用于治疗HBV感染及相关疾病的多肽及抗体制造技术

本发明专利技术涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的表位肽（或其变体），包含此类表位肽（或其变体）以及载体蛋白的重组蛋白，以及此类表位肽（或其变体）和重组蛋白的用途。本发明专利技术还涉及针对此类表位肽的抗体，产生所述抗体的细胞株，以及它们的用途。本发明专利技术还涉及可用于治疗或减轻乙型肝炎病毒感染相关的一种或多种症状的疫苗或药物组合物，它们分别包含本发明专利技术的重组蛋白或抗体。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的表位肽（或其变体），包含此类表位肽（或其变体）以及载体蛋白的重组蛋白，以及此类表位肽（或其变体）和重组蛋白的用途。本专利技术还涉及针对此类表位肽的抗体，产生所述抗体的细胞株，以及它们的用途。本专利技术还涉及可用于治疗或减轻乙型肝炎病毒感染相关的一种或多种症状的疫苗或药物组合物，它们分别包含本专利技术的重组蛋白或抗体。【专利说明】用于治疗HBV感染及相关疾病的多肽及抗体
本专利技术涉及分子病毒学和免疫学领域，特别是乙型肝炎病毒(Hepatitis Bvirus，HBV)感染治疗领域。具体而言，本专利技术涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的表位肽(或其变体)，包含此类表位肽(或其变体)以及载体蛋白的重组蛋白，以及此类表位肽(或其变体)和重组蛋白的用途。本专利技术还涉及针对此类表位肽的抗体，产生所述抗体的细胞株，以及它们的用途。本专利技术还涉及可用于治疗或减轻乙型肝炎病毒感染相关的一种或多种症状的疫苗或药物组合物，它们分别包含本专利技术的重组蛋白或抗体。
技术介绍
乙型肝炎病毒感染，尤其是慢性HBV感染是全球最为重要的公共卫生问题之一(Dienstag JL.Hepatitis B virus infection.N Engl J Med 2008 Oct2; 359 (14): 1486-1500)。慢性HBV感染可导致慢性乙型病毒性肝炎(Chronichepatitis B，CHB)、肝硬化(Liver cirrhosis, LC)和原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma, HCC)等一系列肝脏疾病(Liaw YF, Chu CM.Hepatitis B virus infection.Lancet 2009 Febl4; 373 (9663): 582-592)。据报道，目前全球约有20亿人曾经感染过HBV，现约有3.5亿的慢性乙型肝炎病毒感染者，这些感染者最终死于HBV感染相关肝脏疾病的风险可达15%-25%，全球每年超过100万人死于此类疾病(Dienstag JL.，同上；和Liaw YF等，同上)o当前针对慢性HBV感染的治疗药物主要可分为干扰素类(Interferon,IFNs)和核苷 / 核苷酸类似物(nucleoside or nucleotide, NAs) (Dienstag JL.,同上；Kwon H，Lok AS.Hepatitis B therapy.Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2011May; 8 (5):275-284;和Liaw YF等，同上)。前者包括普通干扰素(IFN)和聚乙二醇干扰素(Peg-1nterfeixm，Peg-1FN,又称为长效干扰素)，主要通过整体增强患者免疫能力来达到抑制HBV和治疗CHB的效果；后者主要包括拉米夫定(lamivudine，LMV)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil, ADV)、恩替卡韦(Entecavir, ETV)、替比夫定(Telbivudine, LdT)、替诺福韦(Tenofovir)等5种，主要通过直接抑制HBV的聚合酶活性来抑制HBV复制。对于HBV感染者(例如CHB患者)来说，上述药物的单独或联合治疗，已能较为有效地抑制体内病毒复制，大幅降低HBV DNA水平；特别地，52周或延长的此类治疗后，患者体内HBV DNA水平低于检测下限(病毒学应答)的应答率可达40-80% (Kwon H等，同上)。