【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】H4-1 1-E大鼠细胞中低岩藻糖抗体的生产专利技术背景
本专利技术涉及细胞培养
。其涉及在H4-11-E大鼠肝癌细胞中产生低岩藻糖糖蛋白、尤其是抗体及Fe-融合蛋白的方法。其涉及新宿主细胞系的鉴别及生成，所述细胞系能够合成具有有益性质的糖蛋白，相对于来自常用宿主细胞系的产物改善了治疗效果和/或血清半衰期。本专利技术涉及这些细胞系、尤其是大鼠肝癌细胞系H4-11-E用于表达重组蛋白的用途及优化，及其作为高活性生物药物治疗剂的应用。背景供人类疗法使用的生物药物市场持续高速增长，其中在临床研究中已评估270种新生物药物且估计2003年的销售额为300亿(Werner，2004)。可自不同宿主细胞系统(包括细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞及哺乳动物细胞以及源自人类的细胞系)产生生物药物。当前，由于真核细胞能够正确加工并翻译后修饰重组人类蛋白，因此越来越多的生物药物由其产生。因此，影响对用于制造过程的细胞系进行选择的关键问题是，以均一翻译后修饰模式一致地产生产物的能力(产生高生物活性、稳定性及批次间一致性)。当前经许可用于治疗应用的最大部分抗体为在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中制造的。其它生产系统是鼠类淋巴样细胞(包括NSO及Sp2/0-Agl4)。这些亲本细胞系也是在临床试验中最常用于产生抗体者。另外，使用鼠类及诸如人类细胞系PER.C6等其它细胞系O单克隆抗体的疗法已成为生物技术产业的主要焦点之一。尽管到目前为止已存在经食品和药物管理局(Food and Drug Administration)批准的有效单克隆抗体,但仍需要甚至更有效且...
【技术保护点】
一种包含编码抗体或Fc?融合蛋白的核酸序列的大鼠肝癌细胞，其中该核酸序列可操作地连接至至少一种允许表达该编码抗体或Fc?融合蛋白的核酸序列的调节序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.27 EP 10180321.1;2011.03.03 EP 11156848.11.一种包含编码抗体或Fe-融合蛋白的核酸序列的大鼠肝癌细胞，其中该核酸序列可操作地连接至至少一种允许表达该编码抗体或Fe-融合蛋白的核酸序列的调节序列。2.权利要求1的大鼠肝癌细胞，其中该细胞为H4-11-E细胞。3.权利要求或2的大鼠肝癌细胞，其中该细胞为: a)源自选自以下细胞的细胞:欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC，目录编号87031301)、美国典型培养物保藏中心(ATCC，保藏编号CRL-1548)、H4-11-E-C3细胞系(CRL-1600或HPACC 编号 85061112 或 ECACC 目录编号 85061112)、H4II 细胞系(HPACC Nr.89042702)、H4-TG 细胞系(CRL-1578)、H5 细胞系(HPACC, Nr.94101905)及 H4-S 细胞系(HPACCNr.89102001)，或 b)以编号ECACC目录编号87031301保藏于欧洲细胞培养物保藏中心或以保藏编号CRL-1548保藏于美国典型培养物保藏中心ATCC的细胞，或 c)以保藏号DSMACC3129(H4-11-E)保藏于DSMZ(德国微生物和细胞培养物保藏中心)的细胞，或 d)以保藏号DSMACC3130(H4-11-Es)保藏于DSMZ(德国微生物和细胞培养物保藏中心)的细胞，或 e)a)或b)或c)或d)中任 一细胞的衍生物或子代。4.权利要求1-3中任一项的大鼠肝癌细胞，其中该细胞是以保藏号DSMACC3129(H4-11-E)保藏于DSMZ(德国微生物和细胞培养物保藏中心)的细胞或其中该细胞是以保藏号DSM ACC3130(H4-11-Es)保藏于DSMZ (德国微生物和细胞培养物保藏中心)的细胞。5.权利要求1-4中任一项的大鼠肝癌细胞，其特征还在于 a)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有岩藻糖的程度小于20%、10% 或 5%,或 b)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有岩藻糖的程度在介于0% 至 20%、0% 至 10%、0% 至 5%、0.5% 至 20%、0.5% 至 10%、0.5% 至 5%、1% 至 20%、1% 至 10% 或1%至5%之间的范围内。