一种富含阿霍烯的组合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种富含阿霍烯的组合物的制备方法，它是以蒜酶为催化剂，将从大蒜中提取的天然蒜氨酸转化成二烯丙基硫代亚磺酸酯，通过膜浓缩，萃取分离富集后，再经反应、纯化得到高含量的阿霍烯产品。本发明专利技术产品工艺原料易得，生产工艺条件容易控制，产品纯度高。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，它是以蒜酶为催化剂，将从大蒜中提取的天然蒜氨酸转化成二烯丙基硫代亚磺酸酯，通过膜浓缩，萃取分离富集后，再经反应、纯化得到高含量的阿霍烯产品。本专利技术产品工艺原料易得，生产工艺条件容易控制，产品纯度高。【专利说明】
本专利技术涉及，尤其是一种涉及高含量反式阿霍烯的制备方法。
技术介绍
阿霍烯(Ajoene),又名大蒜烯,有顺式(Z-ajoene)和反式(E_ajoene)两种结构，是从植物油浸泡破碎的大蒜鳞茎得到的浸出物中分离的一种生物活性成分，为二烯丙基硫代亚磺酸酯(dialIyl thiosulfinate)在温和条件下缓慢分解得到的产物。阿霍烯作为源自大蒜的天然稳定的有效活性成分已越来越受到科技界的重视，对其药理、生理功能的研究报道也不断涌现，已有研究表明阿霍烯在抗凝血、降血压、解毒、抗癌、抗氧化、抗衰老及有机体的细胞介导免疫、体液免疫调节等过程中都可起到重要的作用。大蒜中主要活性物质为二烯丙基硫代亚磺酸酯，而大蒜鳞茎中本身不含二烯丙基硫代亚磺酸酯，只有在大蒜被破碎时，其前体物质一蒜氨酸在蒜酶(alliinase，EC4.4.1.4)的催化下与氧反应生成二烯丙基硫代亚磺酸酯。二烯丙基硫代亚磺酸酯在常温条件下极不稳定，在不同的条件下分解成不同的物质，一方面在温和条件下，二烯丙基硫代亚磺酸酯生产阿霍烯类(ajoenes)或发生环化反应生成乙烯基二硫杂苯类(vinyldithiins);另一方面,在剧烈条件下,如蒸懼生成二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和其它硫醚化合物(sulfides),活性大大降低。美国专利5612077公开了一种使用植物浸泡捣碎大蒜或蒜汁制备阿霍烯的工艺，产品中阿霍烯含量仅为500-700 μ g/g，产品为植物油复合物。美国专利20080102142公开了一种将大蒜经乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析分离阿霍烯的工艺。符小静报道了一种酶解转化制备阿霍烯的工艺，将新鲜大蒜粉碎后经酶解转化、甲醇提取、萃取分离制得含阿霍烯的大蒜提取物，进一步使用柱层析等多种分离方法得到纯度大于90%阿霍烯产品的方法。上述方法都存在纯化工艺复杂、产品收率低的问题。
技术实现思路
现有阿霍烯生产工艺收率低，产品成分复杂，包含顺式阿霍烯、反式阿霍烯、乙烯基二硫杂苯类，二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和其它硫醚且主要以活性较低的顺式阿霍烯为主。要从反应产物中分离高纯度的反式阿霍烯，需采用柱层析，高速逆流色谱等分离手段，工艺复杂。本专利技术针对现有工艺存在的上述问题，提供了一种高含量的阿霍烯，尤其是高纯度反式阿霍烯的制备方法。本专利技术是通过将纯化后的蒜氨酸溶液经固定化蒜酶催化生成二烯丙基硫代亚磺酸酯，反应液通过膜浓缩、萃取工艺富集生成的二烯丙基硫代亚磺酸酯，再将富集的二烯丙基硫代亚磺酸酯反应制得阿霍烯。 为实现本专利技术的技术方案概述如下。高纯度阿霍烯的制备方法包括以下步骤。(a)溶解在缓冲液中的蒜氨酸，在蒜酶的催化下发生反应，得到含有二烯丙基硫代亚磺酸酯的反应液。(b)将含有二稀丙基硫代亚磺酸酯的反应液浓缩。(c)浓缩后的溶液，使用有机溶剂萃取富集二烯丙基硫代亚磺酸酯。(d)将萃取得到的含二烯丙基硫代亚磺酸酯的溶液减压蒸馏回收溶剂，向回收溶剂得到的残留物中加入极性溶剂，控制反应温度25°C _70°C，搅拌反应6~120小时。(e)反应结束后，减压蒸馏回收溶剂。(f)反应物用甲醇水溶液溶解后，先用异戊烷萃取，分离得到的甲醇水溶液再用二氯甲烷萃取。(g)步骤(f)中分离得到的二氯甲烷溶液经无水硫酸钠脱水后，减压蒸馏回收溶剂得阿霍烯组合物。阿霍烯的含量测定方法 HPLC条件色谱柱:Si 60 250 mmX 4.mmX 5 u m ; 流动相:正己烷:异丙醇=85:15 (V/V)； 流速:1 mL/min ； 进样量:10 U L ; 检测波长:240 nm 具体实施方法。实施例1制备二烯丙基硫代亚磺酸酯。