一种化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱法，能够同时测定化风丹药母中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱三种生物碱的含量，所述方法专属性强、重现性、稳定性及精密度良好，峰形好，结果可靠，能够从源头上对化风丹质量进行控制，使化风丹质量达到稳定，可控及安全。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，所述检测方法采用高效液相色谱法，能够同时测定化风丹药母中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱三种生物碱的含量，所述方法专属性强、重现性、稳定性及精密度良好，峰形好，结果可靠，能够从源头上对化风丹质量进行控制，使化风丹质量达到稳定，可控及安全。【专利说明】—种化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法
本专利技术涉及，属于药品技术的领域。
技术介绍
化风丹是由药母、紫苏叶、僵蚕、天麻等中药材加工制成的丸剂，收载在《国家中成药标准汇编内科分册》。临床常用于治疗风痰闭阻、中风偏瘫、癫痫和面部神经麻痹等症。化风丹药母由牛胆水、白附子、生半夏、生天南星、生川乌、郁金和神曲经独特传统的发酵方法制作而成。由于化风丹药母的原料中含有生川乌等乌头类药材，众所周知，乌头类药材生品毒性比较大，临床用量较小，故一般需要炮制后方能入药。乌头的炮制一般为:蒸法、煮法、高压蒸制、微波炮制、酵母菌发酵法等。而本专利技术所述化风丹药母是利用微生物和酶经过一定时间的发酵制作而成。现代化学和药理研究证实了生物碱类成分是川乌的主要有效成分和毒性成分，其中双酯型生物碱是其主要的毒性成分。川乌中双酯型生物碱最具代表性的为:乌头碱、新乌头碱和次乌头碱。因此，对于化风丹药母中双酯型生物碱含量的测定具有重要的意义，但《国家中成药标准汇编内科分册》化风丹项下并没有对药母中双酯型生物碱制定标准，导致药母的质量参差不齐，进而影响化风丹的临床疗效。为此，本专利技术提供了化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法，为更好地控制化风丹的质量提供了参考。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供。所述检测方法能够同时测定化风丹药母中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱三种生物碱的含量，本专利技术所述检测方法便于操作，三种生物碱分离完全，峰形好，重复性好，结果可靠。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案实现:，所述化风丹药母按照重量组分计算，由牛胆汁126.7份、白附子28.2份、生半夏28.2份、生天南星28.2份、生川乌28.2份、郁金14.1份、神曲0.14份按照下述方法制备而成:取方中白附子、生半夏、生南星、生川乌、郁金、神曲粉碎成细粉；加入牛胆汁混合均匀，置于容器中发酵20-100天，取出，干燥，SP得。所述检测方法采用高效液相色谱法测定:色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相:以乙腈:四氢呋喃=25:15为A;以乙酸一乙酸铵溶液(先配制0.1mol.I/1的乙酸铵溶液，再以每IOOOmL0.1mol.L—1乙酸铵溶液中加入0.5mL冰醋酸的比例配制而成)为B，进行梯度洗脱，洗脱程序为:0 ?22min，20% ?23%A、80% ?77%B ；22 ?40min，23% ?25%A、77% ?75%B ；流速1.0mL.mirT1,柱温30°C,检测波长200?300nm ;理论塔板数按次乌头碱峰计算不低于 1000 ?6000 ；对照品溶液的制备:取乌头喊、新乌头喊、次乌头喊对照品适量，精S称定，加异丙醇:三氯甲烷=1: I的混合液制成每ImL含乌头碱0.050?0.150mg,含新乌头碱0.080?0.200mg,含次乌头碱0.060?0.160mg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备:取化风丹药母2?4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入氨试液1.5mL,精密加入异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液10?50mL，称定重量，超声处理20?40min，放冷，再称定重量，异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液12.5mL, 40?60°C水浴挥干，残渣精密加入异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液2mL溶解，滤过，取续滤液，即得；测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入高效液相色谱仪，分别测量乌头碱、新乌头碱和次乌头碱峰的面积，计算，即得。前述化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法中，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 Jnertsil 0DS-SP4.6mmX 250mm, 5 μ mD前述化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法中，检测波长为235nm，理论塔板数按次乌头碱峰计算不低于3000。