本发明专利技术公开了一种基于化学发光酶联免疫分析的潜在指纹成像的方法，包括：将指印转移到基底上，得到指印样本；往所述指印样本的指印上加入手指代谢物的抗体溶液进行孵育，孵育完成后用缓冲液进行冲洗；将所述的指印样本干燥，然后向指印上加入辣根过氧化物酶标记的二抗进行孵育；孵育后，用所述的缓冲液冲洗指印样本，干燥后将指印样本置于化学发光反应底物溶液中，采集指纹图像。本发明专利技术的方法简单、快速、发光强度高，成像效果好。
Potential fingerprint imaging method based on chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay
The invention discloses a method, a latent fingerprint imaging chemiluminescence enzyme immunoassay based on the fingerprints will include: transfer to the substrate by fingerprint samples; antibody was added to the fingerprint fingerprint finger metabolites on samples were incubated after incubation with buffer flushing; the the fingerprint samples dry, then add to the fingerprints of horseradish peroxidase labeled two antibody incubation; after incubation, the buffer with the flushing fingerprint samples, after drying the fingerprint samples into the chemiluminescence reaction of substrate solution, collecting fingerprint image. The method of the invention has the advantages of simple and fast, high luminous intensity and good imaging effect.
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，包括：将指印转移到基底上，得到指印样本；往所述指印样本的指印上加入手指代谢物的抗体溶液进行孵育，孵育完成后用缓冲液进行冲洗；将所述的指印样本干燥，然后向指印上加入辣根过氧化物酶标记的二抗进行孵育；孵育后，用所述的缓冲液冲洗指印样本，干燥后将指印样本置于化学发光反应底物溶液中，采集指纹图像。本专利技术的方法简单、快速、发光强度高，成像效果好。【专利说明】
本专利技术属于分析化学和指纹检测
，尤其涉及一种。
技术介绍
潜在指纹是经身体自然分泌物(如汗液)转移形成的指纹纹路，目视不易发现，是案发现场中最常见的指纹。据我国各地不完全统计，警方侦破的刑事案件中，利用指纹破案占七成以上，并且比例正在逐年上升。通常情况下，指纹是犯罪分子在现场留下的最直接物证，所以，研究潜在指纹的显现技术，是提高指纹物证的采取率和利用率的重要环节。现代指纹学的发展已经具有上百年的历史，按照显现原理的不同，传统的潜在指纹显现方法主要分为三类:光学显现法、化学显现法以及物理吸附法。其基本原理是使用一种光线或物质作用于指纹印痕的汗液物质，使不能看见的潜在指纹变为可见的。发展至今，指纹检测不仅在法医鉴定、个体识别方面起着重要作用，同时广泛应用于日常生活中的安全检验、访问控制、个人认证等领域。近年来随着分析科学的发展，人们对指纹的研究已不仅仅停留在利用传统物理或化学手段对其形貌进行观察，同时更加致力于发展各种新兴技术如质谱成像、红外/拉曼成像、扫描电化学显微镜以及荧光免疫成像等，对指纹中的成分进行分析检测，从而发掘出更多有价值的生物学和医学信息。比如，恐怖分子是否接触过爆炸物、一个人是否具有吸烟的习惯，科学家都可以通过指纹检测来获取相关信息。尽管指纹显现技术在刑侦及分析科学中发挥着重大作用，但是目前在指纹显现领域中仍然存在诸多困难。例如，在传统方法中，大多要引用一种外源物质来对潜在指纹进行显现，处理过程较为繁琐复杂，同时对样本具有破坏性。目前广泛使用的烟熏法和刷粉法中采用的小粒度粉末对技术人员存在一定的身体损伤。而新兴的指纹技术如质谱成像法和红外/拉曼成像法，则需要用到昂贵的大型仪器和专业的操作知识，不利于普及。因此目前仍然需要一种简单、快速、适用范围广的方法对潜在指纹进行显现。化学发光酶联免疫分析是将抗原与抗体的高特异性免疫反应与高灵敏的化学发光检测技术相结合的分析方法。它克服了放射性免疫因使用放射性同位素而引起的放射性危害及污染问题，克服了荧光免疫分析中所需仪器复杂、背景干扰大的缺点，具有灵敏度高、仪器价格低、使用简便、安全、无放射性污染等独特的优势，已成为标记免疫的重要研究方向。伴随着高灵敏度、高分辨率CCD检测装置的出现，化学发光成像检测技术有了显著进步。与常规化学发光分析技术相比，化学发光成像技术可以提供直观图像，能产生光学图像的动态信息，用于生物分祈、医学临床诊断时也显得更为方便。