桑白皮药材或桑白皮提取物的总生物碱类成分指纹图谱的构建方法及其质量检测方法技术

技术编号:8240976 阅读:257 留言:0更新日期:2013-01-24 21:22
本发明专利技术提供了一种桑白皮药材或桑白皮提取物的总生物碱类成分指纹图谱的构建方法及其质量检测方法。该构建方法包括以下步骤:(a)制备桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液;以及(b)利用高效液相色谱法测得桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱。经过上述构建方法,测得了桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱,全面反映了桑白皮药材中总生物碱类活性成分。这不但提高了桑白皮药材以及桑白皮提取物的质量控制标准,而且本发明专利技术指纹图谱的构建方法具有稳定性好、重现性好的优点。通过与对照指纹图谱的比较,可准确地判断出市场上现有桑白皮中药材的质量问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材的质量检测领域,具体而言,涉及一种对桑白皮药材或桑白皮提取物中总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及检测方法。
技术介绍
桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮,始载于《神农本草经》,列为中品,历代本草均有收载。桑白皮性甘、寒,归肺经,具有泻肺平喘、利水消肿功能,主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。桑白皮的主要化学成分包括黄酮类化合物、哌啶型生物碱类化合物(以I-脱氧野尻霉素为代表)、香豆素类化合物、多糖类化合物等。桑白皮提取物由桑白皮药材为原料制备而成首先将桑白皮药材切制或粉碎,用水提取,提取次数为I 3次,优选提取3次,提取温度为室温至煮沸,优选煮沸提取,溶剂量为药材重量的10 30倍重量份,优选20 30倍,获得桑白皮药材水提取液;然后提取液浓缩后离心,上清液过强酸型阳离子交换树脂,树脂可选择001*4、001*7、D61、DOOlcc等型号,优选001*7(732型),上柱流出液弃之,收集O. I IN的氨水洗脱液,优选用O. 5N的氨水洗脱,洗脱液浓缩后,最终获得桑白皮提取物,或经过喷雾干燥、减压或常压干燥得到桑白皮提取物。桑白皮药材及其提取物在民间常用于消炎、利尿、解热、镇咳、祛痰等。桑白皮所表现出来的多种功效吸引着众多学者的目光,人们对其中的哌啶型生物碱类化合物开始了大量而深入的研究。20世纪70年代,日本学者Yoshiaki首次从桑白皮中分离得到一种生物碱Moranoline (I-脱氧野尻霉素,1-deoxynojirimycin, DNJ),研究证实它能在小肠竞争性抑制a-葡萄糖苷酶的活性,可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病。随后,国内外学者又从桑白皮中分离出多种生物碱,并确定了其分子结构。研究人员将这些生物碱类化合物作用于糖尿病小鼠模型并充分证明,上述多种生物碱类化合物的降糖效果非常明显。在对上述生物碱类活性成分的分离和提取过程中,人们发现由于DNJ及其他衍生物结构中含有较多羟基,属氮杂糖类,结构中没有苯环、双键、羰基等发色基团,在可见光区和紫外光区都没有吸收,故很难用HPLC-UV法直接测定其含量。目前国内外文献报道多采用荧光试剂芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)与DNJ发生柱前衍生化反应后,用HPLC-FLU法进行测定。FMOC-Cl是一种氨基酸衍生化试剂,主要用于伯胺和仲胺的衍生化,生成的衍生物具有稳定的荧光强度。DNJ分子中因为具有仲胺结构,所以可用FMOC-Cl进行柱前衍生化,生成的衍生物采用HPLC-FLU法进行测定。采用此方法对桑白皮药材或桑白皮提取物进行检测,虽然可以有效地检测出DNJ的含量,但是仅能检测出这一单一成分,无法全面反映并控制桑白皮药材以及桑白皮提取物中总生物碱类活性成分的含量。杨文宇等在题为《桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨》一文中,公开了一种从桑叶、桑椹、桑白皮和桑枝中提取总生物碱的方法。该方法利用氯-邻联甲苯胺试剂作为显色剂,利用薄层色谱分析以及分光光度法检测总生物碱。这种方法虽然比较简便,对仪器的要求不高,但其分辨率较差,总生物碱中所含成分及含量均无法检测出来,并不适合对桑白皮药材以及桑白皮提取物进行精确的质量检测。由此可见,为提高桑白皮药材以及桑白皮提取物现有质量标准,亟待建立一种检测精确度较高、可鉴别总生物碱类多种活性成分的检测方法。
技术实现思路
为了解决桑白皮药材或桑白皮提取物现有质量检测过程中仅能检测出单一成分,无法全面反映桑白皮总生物碱类活性成分含量的问题,本专利技术提供了一种桑白皮药材或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱的构建方法。本专利技术提供的桑白皮药材或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱的构建方法包括以下步骤(a)制备桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液以O. 02mol/L的盐酸溶液或水作为溶剂,将桑白皮药材的粉末配制成桑白皮药材溶液;或者以水作为溶剂,将桑白皮提取物的粉末配制成桑白皮提取物溶液;(b)利用高效液相色谱法测得桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱,操作步骤包括分别将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液,水浴下反应预定时间;再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液,过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪;所采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,并以乙腈为流动相A,0. 