前述化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法中，所述对照品溶液这样制备:取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇:三氯甲烷=1:1的混合液制成每ImL含乌头碱0.129mg，含新乌头碱0.161mg，含次乌头碱0.140mg的混合对照品溶液。前述化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法中，所述供试品溶液这样制备:取化风丹药母2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入氨试液1.5mL,精密加入异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液12.5mL，50°C水浴挥干，残渣精密加入异丙醇:乙酸乙酯=1:1的混合溶液2mL溶解，滤过，取续滤液，即得。化风丹药母中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱三种双酯型生物碱总含量范围在0.0777 ?0.1147mg/g。专利技术人进行了大量的实验，以下是本专利技术所述检测方法的研究实验例:检测方法研究I仪器与试药1.1仪器LC-2010CHT型高效液相色谱仪(UV-VIS检测器，LC Solution色谱工作站，日本岛津)；METTLER AE240型电子分析天平(瑞士梅特勒)；KUDD0S型超声波清洗仪(上海商信化玻仪器有限公司);HH-S型恒温水浴锅(江苏国胜实验仪器厂);LRH-150S型恒温恒湿培养箱(广东医疗器械厂)。1.2试药乌头碱(批号110720-200410)，新乌头碱(批号0799-9403)，次乌头碱(批号11079-200805 )对照品均购自中国食品药品检定研究院，乙腈色谱醇(美国天地)、四氢呋喃色谱醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)，异丙醇色谱醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)，水为娃哈哈纯净水，乙酸铵分析纯(西陇化工股份有限公司)，乙酸乙酯分析纯(重庆江川化工有限公司)，三氯甲烷分析纯(西陇化工股份有限公司)，氨水分析纯(重庆江川化工有限公司)。2实验条件的选择2.1色谱条件的选择2.1.1流动相的选择本专利技术比较了不同流动相和相同流动相不同梯度洗脱程序如:乙腈-0.2%冰醋酸(浓氨水调pH为8.0) (28:72)；甲醇-0.2%三乙胺(70:30)；乙腈-0.1mol -T1乙酸铵溶液(梯度洗脱);乙腈-40m mo 1-T1乙酸铵溶液(梯度洗脱)；乙腈:四氢呋喃(25:15)-0.1mol.L—1乙酸铵溶液(每1000mL加冰醋酸0.5mL)(梯度洗脱)。结果表明，采用乙腈-0.2%冰醋酸(28:72)，甲醇-0.2%三乙胺(70:30)为流动相进行等度洗脱时，三个目标峰不能完全分离且峰形较差。比较了不同流动相的不同梯度洗脱程序后，结果表明，采用流动相乙腈:四氢呋喃(25:15)-乙酸一乙酸铵溶液(先配制0.1mol -l-1的乙酸铵溶液，再以每1000mL0.1mol -T1乙酸铵溶液中加入0.5mL冰醋酸的比例配制而成)，梯度洗脱(O~22min，20%~23%A，22~40min，23%~25%A)出峰时间适宜，色谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化风丹药母中双酯型生物碱的检测方法，其特征在于：所述化风丹药母按照重量组分计算，由牛胆汁126.7份、白附子28.2份、生半夏28.2份、生天南星28.2份、生川乌28.2份、郁金14.1份、神曲0.14份按照下述方法制备而成：取方中白附子、生半夏、生南星、生川乌、郁金、神曲粉碎成细粉；加入牛胆汁混合均匀，置于容器中发酵20?80天，取出，干燥，即得；所述检测方法采用高效液相色谱法测定：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以乙腈：四氢呋喃=25:15为A；以乙酸—乙酸铵溶液为B，进行梯度洗脱，洗脱程序为：0～22min，20%～23%A、80%～77%B；22～40min，23%～25%A、77%～75%B；流速1.0mL·min?1，柱温30℃，检测波长200～300nm；理论塔板数按次乌头碱峰计算不低于1000～6000；对照品溶液的制备：取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇：三氯甲烷=1:1的混合液制成每1mL含乌头碱0.050～0.150mg，含新乌头碱0.080～0.200mg，含次乌头碱0.060～0.160mg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备：取化风丹药母2～4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入氨试液1.5mL，精密加入异丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液10～50mL，称定重量，超声处理20～40min，放冷，再称定重量，异丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液12.5mL，40～60℃水浴挥干，残渣精密加入异丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液2mL溶解，滤过，取续滤液，即得；测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，分别测量乌头碱、新乌头碱和次乌头碱峰的面积，计算，即得。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张永萍，徐剑，高莉，廖小刚，曹国琼，
申请(专利权)人：遵义廖元和堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：