【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙含量差异的鉴别，特别是涉及用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙含量差异的方法。
技术介绍
同位素示踪技术是加入与目标元素性质几乎完全相同的同位素，同位素与目标元素共同运行，通过同位素实现追踪目标元素或被标记物质的运行或变化的一种方法。同位素可以是放射性同位素，也可以是稳定同位素。放射性同位素作为示踪剂不仅灵敏度高，测量方法简便易行，而且具有能准确定量，准确定位及符合所研究对象的生理条件等特点。同位素示踪技术在生命科学中应用极其广泛，可用于考察某种元素在生命体中吸收代谢过程，可利用同位素示踪技术研究光合作用，可利用同位素标记核酸研究生物基因的功能等。此外，放射自显影可以在组织或细胞水平上捕获物质转移动态，而放射免疫测定法则是将同位素引入抗原抗体反应的一种方法，该法比荧光抗体法更灵敏，也更容易定量。同位素示踪技术现已成为研究生物现象不可缺少的方法。钙离子是细胞内的第二信使物质，Ca2+在植物耐热信号转导机制研究方面受到特别关注。研究表明，多种环境胁迫刺激都可能引起细胞内Ca2+的转移运输，说明钙参与了植物的...
【技术保护点】
一种利用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙差异的方法，其特征在于主要包括以下步骤：（1）油菜栽培：将普通油菜和转基因TR1油菜种植在含有MS培养基的营养土中，于光照15‑17小时/天，温度23‑25℃条件下培养45‑55天，生长至真叶7‑10片，分别取两种油菜叶片提取原生质；（2）原生质体提取：将上述培养的两种油菜叶片切成0.4‑0.6mm丝状分别置于酶解液中，在24‑26℃酶解8‑10h，酶解后的细胞悬浮液经100‑120目尼龙网过滤，所得滤液经离心分离除去上清液，所得沉淀加入WI原生质体养护液，经离心洗涤得到原生质体；（3）原生质体活性鉴定：将步骤（2）提取...
【技术特征摘要】
1.一种利用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙差异的方法，其特征在于主要包括以下步骤: (O油菜栽培:将普通油菜和转基因TRl油菜种植在含有MS培养基的营养土中，于光照15-17小时/天，温度23-25°C条件下培养45-55天，生长至真叶7_10片，分别取两种油菜叶片提取原生质； (2)原生质体提取:将上述培养的两种油菜叶片切成0.4-0.6mm丝状分别置于酶解液中，在24-26°C酶解8-10h，酶解后的细胞悬浮液经100-120目尼龙网过滤，所得滤液经离心分离除去上清液，所得沉淀加入WI原生质体养护液，经离心洗涤得到原生质体； (3)原生质体活性鉴定:将步骤(2)提取到的两种油菜的原生质体用荧光素酶FAD染色观察，选取镜检细胞存活率> 90%的原生质体进行吸收钙离子实验； (4)原生质体培养:将步骤(3)镜检符合要求的两种油菜的原生质体分别置于含45Ca示踪剂的WI原生质体养护液中培养If 13h ； (5)原生质体钙离子吸收量测定:将经步骤(4)培养得到的原生质体用浓度90^110mmol/L的EDTA洗涤液洗涤除去原生质体表面的钙，取0.1mL原生质体悬液经消解测量45Ca的计数，取0.1mL原生质体悬液用于原生质体数目计数，将剩下的原生质体悬液离心分离，取0.1mL上清液用于上清液计数，通过下式分别计算两种油菜的原生质体吸收钙离子量q以鉴别两种油菜原生质体吸收钙的差异:2.根据权利要求1所述的利用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙差异的方法，其特征在于，所述营养土中蛭石的重量含量为25 35%。3.根据权利要求2所述的利用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙差异的方法，其特征在于，所述含有MS培养基的营养土为用MS培养基溶液拌湿的营养土。4.根据权利要求1所述的利用45Ca鉴别转基因油菜和普通油菜原生质体吸收钙差异的...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨远友，刘宁，廖家莉，刘志斌，杨毅，杨吉军，唐军，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。