【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物技术领 域。
技术介绍
骨骼肌的形成是一个连续的生理过程。胚胎期，骨骼肌成肌细胞增殖、分化、融合 为初级肌管并逐步成熟；出生后，肌纤维的数目虽然不再改变，但当肌肉组织受损时，静息 的卫星细胞被激活，进而分裂、融合形成新的肌管，骨骼肌得以再生。依靠现代细胞分离、培 养技术，研究人员能够利用胚胎成肌细胞或成体卫星细胞体外培养获得初级肌管。 动物的各种运动依赖于骨骼肌的收缩，而肌肉收缩所必需的能量均来源于ATP，骨 骼肌肌球蛋白Ca 2+- ATPase通过控制横桥ATP的分解速率，从而影响肌肉的张力和收缩速 度。Peter等（Peter等，1972)根据肌球蛋白ATPase的活性把骨骼肌纤维分为3种类型： 慢收缩氧化型（I型）、快收缩氧化酵解型（Ila型）和快收缩酵解型（lib型）：1型肌纤维 的线粒体含量丰富，有氧代谢酶活性高，主要通过有氧代谢获取能量，由于参与肌纤维收缩 的ATPase的活性较低，I型肌纤维收缩慢但持久；lib型肌纤维ATPase和无氧代谢酶的活 性较高，线粒体含量较少且有氧代谢酶的活性很低...
【技术保护点】
一种提高鸡骨骼肌细胞氧化代谢能力的培养方法，其特征在于，从鸡胚胎中分离纯化鸡骨骼肌成肌细胞和肌源成纤维细胞，将成肌细胞接种于Transwell Insert的PET膜上进行增殖培养，同时将肌源成纤维细胞经过传代培养后接种于Transwell Insert培养皿上培养，再将经过增殖培养的成肌细胞转接入含有肌源成纤维细胞的Transwell Insert培养皿中，然后加入含有H2O2的分化培养基进行分化培养。
【技术特征摘要】
1. 一种提高鸡骨骼肌细胞氧化代谢能力的培养方法，其特征在于，从鸡胚胎中分离纯 化鸡骨骼肌成肌细胞和肌源成纤维细胞，将成肌细胞接种于Transwell Insert的PET膜上 进行增殖培养，同时将肌源成纤维细胞经过传代培养后接种于Transwell Insert培养皿上 培养，再将经过增殖培养的成肌细胞转接入含有肌源成纤维细胞的Transwell Insert培养 皿中，然后加入含有H202的分化培养基进行分化培养。2. 权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下： 1) 成肌细胞和肌源成纤维细胞的分离纯化：从鸡胚胎中分离纯化骨骼肌成肌细胞和 肌源成纤维细胞； 2) 成肌细胞的增殖培养：将步骤1)得到的成肌细胞接种到经过0.1 %明胶处理的 Transwell Insert的PET膜上，加入增殖培养基，获得增殖成肌细胞； 3) 肌源成纤维细胞的培养：将步骤1)所得的肌源成纤维细胞进行3-5代传代纯化培 养后，接种到Transwell Insert培养皿内，37°C下培养Id后，去除培养基并用PBS清洗； 4) 将步骤2)所得的增殖成肌细胞转接入步骤3)的Transwell Insert培养皿中，加入 含有H202的分化培养基，培养期间每隔24-48h半量换液，每隔8-12h，进行1次低温冲击刺 激，分化培养后获得骨骼肌的多核肌管。3. 权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)所述鸡胚胎为孵化11日龄的鸡胚胎。4. 权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)所述成肌细胞，接种密度为5000个/cm2， 所述PET膜为1 μ m孔径的PET膜；所述增殖培养，所用培养基为含有10% FBS、2mM L-谷氨 酰胺、l〇〇U/ml青霉素、100 μ g/ml链霉素的高糖DMEM培养基。5. 权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)所述增殖培养，培养温度为37°C，培养时 间为3-4d，C02体积浓度为5 %。6. 权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3)所述接种到Transwell Insert培养皿中 37°C下培养ld，成纤维细胞接种密度为2000个/cm2,所用培养基为含有10% FBS、100U/ml 青霉素、100 μ g...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，李海，刘忠华，连正兴，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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