一种白蘑科真菌培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种白蘑科真菌培养基及制备方法和应用，其原料包括占培养基原料总重0.01%-20%的多不饱和脂肪酸。本发明专利技术向培养基中添加了多不饱和脂肪酸，并对其用量及品种进行了优选；培养基中的多不饱和脂肪酸能够有效促进白蘑科真菌的生长，特别是其中的亚油酸和亚麻酸，对小蜜环菌属和蜜环菌属的真菌生长促进作用尤其明显；采用添加了亚油酸的培养基可提高假蜜环菌或蜜环菌的淀粉利用率及生长速率，生物量增幅达采用普通培养基培养时的四倍以上，其具有药用价值的代谢产物分泌量也有明显的增加。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开一种白蘑科真菌培养基及制备方法和应用，其原料包括占培养基原料总重0.01%-20%的多不饱和脂肪酸。本专利技术向培养基中添加了多不饱和脂肪酸，并对其用量及品种进行了优选；培养基中的多不饱和脂肪酸能够有效促进白蘑科真菌的生长，特别是其中的亚油酸和亚麻酸，对小蜜环菌属和蜜环菌属的真菌生长促进作用尤其明显；采用添加了亚油酸的培养基可提高假蜜环菌或蜜环菌的淀粉利用率及生长速率，生物量增幅达采用普通培养基培养时的四倍以上，其具有药用价值的代谢产物分泌量也有明显的增加。【专利说明】一种白蘑科真菌培养基及其制备方法和应用
本专利技术涉及微生物培养
，具体涉及一种白蘑科真菌培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
白蘑科真菌，属层菌纲伞菌目，是一类分布广泛的真菌。白蘑科真菌有大量富有经济价值的品种，其大多具有味道鲜美的子实体，部分品种具有较高的药用价值，具体如奥德蘑属真菌、金针菇属真菌、杯伞属真菌、柄伞属真菌、蜜环菌属、小蜜环菌属真菌等。对白蘑科培养的研究，具有良好的经济前景。以白蘑科小蜜环菌属的假蜜环菌(Armi llari ella tabescens (Scop.: Fr.)Sing.)为例，假蜜环菌是亚洲特有菌种，可药食兼用。中医认为，该菌性寒、味甘，有强筋壮骨、舒风活络、明目、利肺、益肠胃等保健功效。现代研究表明，用乙醇、乙酸乙酯提取可得到假蜜环菌甲素、假蜜环菌乙素、假蜜环菌丙素，其多糖成分据报道具有抗肿瘤和免疫调节活性，也有报道该菌对霉菌毒素具有一定解毒作用，因此对假蜜环菌的大规模培养具有广阔的应用前景。目前，国内对假蜜环菌的工业培养工艺的优化研究较少。中国协和医科大学的翟京辉利用葡萄糖，可溶性淀粉，蛋白胨，硝酸铵和玉米粉为原料，对各原料组分进行优化设计出液体培养基，对其接种假蜜环菌后进行摇床培养，每升培养基最多可获得增长的生物量18g;四川大学的罗霞使用葡萄糖，蔗糖，蛋白胨，酵母膏，K2HPO4, KH2PO4, MgSCUt为原料制备培养基，每升培养基最多能获得7.63g的生物量增长。可见现有的假蜜环菌培养基大多存在淀粉用量低的问题，其碳源大多采用葡萄糖、麦芽汁等实现，成分复杂而成本较高，不适宜用于大规模的工业生产。而为了提高培养基的出产率以及淀粉利用率，现有的研究大多从优化其碳氮比、改变其无机盐成分入手，但这些优化对出`产率的提升效果并不明显。蜜环菌属同样存在淀粉利用率低的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种产率高、成本低廉、适于大规模工业生产白蘑科真菌的培养基。本专利技术的目的通过以下技术方案实现:一种白蘑科真菌培养基，其原料包括占培养基原料总重0.01%-20%的多不饱和脂肪酸。优选的，所述白蘑科真菌为小蜜环菌属真菌或蜜环菌属真菌。特别对于小蜜环菌属和蜜环菌属的真菌，添加多不饱和脂肪酸后，单位培养基中的生物量增长也有较大的涨幅。培养基中的其他成分可选用任一种适用于小蜜环菌属或蜜环菌属真菌的培养基配方，经专利技术人验证，添加多不饱和脂肪酸后单位培养基的小蜜环菌和蜜环菌属真菌的生物量增幅最多可达到未添加多不饱和脂肪酸培养基的4倍以上，其分泌的代谢产物数量也大幅增长。如假蜜环菌，在采用被专利技术提供的培养基培养后，其来源于假蜜环菌的次生代谢产物——假蜜环菌多糖在发酵液中的浓度也有显著提升。对上述效果均未见有相关报道存在。 