1%醋酸为流动相B进行梯度洗脱;梯度洗脱的程序为0 50分钟,流动相A体积比由30%上升到35%,流动相B体积比由70%下降到65% ;50 60分钟,流动相A体积比保持为35%,流动相B体积比保持为65% ;60 61分钟,流动相A体积比由35%上升到100%,流动相·B体积比由65%下降到0% ;61 70分钟,流动相A体积比保持为100%,流动相B体积比保持为0% ;70 71分钟,流动相A体积比由100%下降到30%,流动相B体积比由0%上升到70% ;荧光检测器激发波长为254nm,发射波长为309nm,柱温在20_40°C的范围内,经过上述色谱分离过程,从而测得桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱。进一步地,该构建方法还包括参照物溶液的制备,可将I-脱氧野尻霉素盐酸盐加入水中制备而成;制得的参照物溶液与桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液同时注入到高效液相色谱仪。进一步地,该构建方法中桑白皮药材溶液的制备包括将过50目筛的桑白皮药材粉末O. 2g,置于250ml容量瓶中,加O. 02mol/L盐酸溶液200_240ml,超声处理,放冷,再加O.02mol/L盐酸溶液至刻度,摇匀。进一步地,该构建方法中桑白皮提取物溶液的制备包括将桑白皮提取物粉末O.05g,置于IOOml容器中,加入50ml水,称定重量,超声处理;放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀;从容器中精密吸取O. 5ml加入容量瓶中,用水稀释至10ml,摇匀得到桑白皮提取物溶液。进一步地,通过该构建方法得到的桑白皮药材总生物碱类成分的对照指纹图谱具有11个特征指纹峰。各个特征指纹峰的保留时间为1号峰为O. 537±0. 038min,2号峰为 I. 000±0· OOOmin, 3 号峰为 I. 400±0· OlOmin, 4 号峰为 I. 429±0. 004min,5 号峰为 I. 470±0· 017min,6 号峰为 I. 906±0· 016min,7 号峰为 2· 028±0· 013min,8 号峰为 2. 203±0. 022,9 号峰为 2. 314±0. 034min, 10 号峰为 3. 633±0. 019min, 11 号峰为3.735±0. 022min。进一步地,通过该构建方法得到的桑白皮提取物总生物碱类成分的对照指纹图谱具有13个特征指纹峰。各个特征指纹峰的保留时间为1号峰为O. 530±0.029min,2号峰即 S 峰为 I. 000±0· OOOmin, 3 号峰为 I. 401 ±0. 009min,4 号峰为 I. 428±0. 005min,5号峰为 I. 471±0· 019min,6 号峰为 I. 517±0· 017min,7 号峰为 I. 908±0· 019m本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种桑白皮药材或桑白皮提取物的总生物碱类成分指纹图谱的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤:(a)桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液的制备所述桑白皮药材溶液的制备:以0.02mol/L的盐酸溶液或水为溶剂,将所述桑白皮药材的粉末配制成所述桑白皮药材溶液;所述桑白皮提取物溶液的制备:以水作为溶剂,将所述桑白皮提取物的粉末配制成所述桑白皮提取物溶液;(b)利用高效液相色谱法测得所述桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或所述桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱,其中,包括:分别将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入所述桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液,水浴下进行反应;再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑白皮药材溶液或所述桑白皮提取物溶液,过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪,其中,所述高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,0.1%醋酸为流动相B进行梯度洗脱,荧光检测器激发波长为254nm,发射波长为309nm,柱温在20?40℃的范围内,所述梯度洗脱的程序如下:0~50分钟,所述流动相A体积比由30%上升到35%,所述流动相B体积比由70%下降到65%;50~60分钟,所述流动相A体积比保持为35%,所述流动相B体积比保持为65%;60~61分钟,所述流动相A体积比由35%上升到100%,所述流动相B体积比由65%下降到0%;61~70分钟,所述流动相A体积比保持为100%,所述流动相B体积比保持为0%;70~71分钟,所述流动相A体积比由100%下降到30%,所述流动相B体积比由0%上升到70%;得到所述桑白皮药材总生物碱类成分指纹图谱或所述桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:段震文郭树仁薛岚
申请(专利权)人:北京北大维信生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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