一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种细胞培养方法，尤其涉及一种宫颈上皮内瘤变细胞的培养方法。
技术介绍
宫颈癌是世界范围内最常见的妇科恶性肿瘤，其发生是一个由癌前病变逐渐衍变为癌的过程，时间可以从数年到数十年。这种癌前变化代表了一系列组织学异常的宫颈上皮细胞，故又称为宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia, CIN)。根据细胞异常的程度，CIN又进一步分为CINI (轻度不典型增生)，CINII (中度不典型增生)和CINIII (重度不典型增生和原位癌)。CINI在大多数情况下会自然消退，因此，事实上不属于癌前病变的范畴；但是CINII和CINIII往往持续存在，其中20%~45%未经治疗CINII / III会进一步发展成宫颈癌，因此，CINII和CINIII被认为是高级别病变和宫颈癌前病变。研究认为，几乎所有高级别CIN都是由致癌性人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus, HP V)的持续感染引起的，而长期的病毒感染是CIN进一步发展的必要条件，但是，病毒没有自己独立的代谢系统，必须寄生在宿主细胞中才能繁殖...
【技术保护点】
一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，取小块人宫颈瘤变组织，小部分进行HPV分型检测，部分进行培养；步骤二，用I型胶原酶消化分解后制成细胞悬液；步骤三，利用台盼蓝拒染法对细胞的活性进行判定；步骤四，将细胞悬液接种到低胎牛血清培养基且经鼠尾胶原包被的培养瓶中，等待细胞贴壁；步骤五，细胞贴壁后更换无血清培养基对宫颈上皮内瘤变细胞进行纯化，每周更换至少两次培养液，待细胞融合至80％～85％后传代；步骤六，通过免疫荧光检测对细胞进行鉴定，通过PCR对HPV进行分型检测。
【技术特征摘要】
1.一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤一，取小块人宫颈瘤变组织，小部分进行HPV分型检测，部分进行培养； 步骤二，用I型胶原酶消化分解后制成细胞悬液； 步骤三，利用台盼蓝拒染法对细胞的活性进行判定； 步骤四，将细胞悬液接种到低胎牛血清培养基且经鼠尾胶原包被的培养瓶中，等待细胞贴壁； 步骤五，细胞贴壁后更换无血清培养基对宫颈上皮内瘤变细胞进行纯化，每周更换至少两次培养液，待细胞融合至80%~85%后传代； 步骤六，通过免疫荧光检测对细胞进行鉴定，通过PCR对HPV进行分型检测。2.如权利要求1所述的一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法，其特征在于，在上述步骤一中，用3%~5%醋酸和卢格氏碘溶液标记病变组织，在阴道镜引导下活检钳钳取宫颈上皮内瘤变组织约2~3mm3，在甲硝唑液体中浸泡4~6分钟，将宫颈上皮内瘤变组织取出后置于转移培养基中3°C~5°C低温保存。3.如权利要求2所述的一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法，其特征在于，所述转移培养基含有2000U / ml青霉素、2000ug / ml链霉素和5ug / ml两性霉素。4.如权利要求2所述的一种宫颈上皮内瘤变细胞的体外培养方法，其特征在于，在上述步骤二中，取出宫颈上皮内瘤变组织放入陪替氏培养基中；在无菌条件下，将宫颈上皮内瘤变组织用含有青霉素、链霉素和两性霉素的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2~4次； 将宫颈上皮内瘤变组织剪碎，加入预热至36°C~38°C的I型胶原酶，然后将其移入...
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0来自[美国] 2015年01月18日 15:39结肠癌患者腹胀很明显，大便变细形似铅笔。结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，占胃肠道肿瘤的第二位。好发部位为直肠及直肠与乙状结肠交界处，占60%。发病多在40岁以后，男女之比为2：1。一些结肠癌流行病学研究表明：社会发展状况、生活方式及膳食结构与结肠癌密切相关，并有现象提示影响不同部位、不同年龄组结肠癌发病的环境、遗传因素可能存在差异。