一种宫颈癌的筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种宫颈癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中SPARCL1表达水平的试剂。本发明专利技术还公开了检测血液中SPARCL1表达水平的试剂在制备宫颈癌筛查用试剂中的用途。本发明专利技术试剂盒通过检测SPARCL1的表达水平，能有效判断待检人群患宫颈癌的风险，可用于临床宫颈癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一种宫颈癌的筛查试剂盒
本专利技术涉及一种宫颈癌的筛查试剂盒。
技术介绍
宫颈癌是女性的第二大恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌，每年新增宫颈癌的病例数超过150万，死于宫颈癌的人数超过30万。宫颈癌是由致癌的人类乳头瘤病毒(HPV)持续感染引起的。虽然HPV感染是一个不可或缺的因素，但它不足以引起癌症。大多数急性HPV感染引起的低级别前体病变，超过90％的病例会在几个月后自发清除，只有小于10％的病例会最终进展为高级别病变或浸润性癌。宫颈上皮内瘤变是明确的宫颈癌前病变，并且在癌前病变到恶性肿瘤的演变过程中，各种癌基因和侵袭性相关基因的表达明显异常。目前，宫颈癌的具体发病机制和导致宫颈上皮内瘤变发展到宫颈癌的关键分子尚未阐明。因此，新型生物标志物的检测可能在宫颈癌早期诊断中具有重要的作用。SPARCL1(SPARCL1)，SPARCL1(secretedproteinacidicandrichincysteines-like1)最早是由Johnston等于1990年从鼠脑表达文库中分离提取出来的一种分泌型细胞外基质糖蛋白。1995年，Girard和Springer从人扁桃体淋巴组织中高内皮微静脉的内皮细胞中将SPARCL1克隆出来，从此人们对SPARCL1的研究愈加深入。SPARCL1是SPARC家族成员之一，又被称为Hevin、SPARC-like1、SC1、MAST9、RAGS-1、QR1和ECM2。可参与多种生理功能(如细胞增殖、肌肉分化等)，并通过调节内皮细胞的黏附作用来促进淋巴细胞转运。SPARCL1广泛表达于人类正常组织，特别是在肺、胎盘、骨骼肌、胰腺、心脏和大脑中，而肾中表达较低，肝则缺失，在人类生长发育过程中起到重要作用。现有研究还发现SPARCL1基因表达异常与消化系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、子宫肌瘤、乳腺癌及神经胶质瘤的发生、发展相关，并参与调节黏着斑等信号通路。未见SPARCL1与宫颈癌相关的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种创伤小、副作用小、便于使用的宫颈癌检测试剂盒。本专利技术宫颈癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中SPARCL1表达水平的试剂。其中，所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是ELISA检测用试剂。其中，所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是Western-blot检测方法用试剂。本专利技术还提供了检测血液中SPARCL1表达水平的试剂在制备宫颈癌筛查用试剂中的用途。其中，所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是ELISA检测用试剂。其中，所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是Western-blot检测方法用试剂。本专利技术试剂盒通过检测SPARCL1(SPARCL1)的表达水平，可以判断待检人群患宫颈癌的风险：若SPARCL1(SPARCL1)的表达水平低，则患宫颈癌的风险高，可用于临床宫颈癌的辅助诊断，本专利技术试剂盒仅仅只需采集待检人群的血液，就可以筛查其患宫颈癌的风险，创伤小、副作用小、使用方便，临床应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1SPARC1在宫颈癌组织样本和患者血清中表达水平。A.SPARCL1的表达与临床分期有关(P＝0.0332).B.SPARCL1的表达与肿瘤分级有关(P＝0.0379).C.随着宫颈癌的发展,SPARCL1的表达明显减少.D.与正常相比,宫颈癌血清中SPARCL1表达下调。具体实施方式实验材料：宫颈癌组织微阵列(CR602a和CR806)购买自BiomaxUS(MD，USA)。抗SPARCL1多克隆抗体获自ProteinTechGroup，Inc(中国武汉)。人类SPARCL1ELISA试剂盒(EME-H8276)购买自KITZOME(中国深圳)。所有其他试剂盒或试剂购买自碧云天生物技术有限公司(中国上海)。实施例1SPARCL1(SPARCL1)的表达水平与宫颈癌的关系一、实验方法1、样本本研究中收集的血清样本和进行的实验，由成都医学院第一附属医院伦理委员会根据指南标准批准。在第一次手术之前和在接受任何治疗之前的患者中收集血液。2、血液中SPARCL1(SPARCL1)表达水平的检测方法2.1血液分离抽取临床患者及健康对照血液，EDTA抗凝后离心(1200rpm，10min)，将上清吸取后进行第二次离心(3000rpm，15min)，吸取上清分装后-80度保存；2.2ELISA检测使用ELISA试剂盒(KITZOME，中国深圳)根据制造商的说明书测量血清中的SPARCL1水平并定量。每个血清样本分析三次。检测步骤：2.2.1加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔，标准孔加系列稀释度的标准品，空白孔加样品稀释液100ul，待测孔加待测样品；各孔加完后，给酶标板覆膜，37℃孵育60min。2.2.2洗板：弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2min，洗涤液350ul/孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体排干。2.2.3加待测抗体：立即每孔加入配好的检测抗体工作液100ul，37℃孵育60min。2.2.4洗板：弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2min，洗涤液350ul/孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体排干。2.2.5加底物读数：每孔加底物溶液90ul，酶标板上覆膜37℃避光孵育15min。每孔加终止液50ul，终止反应。立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。2.2.6浓度计算：根据标准孔OD值及相对应的已知浓度，制作标准曲线。根据标准曲线计算样品中SPARCL1的浓度。2.3结果统计至少进行三次独立实验。GraphPadPrism5(SanDiego，CA)单因素方差分析和双尾T检验用于比较各种处理的效果。数据显示为均数±标准误。P<0.05被认为具有统计学意义。3、血浆中SPARCL1(SPARCL1)的表达水平与宫颈癌的相关性检测结果如下表1和图1：表1血浆中SPARCL1(SPARCL1)与宫颈癌的相关性SPARCL1(SPARCL1)的表达平均水平健康对照8.294±1.159ng/ml宫颈癌患者3.651±0.581ng/ml经过统计学分析，二者的差异显著(P<0.05)。由表1和图1可以看出，与健康人群相比，宫颈癌患者的血液中SPARCL1表达水平明显升高，且差异显著(P<0.05)；由以上结果可以看出，与健康人群相比，宫颈癌患者的SPARCL1(SPARCL1)表达水平显著降低(P<0.05)，说明宫颈癌与血液中SPARCL1(SPARCL1)的表达水平呈负相关，血液中SPARCL1(SPARCL1)的低表达会显著提高患宫颈癌的可能性。因此，可以通过检测待检人群血液中SPARCL1(SPARCL1)的表达水平，将宫颈癌的易感人群筛查出来。实施例2本专利技术检测血液SPARCL1(SPARCL1)的试剂盒的组成及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种宫颈癌的筛查试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测血液中SPARCL1表达水平的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种宫颈癌的筛查试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测血液中SPARCL1表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的的筛查试剂盒，其特征在于：所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是ELISA检测用试剂。3.根据权利要求1所述的的筛查试剂盒，其特征在于：所述检测血液中SPARCL1表达水平的试剂是Western-bl...

【专利技术属性】
技术研发人员：许颖，吴东明，张涛，杨菁，
申请(专利权)人：成都医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：四川,51