一种黄蜀葵花醇提取物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种黄蜀葵花醇提取物在制备促成纤维细胞生长试剂中的应用，所述促成纤维细胞生长试剂为创伤愈合药物；所述黄蜀葵花醇提取物为干燥黄蜀葵花粉末，以乙醇水溶液回流提取、浓缩后得到的提取物。本发明专利技术首次提出并证明黄蜀葵花醇提取物的保护和促进成纤维细胞生长作用，效果显著，预示着很好的药用前景。本发明专利技术的黄蜀葵花醇提取物原料来源丰富、价廉，制备方法简单、成本低，可制成各种口服剂型，使用方便。本发明专利技术的黄蜀葵花醇提取物具有显著的促进创口愈合作用，毒副作用小。

【技术实现步骤摘要】
(一)
本专利技术涉及一种黄蜀葵花醇提取物的应用，具体涉及黄蜀葵花醇提取物在保护和促进成纤维细胞生长方面的新用途，尤其涉及制备创伤愈合药物中的应用。(二)
技术介绍
各种创伤均会造成不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损，必须通过细胞增生和细胞间基质的形成来进行组织修复。成纤维细胞(fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，是创伤修复过程中最主要的功能细胞，在细胞因子等因素的调控下，成纤维细胞发生增殖、迁移，并合成、分泌胶原和细胞外基质成分以及胶原酶等，参与肉芽组织形成、创口收缩、疤痕形成及组织重建的过程，保护和促进成纤维细胞生长是加速伤口愈合的基础与关键。同时成纤维细胞数量的增多有助于伤口愈合过程中毛囊的形成，进而降低皮肤愈合后落下疤痕的几率(Driskell R R,Lichtenberger B M,Hoste E,et al.Distinct fibroblast lineages determine dermal architecture in skin development and repair[J].Nature,2013,504(7479):277-281.)。黄蜀葵(Abelmoschl manihot L medic)花为锦葵科植物黄蜀葵的干燥花。性味甘寒滑，无毒，具有清利湿热，消炎解毒之功效，内服主治五淋，水肿；外用治疗痈疽肿毒，烫伤，其花蕾在一些地方作为蔬菜食用，安全无毒。黄蜀葵花在我国分布广泛、资源丰富，种植容易，价廉。但目前除了黄葵胶囊，已成为治疗慢性肾小球肾炎、蛋白尿的药物外，黄蜀葵花的产品研发仍屈指可数。从历史典籍的记载和现代临床实践看，深化基础研究，扩大黄蜀葵花适应证，具有良好前景。目前有关黄蜀葵花的研究发现其具有抗感染作用、对心脑缺血性损伤的保护作用、抑制乙肝病毒作用、抗炎作用等。但黄蜀葵花的其它作用还需进一步研究和探索，还未见黄蜀葵花醇提取物对能保护和促进成纤维细胞生长方面的报道。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种黄蜀葵花醇提取物的新用途，即在保护和促进成纤维细胞生长的新用途以及制备创伤愈合药物中的应用。本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供一种黄蜀葵花醇提取物在制备促成纤维细胞生长试剂中的应用。进一步，所述促成纤维细胞生长试剂为创伤愈合药物。进一步，所述黄蜀葵花醇提取物为干燥黄蜀葵花粉末，以乙醇水溶液回流提取、浓缩后得到的提取物。进一步，所述黄蜀葵花醇提取物按如下方法制备：称取干燥黄蜀葵花，粉碎，过50目筛，获得粉末，加入体积浓度80％乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，获得浸膏，即为黄蜀葵花醇提取物；所述乙醇水溶液体积用量以粉末质量计为10ml/g。进一步，所述试剂中黄蜀葵花醇提取物终浓度为100～1000μg/ml。进一步，所述试剂中黄蜀葵花醇提取物终浓度为100～500μg/ml。进一步，所述创伤愈合药物包括黄蜀葵花醇提取物和药用可接受的载体。进一步，所述创伤愈合药物为口服剂、外用剂、注射剂或复方制剂。进一步，所述创伤愈合药物中黄蜀葵花醇提取物有效浓度为100～1000μg/ml，优选500μg/ml。本专利技术黄蜀葵花醇提取物能够非常显著地促进成纤维细胞增殖。黄蜀葵花醇提取物各个浓度均能明显地促进成纤维细胞增殖，提高细胞活力，500μg/ml作用最显著，使细胞活力增加了42.8％；此外，当浓度达到1000μg/ml时，细胞活力虽不再增加，但仍在正常水平之上且与正常组有极显著差异(p<0.001)，由此可以看出，黄蜀葵花醇提取物有极明显的生物活性且对细胞几乎无毒性，它对创口愈合的促进作用与其促成纤维细胞增殖作用密切相关。在成功建立H2O2诱导NIH-3T3细胞损伤模型的基础上，研究黄蜀葵花醇提取物抗成纤维细胞氧化损伤的作用。结果显示，黄蜀葵花醇提取物浓度100～1000μg/ml能显著减轻过氧化损伤，提高受损细胞活力，减少细胞內酶LDH释放。