分析方法技术

本发明专利技术涉及一种分析方法以及还有使得能够实施这种方法的容器和套件，该方法包括在软质容器中制备和分析样本而不直接处理该样本并且在该样本制备结束时不重新打开该软质容器。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种分析方法以及还有使得能够实施这种方法的容器和套件，该方法包括在软质容器中制备和分析样本而不直接处理该样本并且在该样本制备结束时不重新打开该软质容器。卫生安全是重要的社会挑战。卫生安全部分地通过常规的、标准化的并且经常强制的微生物测试确保。卫生安全涉及多个领域如食品加工、环境或卫生。在食品加工中，例如，对食品及其环境在不同生产阶段进行微生物测试。在食品中毒的主要来源之中，作为病原微生物的举例可以提及沙门氏菌、李斯特菌、以及还有大肠杆菌的肠出血性菌株。特别是在食品加工业中进行的分析的目的是尽可能快地并且完全安全地获得涉及样本中的病原体的存在/不存在和/或量化的信息。存在“属类的”分析方法，这些分析方法使得有可能在不区分微生物污染物的性质下检测样本中的微生物的存在/不存在(参见，例如US5795773或WO2010/017519)。在此情况下，检测样本的无菌或非无菌是问题。这种类型的属类的分析用于食品加工业，例如，用于UHT牛奶的分析，并且还常用于分析血液、脑脊液或尿液样本，这些样本在健康人亦或在环境场地是无菌的。另一方面，在其他样本如像食品样本的情况下，有待分析的样本可能天然地含有更大或更小量的微生物菌群。在大多数转化或非转化的乳制品中特别是这种情况。为了验证此类产品的安全性，于是有必要专门寻找在总的微生物菌群内的病原菌物种的存在。例如，经常在奶酪中寻找李斯特菌，并且经常在家禽肉中寻找沙门氏菌。定量方面也是重要的，因为可能有必要评估样本如食品中的所关心的一类微生物的浓度。这些数据从一种病原体至另一种变化(参阅欧盟官方公报的标准n°2073/2005)。为了进行样本中的这种病原菌的寻找，通常有必要在容器中在适当的液体培养基中分散和/或稀释该样本(总体上至1/10th)。因此称量该样本，添加适当的富集液体的量，并且然后均化整个混合物。需要此均化以便保证食品基质在培养基中的分散以及寻找的微生物的均匀分布。此步骤总体上凭借手动或机械操作通过允许均化的软质容器(袋)进行。所有这些步骤(称量、稀释、均化)代表“样本的制备”。然后将获得的混合物在给定的温度(通常37℃)下孵育给定的时间段(通常过夜)，从而允许寻找的微生物繁殖，这称为“富集阶段”。在此富集阶段结束时，总体上通过打开该容器取出样本，以便在该容器外进行该样本的随后分析；此分析可以例如是病原菌的检测。在固体或半固体样本的情况下，可能有用的是使用过滤器，有时被直接包括在该袋中，这将使得有可能截留固体颗粒(这些固体颗粒可能损害该分析或使能进行该分析的取样)，而同时允许这些微生物通过。因此获得结果需要一系列费时的且耗费人力的操作以及操纵并且是可能的风险(例如，操作员、工作环境或样本的污染)的来源或误差来源。此外，有利的是制造厂商能够尽早地具有这些分析的结果。然而，由于在富集时期结束时进行所寻找的微生物的检测，该结果可能仅在此富集阶段或其后的检测阶段结束时获得。文件FR2691374描述了滤袋，该滤袋由沿着三个边密封在一起的两个壁(由可变形的材料1和2制成)和过滤器3组成，第四边保持打开以便形成袋。该过滤器被密封在两个壁之间以便形成两个隔区，一个含有粗混合物溶液并且另一个含有滤液。此袋需要打开以便取样本并且然后进行分析。此操作难以自动化并且增加样本和处理者的污染的风险。文件FR2938449呈现了用于微生物学的滤袋，该滤袋具有管，该管使得滤液能够被带到该袋的打开侧并且因此使得对其采样简单。在此器件中，该袋不被封闭，并且它必须是打开的以便允许滤液沿着该管向上行进。此外，该管不使得有可能容易地分配该袋的内容物或以不漏的方式将其连接至传感器或自动取样系统。文件US5266486呈现了用于通过检测产生自微生物的生长的代谢物来检测存在于样本例如血样中的这些微生物的容器。尽管此容器使得有可能间接地检测细菌的存在，任选地不必须打开它，但它不允许分析该样本的机械均化，因为此容器必须是固体。这因此限制其对于液体样本的用途。文件WO2004/092401描述了用于检测存在于样本中的细菌的方法以及还有能够特别是检测在富集阶段过程中存在于样本中的细菌而没有操作员进行的任何取样的检测器件。然而，这种方法具有若干缺点：它要求该袋在均化后打开以便将该检测器件引入其中，该器件不适用于机械均化设备；此外，它要求控制温度，这些温度必须在该器件的两个隔室内是不同的。文件WO2012/004540描述了用于在富集阶段期间具体检测微生物的方法。在此方法中，将生物传感器密封在软塑料容器或浸入培养基中。由于该传感器被密封在该样本的同一高度上，不可能均化该袋的内容物而没有损坏该传感器或削弱该均化的风险。在文件WO2012/004540中提出的第二种替代方案中，该生物传感器必须被封闭在该袋中。这对与外部的连通强加了约束，特别是因为该生物传感器在该袋中的位置是不可再现的。WO2011/133694描述了电化学法以及还有用于通过使用适配子检测肠沙门菌的特定器件。然而，此器件，其使用刚性的样本容器，也要求样本的预先均化(尤其如果所述样本是固体或半固体)以及操作员的介入以便进行将待分析的悬浮液转移入该容器。