【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种哺乳动物肌内脂肪细胞和骨骼肌细胞分层共培养方法,其特征在于包括以下步骤:1)取动物背最长肌,肌内脂肪丰富的肌肉样组织,除去可见的血管和结缔组织,用PBS缓冲液冲洗;2)在无菌条件下将组织剪成小块,加入浓度为1g/LⅠ型胶原酶消化液消化;3)消化结束后,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基等体积中和消化液,用孔径为250μm的尼龙网筛过滤细胞悬液;4)步骤3)的滤液经900~1200r/m离心8~15min,取离心后的顶层悬浮成熟脂肪细胞液加入25cm2培养瓶中,在37℃、5%CO2培养箱中静置培养;所述的25cm2培养瓶需预先灌满含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,在37℃、5%CO2培养箱中静置孵育4~6小时,使培养瓶内保持均衡;5)取上一步离心的下层细胞加红细胞裂解液洗涤,轻轻吹打以裂解红细胞,作用3~8min后900~1200r/m离心3~8min;倒掉上层离心液,加无血清DMEM/F12培养基稀释洗涤下层细胞,再用孔径为80μm的尼龙网筛过滤,收集滤液,1000r/min离心5min;倒掉上层离心液,加入500μL含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,吹打分 ...
【技术特征摘要】
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