本发明专利技术TERT启动子的单核苷酸多态性序列，属于生物技术领域。所述单核苷酸多态性序列为：TERT启动子chr5,1,295,228位为C或T的碱基多态性序列；TERT启动子chr5,1,295,242-1,295,243位为CC或TT的碱基多态性序列；TERT启动子chr5,1,295,250位为C或T的碱基多态性序列。本发明专利技术的优点在于首次在泌尿系肿瘤中发现TERT启动子的高频突变，为泌尿生殖系统肿瘤预后和监测的提供一种新的生物标志物。
Single nucleotide polymorphism sequence of TERT promoter
The invention discloses a single nucleotide polymorphism sequence of the TERT promoter, belonging to the biological technology field. The single nucleotide polymorphism sequence: TERT promoter chr5,1295228 is C or T nucleotide polymorphism sequence; TERT promoter nucleotide polymorphism sequence chr5,1295242-1295243 is CC or TT; TERT promoter chr5,1295250 is C or T nucleotide polymorphism sequence. The present invention has the advantage that a high frequency mutation of the TERT promoter is found in urinary tumors for the first time, providing a novel biomarker for the prognosis and monitoring of urogenital tumors.
【技术实现步骤摘要】
TERT启动子的单核苷酸多态性序列
本专利技术属于生物
，具体涉及TERT启动子的单核苷酸多态性序列。_2]
技术介绍
膀胱癌是排在第九位的全球最常见的肿瘤。2013年，在美国有超过73000名患者被诊断为膀胱癌，其中死亡人数约15000人。其中超过90%的患者最初诊断为原发性膀胱癌，大约75%的患者目前为表浅膀胱肿瘤，20%的为浸润性膀胱肿瘤，剩下的5%初诊为转移性肿瘤。先前的研究表明，膀胱癌有着多变的临床表现和遗传背景。最近的膀胱肿瘤研究报道了 8 个相关基因(UTX, MLL-MLL3, CREBBP-EP300，NCORl，ARID1A, CHD6)。目前检测“膀胱癌” 采用的肿瘤标记物主要有以下几种，但是各肿瘤标志物都存在不同的缺点: (1)、膀胱肿瘤抗原(BTA):BTA试剂分为BTA stat和BTA test两种；首先，这两种试剂都不能独立用于确诊膀胱癌；另外，BTA试剂价格昂贵，目前尚难以全面推广使用； (2)、LewisX抗原检测:Lewis X是一种ABO血型相关抗原，在正常尿路上皮中不存在该抗原；而5%~89%的移行细胞癌可检出Lewis X,但Lewis X与肿瘤的分级无关； (3)、核基质蛋白22(nuclear matrix protein22,NMP22):NMP22是核有丝分裂器蛋白，诊断膀胱癌的敏感性为48%~90%，特异性为70%~92%，NMP22对高级，高期膀胱癌敏感性较高； (4)、纤维蛋白/纤维蛋白降解产物(fibrindegradation products, FDP):用快速免疫检测法测定尿中FDP诊断膀胱癌的敏感性为68%，对T2~T4期膀胱癌的敏感性更是高达100% ； (5)、玻璃酸酶检测hyaluronidase,HAase:玻璃酸酶是一种细胞外降解基质透明质酸的内源性糖苷酶，在肿瘤进展中起重要作用，应用凝胶技术检测G2，G3级膀胱癌尿液中玻璃酸酶活性，敏感性达92%~100% ； (6)、端粒酶活性(telomerase):端粒是位于染色体末端的保护性结构，随细胞分裂逐步缩短，直至细胞死亡，端粒酶的作用就是延长端粒，现已发现多种肿瘤细胞中端粒酶活性增强，该法诊断包括低级，低期肿瘤在内的膀胱癌，敏感性可达91%。然而，导致膀胱肿瘤发生的关键点仍未完全阐明，同时由于这些个体标记的灵敏性较低以至于未被应用于临床实践中，这表明需要新的灵敏性高的生物标记。
技术实现思路