然而，上述药物的单独或联合治疗均不能完全清除感染者体内的HBV病毒，其导致的HBsAg阴转或HBsAg血清学转换(感染者体内HBV病毒彻底清除的标志)的应答率通常小于5% (Kwon H等，同上)。因此，针对HBV感染者发展创新的、能更为有效地清除HBV病毒、尤其是清除HBsAg的治疗方法和药物是迫切而必要的。基于免疫学手段发展新的治疗慢性HBV感染的药物是此领域的重要研究方向之一。慢性HBV感染的免疫治疗通常通过被动免疫治疗(其对应药物形式如抗体等)和主动免疫治疗(其对应药物形式如疫苗等)等两种方式来进行。被动免疫治疗(以抗体为例)是指，向HBV感染者被动施用具治疗特性的抗体，并利用抗体介导的病毒中和作用阻断HBV感染新生肝细胞，或利用抗体介导的免疫清除作用清除体内病毒和被感染的肝细胞，从而起到治疗的效果。目前，从预防性乙型肝炎疫苗免疫应答者或HBV感染恢复者血清/血浆中纯化获得的Ant1-HBs多克隆抗体，即高效价的乙肝免疫球蛋白(HBIG)已广泛应用于阻断HBV的母婴垂直传播、预防慢性HBV感染者肝移植后的HBV再感染、以及预防意外暴露于HBV的人群的感染。然而，将HBIG直接用于HBV感染者(例如CHB患者)的治疗无明显疗效，且其存在例如高效价血浆来源较少、价格昂贵、性质不稳定、潜在的安全性问题等诸多局限性。主动免疫治疗则是指，通过施用治疗性疫苗(包括蛋白疫苗、多肽疫苗和核酸疫苗等)，刺激慢性HBV感染者机体主动产生针对HBV的细胞免疫应答(CTL效应等)或/和体液免疫应答(抗体等)，从而达到抑制或清除HBV的目的。目前尚无明确显著有效的、可用于治疗慢性HBV感染的主动免疫治疗药物/疫苗。因此，针对HBV感染者发展创新的、能更为有效地治疗HBV感染的治疗方法和药物是迫切而必要的。
技术实现思路
尽管HBV病毒的各种蛋白上存在多个B细胞应答(抗体应答)表位，然而并非针对任意表位的抗体都能应用于HBV感染的治疗。因此，发展能有效地治疗HBV感染的免疫治疗药物/方法的关键在于，鉴定能诱发有效清除体内病毒和被病毒感染的细胞的抗体应答的革巴标(表位)，以及获得针对该祀标(表位)的抗体。本专利技术鉴定了此类靶标(表位)，并基于此提供了可用于治疗乙型肝炎病毒感染的表位肽(或其变体)，包含此类表位肽(或其变体)和载体蛋白的重组蛋白，以及此类表位肽(或其变体)和重组蛋白的用途。本专利技术还提供了针对此类表位肽/表位的抗体，产生所述抗体的细胞株，以及它们的用途。本专利技术还提供了可用于治疗或减轻与乙型肝炎病毒感染相关的一种或多种症状的疫苗或药物组合物，它们分别包含本专利技术的重组蛋白或抗体。在本专利技术中，除非另有说明，`否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“HBsAg”是指，乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原主蛋白，其是本领域技术人员公知的(参见，例如NCBIGENBANK数据库登录号:AAF24729.1)。如本文中所使用的，当提及HBsAg的氨基酸序列时，其使用SEQ ID NO:39所示的序列来进行描述。例如，表述“HBsAg的第119-125位氨基酸残基”是指，SEQ ID NO:39所示的多肽的第119-125位氨基酸残基。然而，本领域技术人员理解，在HBsAg的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加，例如不同基因型或基因亚型的HBsAg)，而不影响其生物学功能。因此，在本专利技术中，术语“H本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的表位肽或其变体，其由HBsAg蛋白的第119?125位氨基酸残基组成，且所述变体与其所源自的表位肽相异仅在于1个或几个（例如，1个，2个，3个或4个）氨基酸残基的保守置换，且保留了其所源自的表位肽的生物学功能，例如，所述HBsAg蛋白的第119?125位氨基酸残基如SEQ?ID?NO:1所示；例如，所述变体的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：袁权，张天英，罗文新，陈毅歆，张军，夏宁邵，
申请(专利权)人：厦门大学，厦门万泰沧海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：