本发明专利技术涉及一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，包括如下内容：(1)称取一定量样品，加适量PBS溶液溶解混匀，将该溶液通过滤膜过滤，并用适量PBS冲洗西林瓶，取滤液，进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)制备葡萄糖醛酸标准液系列。(3)向标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。(4)根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，然后根据计算公式计算得出游离透明质酸钠的含量。利用本发明专利技术的方法检测游离透明质酸钠含量，实验结果稳定可靠，重现性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学检验领域和药物分析领域技术，特别是一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法。
技术介绍
现有行业标准YY/T 0962-2014中游离透明质酸钠含量的测定是用离心的方法，但是离心以后，游离的透明质酸钠和交联的透明质酸钠不能很好的分离，取样的时候容易把交联部分的透明质酸钠取到，导致检测结果不准确，而用滤膜过滤的方法可以很好地进行分离，结果更准确可靠，误差小，重现性好。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对现有的行业标准YY/T 0962-2014中游离透明质酸钠含量的测定方法所存在的不足而提供一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，该检测方法简单易行，测定的结果更准确。本专利技术所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，包括如下步骤：(1)样品的配制步骤称取一定量样品，加适量PBS溶液，涡旋溶解混匀，用0.45-20μm的滤膜过滤，并用适量PBS溶液冲洗西林瓶，取滤液进行葡萄糖醛酸的测定；(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表制备葡萄糖醛酸标准系列。试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL020406080100(3)测定步骤：向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度，用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。在本专利技术的一个优选实施例中，所述步骤(1)用的滤膜的孔径是3-5μm。本专利技术是在现有的行业标准YY/T 0962-2014上改进了分析方法，实验结果更准确、可靠，误差小、重现性好。具体实施方式：通过下面给出的本专利技术的具体实施例可以进一步清楚地了解本专利技术，但它不是对本专利技术的限定。实施例1实验方法与过程：(1)样品的配制步骤取交联透明质酸钠凝胶0.5g于西林瓶中，加5mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径5μm)过滤，并用5mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表1制备葡萄糖醛酸标准系列。表1试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL020406080100(3)测定步骤：向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。(4)实验结果实验结果见表2表2实施例2实验方法与过程：(1)样品的配制步骤取交联透明质酸钠凝胶0.5g于西林瓶中，加5mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径3μm)过滤，并用5mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表3制备葡萄糖醛酸标准系列。表3试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL020406080100(3)测定步骤：向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。(4)实验结果实验结果见表4表4实施例3实验方法与过程：(1)样品的配制步骤取交联透明质酸钠凝胶1.25g于西林瓶中，加15mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径5μm)过滤，并用10mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表5制备葡萄糖醛酸标准系列。表5试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL020406080100(3)测定步骤：向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。(4)实验结果实验结果见表6表6实施例4(1)样品的配制步骤取交联透明质酸钠凝胶0.1g于离心管中，加水至5.0g，震荡均匀，将离心管置于离心机中，15000r/min，离心15分钟，去1ml上清液进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取0.1g葡萄糖醛酸对照品于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液5.0ml，置100ml容量瓶中，加水制成每1ml中含有50μg的溶液，摇匀，在4℃下贮存，有效期6个月。按下表7制备葡萄糖醛酸标准系列。表7试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL01020304050(3)测定步骤向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品的配制步骤称取一定量样品，加适量PBS溶液，涡旋溶解混匀，用0.45‑20μm的滤膜过滤，并用适量PBS溶液冲洗西林瓶，取滤液进行葡萄糖醛酸的测定；(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表制备葡萄糖醛酸标准系列。试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL020406080100(3)测定步骤：向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度，用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
【技术特征摘要】
1.一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品的配制步骤称取一定量样品，加适量PBS溶液，涡旋溶解混匀，用0.45-20μm的滤膜过滤，并用适量PBS溶液冲洗西林瓶，取滤液进行葡萄糖醛酸的测定；(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表制备葡萄糖醛酸标准系列。试管号012345GA标准溶液，mL00.20.40.60.81.0蒸馏水，mL1.00.80.60.40.20GA含量，μg/mL02040...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗丽，陈丽红，叶琳，
申请(专利权)人：浙江景嘉医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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