本发明专利技术涉及检测莫能菌素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。发光标记物是异鲁米诺发光标记物标记的莫能菌素半抗原，荧光标记物是指荧光素或其衍生物标记的莫能菌素单克隆抗体，分离试剂是指包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。本发明专利技术还涉及一种采用所述的试剂盒检测动物源性食品中莫能菌素的方法，本方法对莫能菌素检测具备较高的灵敏度、特异性和较快的检测速度。
【技术实现步骤摘要】
检测莫能菌素的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其检测方法。特别是检测动物组织、饲料等样本中莫能菌素药物残留的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。
技术介绍
莫能菌素(Monensin)是聚醚类抗生素，被广泛用于动物疾病的治疗，其主要作用机理是干扰球虫细胞内钠钾离子的正常交换，是大量的钠离子进入细胞内，造成钠离子在胞内浓度高，渗透压上升，跟多的水分进图球虫内，为了排除细胞内多余的钠，球虫必须动用能量将多余的钠外泵排除，最终造成有限的能量被用完；而后钠钾离子交换中断停止，细胞膨胀、变形、破裂、崩解。莫能菌素还可以影响反刍动物瘤胃内能量代谢，改善瘤胃发酵，提高丙酸与乙酸的产出比例，降低挥发性脂肪酸，减少甲烷生成，提高蛋白质利用效率。因此能够显著提高反刍动物的饲料利用率和促进生长的作用。但是莫能菌素在动物食品中的残留会影响人类健康，因此，欧美国家及我国均规定了莫能菌素在动物组织中的最大残留量。目前，莫能菌素药物的残留检测主要采用高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和酶联免疫吸附法等方法。1、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。2、气相色谱-质谱法(GC-MS)灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。3、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在:I)非均相反应:检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。2)酶催化反应:借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种检测莫能菌素的化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行莫能菌素的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。本专利技术的另一个目的在于提供一种莫能菌素的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。实现上述目的，本专利技术提供一种莫能菌素检测试剂盒，其包含的主要试剂有:发光标记物、突光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有顺磁性。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的莫能菌素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是 ABE1、AHEI 或 ABEN。所述的试剂盒还包括标准品,质控品和浓缩洗液。所述的荧光素标记物是FITC标记莫能菌素单克隆抗体。本专利技术还提供一种利用试剂盒检测莫能菌素的方法，包括下列步骤:I)分别吸取20μ1_100μ1标准品或样本，然后加入20μ1_100μ1发光标记物，再加20μ1-100μ1荧光素标记物，充分混匀后，37°C温育15min ；2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80_150μ1，混匀后在37°C温育5min ；3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300_500μ1冲洗复合物沉淀；4)上述清洗步骤重复2-4次；5)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物I和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算莫能菌素的浓度。所述的发光底物的主要成分是NaOH和Η202。本专利技术中分析测试方法所用的分析仪是:包括电源电路、自动注射泵I和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是C1-2008系统。本专利技术所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是0.1-0.3eqm/g,其保存于含有 8-10% 卵清蛋白，0.05-0.10%Tween_20,0.02-0.04%NaN3,pH7.2的PBS缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABE1、AHEI或ABEN标记的莫能菌素半抗原，其保存于含PH7.2,0.1-0.3%Tween-20,0.01%NaN3的PBS缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。所述的荧光素标记物是FITC标记的莫能菌素单克隆抗体，其保存于PH7.2，含5-8%牛血清白蛋白，0.02-0.04%NaN3的PBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。莫能菌素标准品溶液(0ng/ml,0.02ng/ml, 0.06ng/ml, 0.18ng/ml, 0.54ng/ml,1.6ng/ml)，标准品稀释液为pH7.2,0.03%NaN3,0.lmol/L PBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。莫能菌素质控品溶液浓度分别为0.05ng/ml, 1.0ng/ml,质控品稀释液ρΗ7.2，0.03%NaN3,0.lmol/L PBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。所述的浓缩洗液为pH7.2,0.2-0.4%Tween_20,0.02-0.04% NaN3,0.1-0.2mol/LPBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。本专利技术的有益效果如下:I)本专利技术试剂盒可特异性检测莫能菌素。2)本专利技术试剂盒的灵敏度较高，对莫能菌素的检测灵敏度可达0.02g/ml。3)本专利技术试剂盒的检测快捷，检测时间低于20min。【具体实施方式】实施例一试剂盒具体组分的制备I)莫能菌素人工抗原的制备将莫能菌素与牛血清白蛋白(BSA)采用活化酯法(NHS-DCC)进行偶联得到免疫原。3)单克隆抗体的制备动物免疫:以免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，免疫剂量为100 μ g/只，使其产生抗血清。细胞融合和克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按9:1比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，得到单克隆抗体的杂交瘤细胞株。细胞冻存和复苏:将杂交瘤细胞用冻存液制成IX IO9个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37°C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。单克隆抗体的制备与纯化:将Balb/c小鼠腹腔注入本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测莫能菌素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。
【技术特征摘要】
1.一种检测莫能菌素的磁颗粒化学发光试剂盒，包括的试剂有:发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述的顺磁性纳米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基团的微珠。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于:所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的莫能菌素半抗原。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于:所述的异鲁米诺发光标记物是ABE1、AHEI 或 AffiN。6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒还包括标准液、质控品和浓缩洗液。7.根据权利要求1-3之一所述的试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，周德刚，冯静，岳欣荣，韩京朋，余厚美，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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