其中500μg/ml的黄蜀葵花醇提取物抗氧化损伤效果最理想。机械划痕实验结果表明，黄蜀葵花醇提物各个浓度均能不同程度地促进成纤维细胞迁移，加快划痕愈合，其中500μg/ml组细胞迁移速度最快。可以认为黄蜀葵花醇提取物通过促进成纤维细胞迁移来加快创面愈合。与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：(1)本专利技术对黄蜀葵花醇提取物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。(2)本专利技术首次提出并证明黄蜀葵花醇提取物的保护和促进成纤维细胞生长作用，效果显著，预示着很好的药用前景。(3)本专利技术的黄蜀葵花醇提取物原料来源丰富、价廉，制备方法简单、成本低，可制成各种口服剂型，使用方便。(4)本专利技术的黄蜀葵花醇提取物具有显著的促进创口愈合作用，毒副作用小。(四)附图说明图1是黄蜀葵花醇提取物(HSK)对成纤维细胞增殖活性的影响；图2是不同浓度H2O2对细胞存活率的影响；图3是不同浓度黄蜀葵花醇提取物抗NIH-3T3细胞氧化损伤作用；图4是不同浓度黄蜀葵花醇提取物对细胞上清液中LDH活性的影响；图5是黄蜀葵花醇提取物对0.2mmol/L H2O2连续损伤下NIH-3T3细胞的保护作用；图6是黄蜀葵花醇提取物对0.8mmol/L H2O2连续损伤下NIH-3T3细胞的保护作用；图7是不同浓度黄蜀葵花醇提取物对细胞迁移率的影响；图8是不同时间点的NIH-3T3细胞迁移率比较图。(五)具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1 黄蜀葵花醇提取物(HSK)称取干燥黄蜀葵花(购自安徽亳州中药材市场)，粉碎，过50目筛，获得粉末50g，加入体积浓度80％乙醇水溶液500ml，加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，获得浸膏，即为黄蜀葵花醇提取物6.65g。按浸膏得率％＝浸膏重量/原料重量×100％计算，可得浸膏得率为13.3％，其浓度为含生药7.52g/g浸膏。实施例2 细胞增殖实验实验原理：设置不同终浓度的黄蜀葵花醇提取物组，分别作用于细胞，MTT法测定细胞活力，观察黄蜀葵花醇提取物对NIH-3T3细胞增殖活性的影响。实验方法：取生长状态良好、处于对数期的NIH-3T3细胞，以1.0×104个/孔接种于96孔培养板，37℃、5％CO2孵育24h。随机分成对照组和实验组(组1-组5)，每组6个复孔。吸弃上清液，对照组加入DMEM完全培养液(购自上海吉诺医药生物技术有限公司)，实验组加入不同终浓度的黄蜀葵花醇提取物(组1-组5生药量分别为10、50、100、500、1000μg/ml)，每孔100μl，继续培养24h后，每孔加入20μl MTT(5mg/ml，购自Sigma)，孵育4h，弃上清，加入150μl DMSO完全培养液完全溶解后，置于酶标仪上490nm处测定各组吸光度，比较黄蜀葵花醇提取物对成纤维细胞增殖能力的影响。各组实验均重复3次。结果见图1所示。由图1可知，以正常组细胞活力为100％基础，观察黄蜀葵花醇提取物作用24h时细胞的增殖情况，可见在一定浓度范围内，细胞活力随黄蜀葵花醇提取物浓度的增大而升高，当黄蜀葵花醇提取物浓度达到500μg/ml时，细胞活力值最大，比正常组提高了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄蜀葵花醇提取物在制备促成纤维细胞生长试剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种黄蜀葵花醇提取物在制备促成纤维细胞生长试剂中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述促成纤维细胞生长试剂为创伤愈合药物。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述黄蜀葵花醇提取物为干燥黄蜀葵花粉末，以乙醇水溶液回流提取、浓缩后得到的提取物。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述黄蜀葵花醇提取物按如下方法制备：称取干燥黄蜀葵花，粉碎，过50目筛，获得粉末，加入体积浓度80％乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，获得浸膏，即为黄蜀葵花醇提取物；所述乙醇水溶液体积用量以粉末质量计为10ml/g。5.如权利要求1所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋必卫，张俊，杨轶安，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33