进一步的，所述多不饱和脂肪酸为碳链长度18-22的直链脂肪酸，其不饱和键数量为2-6 个。18-22的直链多不饱和脂肪酸能够达到对小蜜环菌属及蜜环菌属真菌生产促进作用的最大值，而不饱和键数量在2-6个时，多不饱和脂肪酸的成本方较为适宜应用于工业化生产中，虽机理尚未明确，但有已在实践中获得证明。优选的，所述多不饱和脂肪酸为花生四烯酸/亚油酸/共轭亚油酸/ α -亚麻酸/Y-亚麻酸/全顺式_4，7，10, 13，16，19-二十二碳六烯酸/全顺式_5，8，11，14，17-二十碳五烯酸中的一种或多种的混合。。本专利技术所称多不饱和脂肪酸均为市售产品。上述的多不饱和脂肪酸添加至培养基中后，均能产生上述对真菌生长的促进作用，且较为易于获得而价格低廉。其中，亚油酸的价格最高，但在中试时，等价值的亚油酸的效果更为明显，故其用量更少。因此，在各种多不饱和脂肪酸中，亚油酸更适宜投入大规模的工业生产中。因此本专利技术中可特别将所述多不饱和脂肪酸优选为亚油酸。本专利技术所称亚油酸，可通过任一种市售产品实现。但本专利技术并不排除因技术进步导致原料成本下降，进而可将其他多不饱和脂肪酸作为本专利技术的优选方案。优选的，所述培养基其原料还包括占培养基原料总重10-20%的马铃薯、1%-2%的鹿糖及余量的水。 PDA培养基具有制备简易、成本低廉等优点，专利技术人经长期的论证和设计，为最大程度地提高产量同时降低生产成本，最终确定培养基的其他成分为10%_20%的马铃薯及1%_2%的蔗糖。虽本专利技术中假蜜环菌和蜜环菌对淀粉的代谢能力大为提升，但专利技术人还是发现向培养基中添加1-2%的蔗糖能够有效缩短接种初的适应期，使真菌快速进入增长期，在宏观上体现为生物量的大幅增长，从而缩短培养周期。本专利技术同时提供一种上述白蘑科真菌培养基制备方法，将所述马铃薯、蔗糖、多不饱和脂肪酸溶于水中，采用旋转式摇床以100-160r/min的速度将各原料混合均匀，形成稳定的、不分层的培养基原液后，将其分装并灭菌获得所述假蜜环菌培养基。本专利技术的培养基可采用任一种PDA培养基制备方法实现。专利技术人采用旋转式摇床以100-160r/min对培养基进行混合,可使亚油酸与其他成分共同形成一稳定的体系。一般而言，摇床转速越高，多不饱和脂肪酸可在水溶液中形成越小的“油包水”颗粒，越有利于其与其他成分混溶而不易于分层。但经验证，以100-160r/min的速度震荡混合的培养基，其对假蜜环菌生长的促进效果更佳。推测原因为菌体在过高速下不容易形成团聚菌粒，而在适当的转速下更容易形成团聚体进行生长。所述分装是指将培养基原液分装为200ml每份；所述灭菌是指将分装好的培养基原液以120-125°C、102.9 KPa的高压蒸汽处理15_20min。本专利技术还提供一种所述的在白蘑科真菌培育中的应用。本专利技术的培养基可用于白蘑科真菌的发酵培养，亦可用其育种培养，获得子实体、代谢产物、菌种。所述应用包含以下工序:a.对白蘑科真菌采用固体培养基进行纯化，获得形成菌落的母种；b.将所述母种接种至所述培养基中，每100-300ml培养基接种l-3cm2的母种菌落，培养后获得白蘑科真菌子实体、菌丝体、菌种或其代谢产物。所述白蘑科真菌为假蜜环菌时，所述对白蘑科真菌进行纯化是指用将假蜜环菌试管种0.05-0.2g，至直径为6cm、厚度为0.3-0.7cm的孟加拉红固体培养基中，以20度的温度培养25-35天后，取外观干净、无污染的菌落即获得所述母种；所述工序b是指将所述母种接种至所述培养基中，并将其置于20-30°C温度中以150r/min震荡，并通入无菌空气，，获得所述假蜜环菌菌丝体、菌种或其发酵产物。本专利技术所称试管种，均可通过市售产品实现。 本专利技术向培养基中添加了多不饱和脂肪酸，并对其用量及品种进行了优选；培养基中的多不饱和脂肪酸能够有效促进白蘑科真菌的生长，特别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白蘑科真菌培养基，其特征在于：其原料包括占培养基原料总重0.01%‑20%的多不饱和脂肪酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏晓辰，
申请(专利权)人：魏晓辰，
类型：发明
国别省市：广东;44