通过质谱法检测雌二醇的方法技术

提供的是采用质谱法检测样品中雌二醇的量的方法。方法一般包括电离样品中的雌二醇以及检测和定量离子的量以确定样品中雌二醇的量。

【技术实现步骤摘要】
通过质谱法检测雌二醇的方法本申请是分案申请，原申请的申请日是2008年11月24日，申请号为200880125151.2（PCT/US2008/084561），专利技术名称为“通过质谱法检测雌二醇的方法”。
本专利技术涉及雌二醇的检测。在具体的方面，本专利技术涉及通过质谱法检测雌二醇的方法。
技术介绍
本专利技术的下列
技术介绍
的描述仅作为辅助理解本专利技术而提供，并且不被认为是描述或构成了本专利技术的现有技术。雌二醇[17β-雌二醇或雌-1,3,5(10)-三烯-3,17-二醇,(17-β)]或E2是分子量为272.38道尔顿的C18甾体激素。它是性激素，称为“雌性”激素(也存在于雄性中)，其是一组内源甾体中最有效的雌激素，其包括雌酮(E1)和雌三醇(E3)。在女性中，主要由卵巢产生雌二醇，由肾上腺次级产生，并在脂肪组织中将甾体前体转化至雌激素。雌二醇负责乳腺和生殖上皮的生长以及第二性征的发育。除了促进健康的骨结构和调节女性胆固醇水平外，雌二醇的正常水平提供适当的排卵、受孕和妊娠。在男性中，睾丸和肾上腺是雌二醇的主要来源。雌二醇被需要用于维持激素平衡和其他腺体的功能。采用质谱法检测具体雌二醇离子的方法已被描述。例如，NelsonR,etal.,ClinicalChem2004,50(2):373-84；Mellon-NussbaumS,etal.,JBiolChem1982,257(10):5678-5684；和XuX,etal.,NatureProtocols2007,2(6):1350-1355公开了使用液相层析和质谱法检测多种雌二醇离子的方法。这些方法在通过质谱法检测前衍生雌二醇。通过液相层析/质谱法检测未衍生的雌二醇的方法被公开在GuoT,etal.,ArchPatholLabMed2004,128:469-475；SunY,etal.,JAmSocMassSpectrom2005,16(2):271-279；和Diaz-CruzS,etal.,JMassSpectrom2003,38:917-923中。通过气相层析/质谱法检测雌二醇的方法被公开在NachtigallL,etal.,Menopause:JofN.Amer.MenopauseSociety2000,7(4):243-250；SantenR,etal.,Steriods2007,72:666-671；DorganJ,etal.,Steriods2002,67:151-158；BiancottoG,etal.,JMassSpectrom2002,37(12):1266-1271；FedeniukRW,etal.,JChromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci2004,802(2):307-315；和BiddleS,etal.,AnalChimActa,2007,586(1-2);115-121中。
技术实现思路
本专利技术提供通过包括在串联质谱法内的质谱法检测样品中雌二醇的量的方法。一方面，提供了测定测试样品中雌二醇的量的方法。所述方法可包括：(a)通过液相层析纯化测试样品中的雌二醇；(b)电离测试样品中的雌二醇；和(c)通过质谱法检测雌二醇离子(或多种)的量并且将检测的雌二醇离子(或多种)的量关联到测试样品中的雌二醇的量。在这方面某些优选的实施方式中，所述方法量化极限是小于或等于80pg/mL；以及优选地，雌二醇在质谱法之前没有进行衍生。在某些优选的实施方式中，所述方法包括产生雌二醇的一种或多种前体离子，其中至少一种前体离子具有271.14±.5或255.07±.5的质/荷比。在相关优选的实施方式中，所述方法可包括产生雌二醇前体离子的一种或多种碎片离子，其中至少一种碎片离子具有183.10±.5、159.20±.5、145.10±.5或133.20±.5的质/荷比；优选地，一种或多种碎片离子选自具有183.10±.5和133.20±.5的质/荷比的离子。在这方面某些优选的实施方式中，测试样品是体液。在某些优选的实施方式中，所述方法可包括将试剂以足以将雌二醇从可能存在于测试样品中的蛋白分离的量添加至测试样品。在相关优选的实施方式中，所述方法可包括酸化测试样品；优选地在电离前酸化；更优选地在纯化前酸化；优选地用甲酸酸化。在不同的优选实施方式中，所述方法可包括将盐以足以将雌二醇从可能存在于测试样品中的蛋白分离的量添加至测试样品；优选地在电离前添加；更优选地在纯化前添加；优选地添加硫酸铵。