市场上TMB显色液存在稳定性差，保存时间短，显色背景高，灵敏度低等的缺点，本发明专利技术提供了一种高效稳定的TMB显色液。其特征在于，各组分的摩尔浓度或质量分数为：TMB的摩尔浓度为1.2mmol/L，H2O2的摩尔浓度为3.1mmol/L，曲拉通X-405的质量分数为0.3%，过氧化脲的质量分数为0.5%，醋酸钠的摩尔浓度为0.2mol/L，L(+)-酒石酸的摩尔浓度为0.027mol/L。本发明专利技术为TMB单相显色液，使用前无需混合，可以减少人为操作过程中的误差，通过引入非离子表面活性剂，使单相TMB显色液可以长期稳定保存。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】市场上TMB显色液存在稳定性差，保存时间短，显色背景高，灵敏度低等的缺点，本专利技术提供了一种高效稳定的TMB显色液。其特征在于，各组分的摩尔浓度或质量分数为：TMB的摩尔浓度为1.2mmol/L，H2O2的摩尔浓度为3.1mmol/L，曲拉通X-405的质量分数为0.3%，过氧化脲的质量分数为0.5%，醋酸钠的摩尔浓度为0.2mol/L，L(+)-酒石酸的摩尔浓度为0.027mol/L。本专利技术为TMB单相显色液，使用前无需混合，可以减少人为操作过程中的误差，通过引入非离子表面活性剂，使单相TMB显色液可以长期稳定保存。【专利说明】一种高效稳定的TMB显色液及其制备方法
本专利技术涉及临床体外检测技术，特别涉及一种高效稳定的TMB显色液及其制备方法。
技术介绍
自从Engvall和Perlman (1971)首次报道建立酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunosorbent Assays, ELISA)以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。目前酶免疫分析(EIA)技术，已被广泛应用于抗原，半抗原或抗体的定量或定性检测分析。酶联免疫吸附(ELISA)检测方法虽然有很多种，但各种方法都离不开酶结合物和显色剂。在ELISA试剂中应用最广泛的酶是辣根过氧化物酶(HRP)，而该系统的显色剂有多种，目前市场最常用的是TMB (3，3’，5，5’_四甲基联苯胺)。辣根过氧化物酶(HRP)及其藕联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶，由于3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB)在HRP的显色反应体系中，比其它色原具有更高的灵敏度且无至癌性而被广泛应用。TMB (3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺)是一种新型HRP (辣根过氧化物酶)色原底物。相对其他显色底物，TMB以显色高效、无毒、不致癌、稳定性好等特点成为ELISA检测的主流显色剂。在ELISA检测时，HRP催化过氧化物释放出氧使TMB被氧化成蓝色的产物，力口入酸性的终止液终止反应后，蓝色溶液变成橙黄色，在450nm波长有最大吸收峰。通过测量吸光度，便可定性或定量判断出被检测物的含量。常见的TMB显色试剂多由几个组分共同组成，并且常需要现配现用，使用不便，且容易导致检测结果不太稳定。一般市场常见TMB显色试剂通常分为A、B两种贮存液，使用需将两者按比例混合，操作繁琐且容易错配，常导致实验失败。此外，市场上也有少见的单相的TMB显色液，但常常存在稳定性差，保存时间短，显色背景高，灵敏度低等的缺点。
技术实现思路
针对上述技术背景，本专利技术提供了一种高效稳定的TMB显色液及其制备方法。本专利技术的一种高效稳定的TMB显色液，其特征在于，各组分的摩尔浓度或质量分数为:TMB的摩尔浓度为1.2mmoI/L7H2O2的摩尔浓度为3.lmmol/L,曲拉通X-405的质量分数为0.3%，过氧化脲的质量分数为0.5%，醋酸钠的摩尔浓度为0.2mol/L，L(+)-酒石酸的摩尔浓度为0.027 mol/L。所述的一种高效稳定的TMB显色液的制备方法，其特征在于包括以下步骤:a.制备A液:以IOmL 二甲亚砜为溶剂，缓慢加入TMB，搅拌均匀使其充分溶解。b.制备B液:取IL蒸馏水，加入醋酸钠16.406g使之终摩尔浓度为0.2mol/L ;然后加入L(+)_酒石酸4.1g使之终摩尔浓度为0.027 mol/L，溶液最终pH值约为5.0。c.