目前并未有利用化学发光酶联免疫分析来对指纹进行检测和成像的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种，该方法简单、快速、灵敏且发光强度高，能够对指纹进行清晰的成像。—种基于化学发光酶联免疫分析的潜在指纹检测与成像的方法，包括:(I)将指印转移到基底上，得到指印样本；(2)往所述指印样本的指印上加入手指代谢物的抗体溶液进行孵育，孵育完成后用缓冲液进行冲洗；(3)将所述的指印样本干燥，然后向指印上加入辣根过氧化物酶标记的二抗进行孵育；(4)孵育后，用所述的缓冲液冲洗指印样本，干燥后将指印样本置于化学发光反应底物溶液中，采集指纹图像。人类指纹皮肤表面布满汗腺，触物留痕。一般来说留在客体表面的指纹物质较少，一般为0.llmg，其中99%为水分，会迅速蒸发掉；固体物质只占1%，其中2/3是有机物质，如:氨基酸、蛋白质、脂肪酸、尿素等；剩余1/3是无机物质。首先选择手指代谢物的抗体(一抗)，以及辣根过氧化氢酶(HRP)标记的二抗，通过抗体与代谢物的特异性免疫反应，使HRP间接标记到指纹上，然后通过化学发光反应，即可显示出指纹纹路。步骤(I)中，所述的指印可以为血指印或汗潜指印。所述的基底并没有特殊要求，可以为玻璃板、塑料板、不锈钢板、锡箔、纸片、胶带坐寸ο当所述的指印为血指印时，所述的手指代谢物具体可以为IgG。当所述的指印为汗潜指印时，所述的手指代谢物为表皮生长因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽 Dermcidin。试验发现，以IgG、表皮生长因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽Dermcidin四种代谢物为目标对象进行检测，可成功对指纹成像，且指纹纹理清晰。其中，IgG的抗体为羊抗人IgG，具体可购自生工生物工程有限公司，货号为DAC1011 ;表皮生长因子抗体具体可购自生工生物工程有限公司，货号为DA1709 ;溶菌酶抗体可购自生工生物工程有限公司，货号为DA2322 ;人汗腺抗菌肽Dermcidin抗体可购自百奇生物科技有限公司，货号AP6 718b。所述抗体溶液的浓度为0.05?0.2mg/mL,优选的，所述抗体溶液的浓度为0.1mg/mL。抗体溶液的浓度过高不仅浪费试剂，还会导致非特异性结合，或显色背景重，而浓度过低，则会导致抗原与抗体的反应不完全，化学发光强度弱，从而影响指纹成像效果。为使反应充分进行，加入抗体溶液后，所述孵育的时间为25?35min,优选为30mino所述辣根过氧化物酶标记的二抗的浓度为0.005?0.015mg/mL,优选为0.0lmg/mL。二抗浓度过高会增加非特异性结合，且发光强度也不会无限增强，二抗浓度过低则导致化学发光强度弱，指纹成像不清晰。为使反应充分进行，加入辣根过氧化物酶标记的二抗后，所述孵育的时间为25?35min,优选为 30min。步骤(2)和(4)中，所述的缓冲液为含0.1%吐温-20的PBS缓冲液。所述的化学发光反应底物溶液为含0.15M似(:1、3.0\10-%鲁米诺、1.4X10_4M对碘苯酚和1.2X 10_3M过氧化氢的Tris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液的pH为8.5。在辣根过氧化物酶的催化作用下，化学发光反应底物溶液中的H2O2与鲁米诺在指纹上产生波长425nm的化学发光，从而显现出指纹纹路。采用该种化学发光反应底物溶液可达到较好的发光效果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:(I)本专利技术的方法简单、检测迅速，只需数秒钟即可得到完整的指纹图像，远远快于扫描电化学显微镜技术(十几至几十小时)。(2)本专利技术的方法不需要昂贵仪器，便于现场快速实时检测，且发光试剂具有造价低、环境友好的优点。(3)本专利技术以酶联免疫分析为检测手段、化学发光成像为信号获取方式，与广泛使用的荧光法相比，本专利技术的方法不需要外加激发光源，因此不存在背景光干扰，指纹图像更加显著清晰。(4)本专利技术方法的灵敏度高，可实现汗潜指印中痕量代谢物(表皮生长因子、溶菌酶、人汗腺抗菌肽Dermcidin等)的特异性检测，能够在进行个体识别的同时还能实现汗潜指印成分分析的目的。【专利附图】【附图说明】图1是化学发光反应池的结构示意图；其中，1、底座；2、池体；3、凹槽；4、0型密封圈；5、螺栓；6、样本；图2a为羊抗人IgG浓度为0.0lmg/mL时检测的血指印化学发光图；图2b为羊抗人IgG浓度为0.lmg本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于化学发光酶联免疫分析的潜在指纹成像的方法，其特征在于，包括：（1）将指印转移到基底上，得到指印样本；（2）往所述指印样本的指印上加入手指代谢物的抗体溶液进行孵育，孵育完成后用缓冲液进行冲洗；（3）将所述的指印样本干燥，然后向指印上加入辣根过氧化物酶标记的二抗进行孵育；（4）孵育后，用所述的缓冲液冲洗指印样本，干燥后将指印样本置于化学发光反应底物溶液中，采集指纹图像。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏彬，许林茹，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：
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