在特别优选的实施方式中，100mM硫酸铵添加至测试样品以使测试样品中硫酸铵终浓度为～57mM。如本文所用，除非另有所述，单数形式“一”(“a”、“an”和“the”)包括复数指代。因此，例如，“一个蛋白”的指代包括多个蛋白分子。如本文所用，术语“纯化（purification）”或“纯化（purifying）”不是指将除感兴趣分析物（或多种）之外的所有物质从样品中去除。而是，纯化是指相对于样品中可干扰感兴趣分析物检测的其他组分，富集一种或多种感兴趣分析物的量的方法。样品在本文中通过多种方法纯化以使得一种或多种干扰物质——例如可干扰通过质谱法检测所选择的雌二醇母离子和子离子的一种或多种物质——去除。如本文所用，术语“测试样品”是指可能含有雌二醇的任何样品。如本文所用，术语“体液”是指可从个体的身体上分离的任何液体。例如，“体液”可包括血液、血浆、血清、胆汁、唾液、尿液、泪液、汗液等。如本文所用，术语“衍生”是指使两个分子反应以形成一个新分子。衍生化试剂可包括异硫氰酸酯基团、二硝基-氟代苯基基团、硝基苯氧基羰基基团和/或苯二醛基团和类似物。如本文所用，术语“层析”是指这样的方法，其中由液体或气体携带的化学混合物当它们在固定液相或固相周围或之上流动时由于化学实体的微分分布而被分成各种组分。如本文所用，术语“液相层析”或“LC”是指当流体均一地通过细微分开的物质的柱或者通过毛细管道过滤时流体溶液的一种或多种组分选择性滞留的方法。滞留是由于当该流体相对于固定相(或多个)移动时混合物的组分在一个或多个固定相和本体流体（bulkfluid）（即流动相）之间的分布。“液相层析”的实例包括反相液相层析(RPLC)、高效液相层析(HPLC)和高湍流液相层析(HTLC)。如本文所用，术语“高效液相层析”或“HPLC”是指这样的液相层析，其中分离程度通过使流动相在压力下穿过固定相——通常为紧密填充柱——而增加。如本文所用，术语“高湍流液相层析”或“HTLC”是指这样的层析形式，其利用要分析物质通过柱填充的湍流作为进行分离的基础。HTLC已经被用于在通过质谱法分析之前含有两种未命名药物的样品的制备。参见例如Zimmer,etal.,J.Chromatogr.A854:23-35(1999)；也可参见美国专利号5,968,367、5,919,368、5,795,469和5,772,874，其进一步解释HTLC。本领域普通技术人员理解“湍流”。当流体缓缓并平稳地流动时，这种流动称为“层流”。例如，以低流速穿过HPLC柱运动的流体是层状的。在层流中，流体颗粒的运动以一般以直线运动的颗粒顺序进行。在更快的速度下，水的惯性克服了流体摩擦力并且形成湍流。不与不规则边界接触的流体“本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定测试样品中雌二醇的量的方法，所述方法包括：(a)用试剂以足以将雌二醇从可能存在于所述测试样品中的蛋白分离的量酸化所述测试样品；(b)通过液相层析从所述测试样品中纯化雌二醇；(c)电离来自所述测试样品的所述纯化的雌二醇以产生一种或多种通过串联质谱法可检测的离子；以及(d)通过串联质谱法以正离子模式检测所述雌二醇离子(或多种)的量，其中所述雌二醇离子(或多种)的量被关联到所述测试样品中的雌二醇的量。

【技术特征摘要】
2007.11.27 US 11/946,0171.通过串联质谱法测定体液样品中雌二醇的量的方法，所述方法包括：(a)通过高湍流液相层析(HTLC)和高效液相层析(HPLC)从所述体液样品中纯化雌二醇；(b)通过用负离子模式的大气压化学电离(APCI)电离所述雌二醇而产生所述雌二醇的前体离子；(c)产生所述前体离子的一种或多种碎片离子；和(d)检测步骤(b)或(c)或二者中产生的一种或多种所述离子的量并将所述检测的离子与所述体液样品中所述雌二醇的量相关联；其中所述方法的量化极限小于25pg/mL。2.权利要求1的方法，其中所述方法具有小于或等于10pg/mL的量化极限。3.权利要求1的方法，其中所述雌二醇在质谱法之前不被衍生。4.权利要求1的方法，其中步骤(a)-(d)以在线自动方式进行。5.权利要求1的方法，其中在所述电离步骤之前，试剂以足以将雌二醇从可存在于所述体液样品中的蛋白分离的量添加至所述体液样品。6.权利要求5的方法，其中所述试剂是硫酸铵。7.权利要求5的方法，其中所述试剂是乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·M·戈尔德曼，N·J·克拉克，R·E·赖茨，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：