在B液中加入适量A液、曲拉通X-405(Triton X_405)、H202和过氧化脲，使TMB终摩尔浓度为1.2 mmol/L, H2O2终摩尔浓度为3.lmmol/L,曲拉通X-405 (Triton X-405)的终质量分数为0.3%，过氧化脲的终质量分数为0.5%。本专利技术的使用方法: 用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗)，倒出适量的单组分TMB显色液，待达到室温后即可进行如下步骤: a)加液:加完HRP结合物并温育一定时间后，洗板3-5次，每孔加TMB显色液100uL。根据实验需要，在室温(15-25° C)或37° C下温育10-30分钟。b)终止:加等体积的lmol / L盐酸或硫酸溶液可终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。c)读数:终止反应后30分钟内在450nm处读数。相比市场常见TMB显色液而言，本专利技术为TMB单相显色液，使用前无需混合，简化操作流程，方便快捷，可以减少人为操作过程中的误差。通过引入非离子表面活性剂，促进TMB的溶解和稳定，使单相TMB显色液可以长期稳定保存，在疒8°C条件下保存有效期可达3年，并且显色终止后读数稳定。【专利附图】【附图说明】下面结合附图对本专利技术的【具体实施方式】作进一步详细的说明。图1实施例1方法制备的TMB显色液用酸溶液终止反应后TMB黄色产物的稳定性。图2实施例1方法制备的TMB显色液存放时间段后的稳定性。【具体实施方式】实施例1 本专利技术所述的一种高效稳定的TMB显色液的制备方法包括如下步骤:a.制备A液:以IOmL 二甲亚砜为溶剂，缓慢加入TMB，搅拌均匀使其充分溶解。b.制备B液:取IL蒸馏水，加入醋酸钠16.406g充分溶解，使之终摩尔浓度为0.2mol/L ;然后加入L(+)_酒石酸(L(+)-2，3- 二羟基丁二酸)4.1g充分溶解，使之终摩尔浓度为0.027 mol/L,溶液最终pH值约为5.0。c.在B液中加入适量A液、曲拉通X-405(Triton X_405)、H202和过氧化脲，使TMB终摩尔浓度为1.2 mmol/L, H2O2终摩尔浓度为3.lmmol/L,曲拉通X-405 (Triton X-405)的终质量分数为0.3%，过氧化脲的终质量分数为0.5%，醋酸钠的摩尔浓度为0.2mol/L,L (+)-酒石酸的摩尔浓度为0.027 mol/L。实施例2 将实施例1的TMB显色液与国家食品药品监督管理局认可的某公司商品化的TMB显色液(简称为:对比显色液I)进行对比。该对比显色液配方，其中各组分的摩尔浓度或质量分数为: TMB的摩尔浓度为2.0mmoI/L, H2O2的摩尔浓度为4.0mmoI/L, 过氧化脲的质量分数为0.1%， 磷酸氢二钠的摩尔浓度为0.lmol/L，柠檬酸的摩尔浓度为0.013 mol/L。以丙型肝炎病毒核心抗原试剂盒(双抗体夹心法ELISA)为例，显色15min后终止反应，在终止反应后的0，15，30，45，601^11时测得OD值(λ =450nm)。用酸溶液终止反应后，计算TMB黄色产物的稳定性。对比结果见说明书附图图1。由图1可以看出，实施例1方法得到的TMB显色液在终止反应后，TMB黄色产物的稳定性明显优于对比组TMB显色液。实施例1方法得到的TMB显色液在终止反应30分钟后，TMB换色产物几乎没有衰减；在终止反应60min时，仅有轻微裳减，稳定性明显提闻。 实施例3 将用实施例1的方法制备的TMB显色液与国家食品药品监督管理局认可的某公司商品化的TMB显色液进行比较(简称为:对比显色液I)。以丙型肝炎病毒核心抗原试剂盒(双抗体夹心法ELISA)为例，分别用实施例1的方法制备的TMB显色液和国家食品药品监督管理局认可的某公司商本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高效稳定的TMB显色液，其特征在于，各组分的摩尔浓度或质量分数为：TMB的摩尔浓度为1.2mmol/L，H2O2的摩尔浓度为3.1mmol/L，曲拉通X‑405的质量分数为0.3%，过氧化脲的质量分数为0.5%，醋酸钠的摩尔浓度为0.2mol/L，L(+)‑酒石酸的摩尔浓度为0.027 mol/L。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谭柏清，李志明，甘宜梧，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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