称取质量百分含量为50%的蒜氨酸100g，溶于IOL pH=6.5的缓冲液中，加入蒜酶溶液0.1L(蒜酶活性640U/mL)，于37°C搅拌反应60分钟，反应后测定溶液中二烯丙基硫代亚磺酸酯浓度为1.6g/L，收率为72.1%。实施例2制备二烯丙基硫代亚磺酸酯。将纯化的蒜酶包埋在壳聚糖中用戊二醛交联成型，测定其蒜酶活力为83U/g。取2kg固定化酶珠于装入夹套玻璃柱中(0 50*1000cm)，夹套用37°C热水循环；取质量百分含量为50%的蒜氨酸2kg溶于120L pH=6.5的缓冲液中，该反应液以3L/h的流速通过酶柱，完成后用水洗至流出液无蒜味。收集反应液153L，测得二烯丙基硫代亚磺酸酯浓度为5.26g/L,收率为84.48%。实施例3纯化二烯丙基硫代亚磺酸酯。取实施例2中反应液50L，用截流分子量(MWCO)为200D的纳滤膜浓缩至5L，用5L乙醚萃取4次，收集乙醚溶液，经无水硫酸钠脱水后真空浓缩得纯化的二烯丙基硫代亚磺酸酯168.4g，纯度为64.2%。实施例4纯化二烯丙基硫代亚磺酸酯。取实施例2中反应液50L，用反渗透膜浓缩至5L，用5L乙酸乙酯萃取5次，收集乙酸乙酯溶液，经无水硫酸钠脱水后减压回收溶剂，浓缩过程控制温度50°C~55°C得纯化的二烯丙基硫代亚磺酸酯182.6g，纯度为72.4%。实施例5制备阿霍烯。取实施例4中纯化二烯丙基硫代亚磺酸酯10g，溶于IL体积分数为80%的甲醇水溶液中，于37°C搅拌反应96小时，反应结束减压蒸馏回收溶剂至体积IOOmL,蒸馏过程控制温度50°C~55°C，蒸馏剩余溶液中加入IOOmL甲醇，用200mL异戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液减压回收溶剂，浓缩过程控制温度50°C~55°C，得阿霍烯产品6.87g，E-阿霍烯质量分数为77.24%，Z-阿霍烯质量分数为6.01%, E-阿霍烯与Z-阿霍烯质量分数之和为84.25%，E-阿霍烯占阿霍烯质量分数为 91.68%ο实施例6制备阿霍烯。取实施例3中纯化二烯丙基硫代亚磺酸酯10g，溶于IL体积分数为30%的丙酮水溶液中，于60°C搅拌反应8小时，反应结束减压蒸馏回收溶剂，蒸馏过程控制温度500C~55°C，加入200mL体积分数为60%的甲醇水溶液，用200mL异戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液减压蒸馏回收溶剂，蒸馏过程控制温度50°C~55°C，得阿霍烯产品6.61g，E-阿霍烯质量分数为76.12%，Z-阿霍烯质量分数为6.72%，E-阿霍烯与Z-阿霍烯质量分数之和为82.24%，E-阿霍烯占阿霍烯质量分数为92.56%。实施例7制备阿霍烯。取实施例4中纯化二烯丙基硫代亚磺酸酯10g，溶于IL体积分数为60%的丙酮水溶液中，于52°C搅拌回流反应10小时，反应结束减压蒸馏回收溶剂，蒸馏过程控制温度500C~55°C，加入200mL体积分数为40%的甲醇水溶液，用200mL异戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液减压回收溶剂，浓缩过程控制温度50°C~55°C，得阿霍烯产品6.37g，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阿霍烯组合物的制备方法，特征在于采用该方法制备的阿霍烯组合物由顺式阿霍烯和反式阿霍烯组成，该阿霍烯组合物中顺式阿霍烯和反式阿霍烯质量分数之和不低于80%，其中反式阿霍烯在总的阿霍烯中的质量分数不低于90%，该方法包括以下步骤：(a)?溶解在缓冲液中的蒜氨酸，在蒜酶的催化下发生反应，得到含有二烯丙基硫代亚磺酸酯的反应液；(b)?将含有二烯丙基硫代亚磺酸酯的反应液浓缩；(c)?浓缩后的溶液，使用有机溶剂萃取富集二烯丙基硫代亚磺酸酯；(d)?将萃取得到的含二烯丙基硫代亚磺酸酯的溶液减压蒸馏回收溶剂，向回收溶剂得到的残留物中加入极性溶剂，控制反应温度25℃?70℃，搅拌反应6~120小时；(e)?反应结束后，减压蒸馏回收溶剂；(f)?反应物用甲醇水溶液溶解后，先用异戊烷萃取，分离得到的甲醇水溶液再用二氯甲烷萃取；(g)?步骤(f)中分离得到的二氯甲烷溶液经无水硫酸钠脱水后，减压蒸馏回收溶剂得阿霍烯组合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘福锦，孙波，黄稳，包塔娜，曾艳丽，任建波，
申请(专利权)人：四川省荣桓科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：