在本专利技术的试验过程中，在超过85%的人类肿瘤研究中发现端粒酶逆转录酶(TERT, TERT通过Human Genome Browser获取NCBI发布版本37的人类基因组序列:Feb.2009 (GRCh37/hgl9 ) ；>hgl9_ensGene_ENST00000310581_0 range=chr5:1295163- 1296562 5’pad=400 3’pad=0 strand=- repeatMasking=none)活跃，我们认为是一个人类肿瘤发生的重要机制。TERT是端粒酶的催化部分，位于5号染色体短臂，在人类肿瘤中调节端粒酶活性。最近人们应用全基因组测序在黑素瘤中发现TERT启动子突变。人们在一些膀胱癌样本中证实了高频率的TERT启动子突变。一些研究发现，具有活性的端粒酶或TERT表达增加与肿瘤的病理分期以及临床分期是相关联的。然而，人们还未获得TERT基因拷贝，TERT的表达或活性对膀胱癌的临床影响仍然是有争议的。在本专利技术中，我们通过试验得到TERT启动子的高频突变位点，并进行了相关的体外功能分析试验来证实:这些启动子的突变可提高ETRT活性，是导致恶性肿瘤发生的关键点所在，这些突变对泌尿生殖系统恶性肿瘤的诊断和预后具有重要的意义。本专利技术的目的在于公开了一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的: 一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列，其中，单核苷酸多态性序列为: TERT启动子chr5, I, 295，228位为C或T(即反链第chr5, I, 295，228位为G或A)的碱基多态性序列； TERT 启动子 chr5, 1，295，242-1，295，243 位为 CC 或 TT (即反链第chr5, I, 295，242-1，295，243位为GG或AA)的碱基多态性序列； TERT启动子chr5，1，295，250位为C或T (即反链第chr5，1，295，250位为G或A)的碱基多态性序列。本专利技术具有以下有益效果: 1、本专利技术为检测膀胱癌提供一种新的肿瘤标志物，对发现膀胱癌及其相关疾病的易感人群和基因诊断有重要价值； 2、本专利技术中的TERT启动子的高频突变可能膀胱癌发生的关键点所在，对探索膀胱癌等疾病的发病机制有重要意义； 3、本专利技术为临床生物治疗提供了分子靶向，同时也开辟新的治疗途径起到重要作用。【附图说明】: 1、图1为通过ABI3730 XL测序仪对PCR产物进行sanger测序得到的反链上体细胞突变位点； 2、图2为PCR(RT-PCR)对TERT表达的分析结果，其中WT为野生型、C228T为正链chr5，I, 295，228C>T 突变和 C250T 为正链 chr5, I, 295，250 OT ； 3、图3为蛋白免疫印记技术检测TERT的表达分析结果，其中WT为野生型、C228T为正链 chr5, 1，295，228C>T 突变和 C250T 为正链 chr5, I, 295, 250 OT ； 4、图4为染色质免疫共沉淀(ChIP)试验检测TERT表达分析结果，其中WT为野生型、C228T 为正链 chr5, 1，295，228C>T 突变和 C250T 为正链 chr5, I, 295, 250 OT ； 5、图5为划痕愈合实验检测TERT启动子突变对膀胱癌细胞的侵袭能力的结果，其中WT为野生型、C228T 为正链 chr5, 1，295，228C>T 突变和 C250T 为正链 chr5, I, 295, 250 OT0【具体实施方式】: 为使本专利技术的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本专利技术一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列作进一步的说明。试验例1:一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列: 一、样本来源及选择标准: 用中国泌尿生殖系统癌症基因组学协会(UCGC)会员机构新诊断的泌尿系统癌症病人的肿瘤组织作为实验组，同时用患者的外周血或形态正常膀胱组织作为对照组。所有标本收集后用液氮快速冷冻并立即存储在_80°C的环境中以用于更远研究。由两个独立的病理学家在显微镜下评估由苏木精-伊红(HE)染色制备的癌组织切片。在本研究中，仅有肿瘤细胞超过80%的肿瘤组织被用来提取DNA和进行随后的测序。目前研究中总共有302位泌尿生殖系肿瘤患者参与测序，包括216名膀胱癌患者，11名肾盂癌患者，24名肾细胞癌患者，21名肾上腺肿瘤患者，17名睾丸癌患者及13名前列腺癌患者。样本的选择标准:1、所有患者(302例)在术前都未经放疗或化疗；2、患者都是由中山肿瘤中心确诊的；3、样本组织都是新本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列，其特征在于，单核苷酸多态性序列为：TERT启动子chr5,?1,295,228位为C或T的碱基多态性序列；TERT启动子chr5,?1,295,242?1,295,243位为CC或TT的碱基多态性序列；TERT启动子chr5,?1,295,250位为C或T的碱基多态性序列。
【技术特征摘要】
1.一种TERT启动子的单核苷酸多态性序列，其特征在于，单核苷酸多态性序列为:TERT启动子chr5，I, 295，228位为C或T的碱基多态性序列；TERT启...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡志明，吴松，黄毅，王波，张蒙，杨雷，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。