因此它不使得有可能在同一容器中进行连续的制备以及富集步骤而不在该样本的均化结束时打开该容器。因此不存在用于制备、运输、稀释、均化以及分析固体或半固体样本的方法，该方法可以容易地自动化并且降低污染的风险。本申请人已经开发了一种分析样本的方法，该方法使得有可能克服直到现在已知的方法的缺点。因此，本专利技术涉及一种分析样本的方法、软质容器、以及还有分析套件。图1a至1e代表根据本专利技术的软质容器的多个实施例。图2a至2e、3和4说明了根据本专利技术的方法的实施。图5a至5c代表了对于包含在容器A、B和C中的切碎的牛肉的三个样本中的沙门氏菌属和大肠杆菌O157:H7的并行寻找获得的结果，所述容器对应地含有沙门氏菌属、大肠杆菌O157:H7以及不含污染物。根据本专利技术的分析样本的方法包括：a)将该样本和培养基引入软质容器中；b)均化该样本和该培养基以便获得均化的混合物；c)富集该均化的混合物；并且d)通过分析系统分析该均化的混合物；其特征在于步骤a)至c)在单一容器中进行；该软质容器在步骤a)和b)的任一个结束时被封闭；在步骤c)开始时、在其期间或结束时将组件(module)连接至该软质容器；并且进行步骤c)和d)以及该组件与该软质容器的连接而不要求重新打开该容器。根据本专利技术，该均化不仅是通过简单搅拌该容器和/或内容物的均化。术语“均化”还旨在是指通过该容器的机械变形均化该内容物。通过该容器的机械变形的这样的均化涵盖破碎、碾磨、捏合以及混合操作(当该内容物是固体、半固体或糊状时)，但是还有用于混合液体或悬浮液的操作。根据一个实施例，在该分析方法期间将若干容器连接至组件，因此允许同时分析包含在这些容器的每一个中的混合物。这种方法具有在单一容器中进行所有步骤(包括均化样本)而不要求在富集步骤后重新打开该容器的优点。因此，由操作员介入以及该操作员暴露于曾经富集的均化的混合物的数目可以减少，由此使得可能限制污染的风险以及还有更容易自动化该过程。此方法还可以容易地自动化，因为一旦该富集步骤已经开始该容本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分析样本的方法，包括：a)将该样本和培养基引入软质容器中；b)均化该样本和该培养基以便获得均化的混合物；c)富集该均化的混合物；并且d)通过分析系统分析该均化的混合物；其特征在于步骤a)至c)在单一容器中进行；该软质容器在步骤a)和b)的任一个结束时被封闭；在步骤c)开始时、在其期间或结束时将组件连接至该软质容器；并且进行步骤c)和d)以及该组件与该软质容器的连接而不要求重新打开该容器。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.04 FR 14530171.一种分析样本的方法，包括：a)将该样本和培养基引入软质容器中；b)均化该样本和该培养基以便获得均化的混合物；c)富集该均化的混合物；并且d)通过分析系统分析该均化的混合物；其特征在于步骤a)至c)在单一容器中进行；该软质容器在步骤a)和b)的任一个结束时被封闭；在步骤c)开始时、在其期间或结束时将组件连接至该软质容器；并且进行步骤c)和d)以及该组件与该软质容器的连接而不要求重新打开该容器。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该分析是微生物分析。3.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其特征在于该软质容器(100)包括均化区(105)、开口(101)和插口(106)，所述插口(106)位于该均化区(105)之外；该组件(200)包括能够并且旨在与该软质容器的插口(106)连接的插口(201)。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该软质容器(100)的构造上的改变在其封闭之后并且在步骤d)之前进行以便使该均化的混合物与旨在与该组件(200)的插口(201)连接的插口(106)接触。5.如权利要求1至4之一所述的方法，其特征在于，该软质容器的插口(106)当其不连接时被密封并且使得有可能当其连接至该组件的插口(201)时允许该均化的混合物通过。6.如权利要求1至5之一所述的方法，其特征在于，该组件(200)包括该分析系统。7.如权利要求1至5之一所述的方法，其特征在于，该分析系统包括检测装置(202)，这些检测装置使得能够选择性检测选自细菌和蛋白质的至少一种目标分析物。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，这些检测装置(202)是特异的光学的或电化学的生物传感器，这些生物传感器用特异配体进行官能化，这些配体优选地选自抗体、适配子和噬菌体蛋白质、低聚糖或有机小分子。9.如权利要求1至8之一所述的方法，其特征在于，该样本是固体或半固体的。10.一种分析套...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯托·卡朗丘克，大卫·卡拉拉，蒂埃里·利瓦什，蒂博·梅塞，费利克斯·皮亚特，约安尼·鲁皮奥斯，萨米·斯利马尼，
申请(专利权)人：普瑞斯特戴格公司，原子能和替代能源委员会，国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR