【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种MicroRNA?29a通过KLF4促进结直肠癌远处转移的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)准备组织样本(1.1)收集标本收集结直肠癌(CRC)离体后的组织标本,立即经液氮速冻,并保存在?80℃冰箱;(1.2)病理学诊断每个标本都经组织病理学诊断;(2)?RNA抽提和实时定量逆转录PCR(3)?细胞培养和转染(3.1)人CRC细胞系HCT?116和LoVo分别维持在McCoy’s?5a和F12?K培养基中;(3.2)准备MiR?29a?mimics、anti?miR?29a以及KLF4小干扰RNA;(4)?荧光素酶试验?以人结直肠正常粘膜组织基因组DNA为模板,PCR扩增KLF4?3’UTR,构建荧光素酶报告基因质粒pGL3?3’UTR?WT;再以pGL3?3’UTR?WT为模板通过点突变试剂盒,构建突变型荧光素酶报告基因质粒pGL3?3’?UTR?Mut;(5)?蛋白免疫印迹细胞裂解采用SDS?PAGE上样缓冲液;等量的蛋白在10%?SDS?PAGE胶中进行电泳,并转移至醋酸纤维素膜上;经5%牛奶封闭后,醋酸纤维素膜与以下抗体4℃孵育过夜;Anti?KLF4,anti?GAP ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:崔龙,汤文涛,傅佶泓,朱云祥,刘云,王光辉,
申请(专利权)人:上海交通大学医学院附属新华医院,
类型:发明
国别省市:
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