一种H5亚型禽流感DNA疫苗的构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，确立了一种H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建方法，利用猪捷申病毒1型（PTV‑1）的2A蛋白或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白具有自裂解功能，将Re‑6、Re‑7、Re‑8疫苗病毒HA1基因经猪捷申病毒1型（PTV‑1）的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因串联，插入到真核表达质粒中。该重组质粒可以分别表达Re‑6、Re‑7、Re‑8疫苗病毒的HA1蛋白。制备成DNA疫苗后，免疫动物可以同时抵抗三种流行分支H5亚型禽流感病毒的攻击，在生产上有较大的开发和应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
；具体说来，本专利技术确立了一种构建H5亚型禽流感DNA疫苗的方法，用于H5亚型禽流感的免疫与防控，在生产上有较大的开发和应用价值。
技术介绍
禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类传染病。禽流感病毒根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同，可分为16个HA亚型和9个NA亚型。高致病性禽流感是由某些H5或H7亚型禽流感病毒引起的严重威胁禽类的烈性传染病。2003年以来，H5亚型高致病性禽流感一直在包括中国在内的多个国家和地区流行，给养禽业造成了严重的经济损失。目前，疫苗仍然是防控该病的重要手段。2005年，我国开始实施针对禽流感的大规模强制性免疫政策，并取得了显著成效。目前，我们国家流行的H5亚型禽流感主要为第2.3.2.1分支、第7.2分支和第2.3.4.4分支的病毒，与之对应的这3个分支的疫苗分别为Re-6、Re-7和Re-8疫苗。目前市场上主要使用的是Re-6+Re-7+Re-8三价苗或Re-6+Re-8二价苗，这给疫苗生产和使用都造成了不便。猪捷申病毒1型（PTV-1）的2A蛋白和口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白具有自裂解功能，可以将串联的蛋白裂解成完整的蛋白个体。本专利利用2A蛋白的这个特性，提供了一种构建H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的方法。
技术实现思路
本专利技术研究建立了一种构建H5亚型禽流感病毒疫苗的方法。首先利用PCR或基因合成的方法，将Re-6疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re-7疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re-8疫苗病毒的HA1蛋白基因（含终止密码子）五者串联，然后插入到真核表达载体pCAGGS中，构建成重组真核表达质粒，制备成DNA疫苗。该DNA疫苗可以分别表达出Re-6、Re-7、Re-8疫苗病毒的HA1蛋白。具体实施方式下面通过实施例，说明本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不限于这个实施例。本实施例利用基因合成技术，人工合成将Re-6疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因、Re-7疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因、Re-8疫苗病毒的HA1蛋白基因（含终止密码子）五者串联体，插入到真核表达载体pCAGGS中，构建成重组真核表达质粒。将重组质粒转染293T细胞，分别使用针对Re-6、Re-7、Re-8疫苗的阳性抗体进行蛋白免疫印迹试验，可以检测到Re-6、Re-7、Re-8疫苗病毒的HA1蛋白的表达。将该重组质粒制备成DNA疫苗，免疫3周龄SPF鸡，100μg/只，免疫4周后，分别用第2.3.2.1分支、第7.2分支和第2.3.4.4分支的H5强毒攻毒，能够完全保护SPF鸡抵抗病毒的攻击，免疫攻毒试验鸡不发病、不排毒、不死亡。本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用PCR或基因合成的方法，将Re‑6疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re‑7疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re‑8疫苗病毒的HA1蛋白基因（含终止密码子）五者串联，插入到真核表达载体中，构建成重组真核表达质粒，制备DNA疫苗。

【技术特征摘要】
1.利用PCR或基因合成的方法，将Re-6疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re-7疫苗病毒的HA1蛋白基因（不含终止密码子）、猪捷申病毒1型的2A蛋白基因或口蹄疫病毒（FMDV）的2A蛋白基因、Re-8疫苗病毒的HA1蛋白基因（含终止密码子）五者...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋文明，李金平，侯广宇，朱琳，陈继明，
申请(专利权)人：中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：山东;37