6.权利要求1-5中任一项的大鼠肝癌细胞，其特征还在于 a)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有至少一个半乳糖残基的程度超过40%、45%或50%，或 b)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有至少一个半乳糖残基的程度在介于 40%至 100%、45%至 100%、50%至 100%、51%至 100%、40%至 99.5%、45%至 99.5%、50% 至 99.5% 或 51% 至 99.5%,40% 至 99%、45% 至 99%、50% 至 99% 或 51% 至 99% 之间的范围内， 其中所述糖苷结构优选含有一或两个优选与所述糖苷结构的末端非还原端处的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)连接的半乳糖残基(Gl或G2)。7.权利要求1-6中任一项的大鼠肝癌细胞，其特征还在于 a)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有末端唾液酸或神经氨酸残基的程度超过5%或超过10%，或 b)由该细胞表达的该抗体或Fe-融合蛋白中所含糖苷结构含有末端唾液酸或神经氨酸残基的程度在介于O至8%、1%至8%、5%至10%、10%至50%或10%至45%之间的范围内。8.权利要求1-7中任一项的大鼠肝癌细胞，其特征还在于其带有选择标记物基因，例如新霉素-磷酸转移酶(NPT);针对嘌呤霉素、潮霉素或Zeocin的抗性基因；或可扩增选择标记物基因，例如二氢叶酸还原酶(DHFR)或谷氨酰氨合成酶(GS)。9.权利要求1-8中任一项的大鼠肝癌细胞，其中该允许表达该编码抗体或Fe-融合蛋白的核酸序列的调节序列是 a)启动子，或 b)增强子，或c)5’-UTR 序列。10.权利要求1-9中任一项的大鼠肝癌细胞，其中该抗体或Fe融合蛋白含有连接至N-天冬酰氨(N-Asn)残基的糖苷结构，其中该糖苷结构包含以下糖链: 11.权利要求1-10中任一项的大鼠肝癌细胞，其中该抗体或Fe融合蛋白含有连接至N-天冬酰氨(N-Asn)残基的糖苷结构，其中该糖苷结构包含以下糖链: 12.权利要求10或11的大鼠肝癌细胞，其中根据KabatEU命名法，该N-Asn优选为N-Asn(297)。13.权利要求1-12中任一项的大鼠肝癌细胞，其中使该细胞适应于在无血清且钙减少或优选无钙的培养基中生长。14.权利要求1-13中任一项的大鼠肝癌细胞，其中使该细胞适应于在悬浮培养物中生长。15.权利要求1-14中任一项的大鼠肝癌细胞，其中该细胞与YB2/0细胞相比对细胞凋亡具有低敏感性和/或对细胞压力具有高稳健性。16.一种产生所关注糖蛋白的方法，其特征在于以下步骤: a)提供大鼠肝癌细胞， b)任选使该步骤a)的细胞适应于在悬浮培养物中生长， c)任选使该步骤a)和/或步骤b)的细胞适应于在无血清培养基中生长， d)任选使该步骤a)和/或步骤b)和/或步骤c)的细胞在钙减少或无钙的培养基中生长， e)用编码所关注重组糖蛋白的核酸序列转染此任选经适应的大鼠肝癌细胞， f)在允许表达该所关注糖蛋白的条件下培育该步骤e)的转染细胞， g)任选分离并纯化该所关注糖蛋白。17.权利要求16的方法，其中该大鼠肝癌细胞是H4-11-E细胞，优选地，该细胞为: a)源自选自以下细胞的细胞:欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC，目录编号87031301)、美国典型培养物保藏中心(ATCC，保藏编号CRL-1548)、H4-11-E-C3细胞系(CRL-1600或HPACC 编号 85061112 或 ECACC 目录编号 85061112)、H4II 细胞系(HPACC Nr.89042702)、H4-TG 细胞系(CRL-1578)、H5 细胞系(HPACC, Nr.94101905)及 H4-S 细胞系(HPACCNr.89102001)，或 b)...
【专利技术属性】
技术研发人员：K埃尔万格，L弗洛林，H考夫曼，
申请(专利权)人：贝林格尔英格海姆国际有限公司，
类型：
国别省市：
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