本发明专利技术公开了一种唐古特白刺叶片再生植株方法，该方法包括以下步骤：选取白刺成年树优良品种的叶片为组织培养材料，表面灭菌后接入愈伤组织诱导培养基，待愈伤组织诱导出来以后建立悬浮培养体系进行愈伤组织的增殖，然后将悬浮培养后的小细胞团转入固体培养基上进行不定芽的诱导；不定芽诱导出来以后转入MS基本培养基上生长，待不定芽长到2～3cm时，转入诱导生根培养基培养，得生根试管苗。与现有技术中的白刺组培方法相比，本发明专利技术的白刺成年树叶片再生植株培养方法优势在于：有效解决了白刺优良成年树在组织培养条件下的植株再生问题，实现白刺稳定高效的组培体系，为加快白刺组培苗植株再生提供技术支撑。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及唐古特白刺成年树叶片再生植株技术，具体涉及一种唐古特白刺无性系离体植株再生培养方法。
技术介绍
白刺属在全世界范围内共有12种，而在我国内蒙、甘肃、青海、新疆、宁夏、辽宁等省区有齿叶白刺(N.roborowskii)、毛瓣白刺(N.praevisa)、泡果白刺(N.sphaerocarpa)、唐古特白刺(N.tangutorum)、西伯利亚白刺(N.sibirica)、盐生白刺(N.schoberi L.)和帕米尔白刺(N.pamirica)等7种。白刺属植物系第三纪.？遗植物,通常高0.5 2m，具有极强的抗干旱和耐盐碱能力，是荒漠戈壁地区植被生态系统的重要建群种之一，具有重要的生态、经济价值。白刺属耐高温干旱或重盐碱胁迫，抗风蚀沙埋、枝茎机械组织发达，近地面匍匐丛生，对多风环境具有良好的适应能力；萌生能力强，被沙土埋覆后能产生大量不定根，从而形成新的植株，形成白刺沙堆，可拦蓄和固定大量流沙。它们还是沙生植物中少有的药食两用的浆果类植物，其果实酸甜可口，富含各种氨基酸、维生素C、多种微量元素等各类生理活性物质，其中氨基酸、黄酮和糖总含量均高于沙棘，有非常好的开发利用前景。从其果实、叶片、幼枝、种子等提取的次生代谢物质(主要为黄酮类化合物)具有重要的药用价值，具有健脾胃、助消化和安神解表之功效，在食用、药用、保健等方面具有很大开发利用潜力。唐古特白刺 是适合在我国西北部沙漠地区干旱、盐碱环境条件下生长的重要树种，并且具有重要的经济价值。近年来随着荒漠化的治理改造的进行，良种种苗得到高度重视。关于白刺属植物的组织培养进行过初步的研究，本专利提供的方法适合唐古特白刺、泡果白刺等白刺属植物成年树的快速高效繁殖。
技术实现思路
专利技术目的:针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种唐古特白刺无性系离体植株再生培养方法，以实现提供周期短、效率高、成本低的唐古特白刺苗木的生产技术。技术方案:为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为: ，包括以下步骤: (1)选取白刺优良成年树的当年生新枝条的叶片为组织培养材料，经清洗、消毒后接入愈伤组织诱导培养基培养，使高度分化的叶片脱分化为愈伤组织，其中，愈伤组织诱导培养基配方为 1/2MS + 2，4-D 2mg*r1 + BA 0.2mg*r1 + ΝΑΑ0.2mg*r1+ 水解酪蛋白(CH) Ig.L—1+蔗糖3%，培养条件为23 °C，暗培养，培养材料每25天继代培养一次； (2)将愈伤组织接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为3/4MS +6ΒΑ0.3mg.L 1 + NAA0.02mg.L 1 +鹿糖 3% ；(3)待不定芽长到2-3cm时，转入生根培养基，生根培养基为1/2MS，植物生长调节剂为IBA0.5 其中，步骤(I)操作完成后，直接进行以下操作，然后直接进行步骤(3 )操作 O当愈伤组织鲜重达到2g时，转入液体培养基中进行悬浮培养，将愈伤组织进行增殖并分散成小细胞团或单细胞；液体悬浮培养基以1/2MS为基本培养基，在其中添加植物生长调节剂和3%蔗糖；植物生长调节剂为2，4-D 2mg*r\ BA 0.2mg*r1 ;液体悬浮培养基中添加水解酪蛋白I g.!/1，天冬酰胺(ASN) 200 mg.!/1 ;液体培养条件为摇床转速90rpm，23 °C，暗培养，液体材料每7天继代培养一次； 2)将步骤I)的悬浮培养细胞转入不定芽诱导培养基，悬浮培养的单细胞或者小细胞团在不定芽诱导培养基上经过I个月的生长会产生不定芽；不定芽诱导培养基为MS+KTImg-Γ1 + BA Img-Γ1 + NAA0.2mg*r1+蔗糖3%，培养条件为25°C，16h光培养，培养材料每25天继代培养一次；经过1-2次继代培养后，培养细胞再分化为不定芽；不定芽生长在MS基本培养基上进行，添加30 g-Γ1蔗糖。所述新枝条的叶片的清洗、消毒方法为:经流水冲洗2h，70%乙醇处理lmin，0.1%HgCl处理IOmin,即可。有益效果:与现有技术相比，本专利技术的唐古特白刺无性系离体植株再生培养方法，有效解决了白刺优良成年树在组织培养条件下的植株再生问题，实现白刺稳定高效的组培体系，提供大量唐古特白刺种植材料，缓解社会对唐古特白刺苗木的紧迫需求，为加快白刺组培苗植株再生提供技术支撑。是一种周期短、效率高、成本低的良种苗木的生产技术，具有很好的实用性。附图说明图1由唐古 特白刺叶片诱导的愈伤组织 图2从愈伤组织上产生不定芽； 图3不定芽的生长； 图4唐古特白刺的生根图。具体实施例方式下面结合具体实施例最本专利技术做进一步的说明。实施例1 ，包括以下步骤: (I)选取唐古特白刺优良成年树的当年生新枝条的叶片为组织培养材料，经流水冲洗2h，70%乙醇处理lmin，0.1% HgCl处理IOmin后接入愈伤组织诱导培养基培养，使高度分化的叶片脱分化为愈伤组织。其中，愈伤组织诱导培养基配方为1/2MS + 2，4-D 2mg*r1 + BA0.2mg*r1 + NAA0.2mg*r1+水解酪蛋白(CH) I g.L—1+蔗糖3%。培养条件为23°C，暗培养，培养材料每25天继代培养一次，一般培养10天后叶片脱分化形成愈伤组织，如图1所示。(2)继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为3/4MS + 6BA0.3mg.L—1 +NAA0.02mg.L 1 +鹿糖 3% ；(4)不定芽生长在MS基本培养基上进行，添加30g-Γ1蔗糖，16h光照/8h暗培养，如图3所示； (5)待不定芽长到2-3cm时，转入生根培养基，生根培养基为1/2MS，添加植物生长调节齐[J，为IBA0.5^2mg-L^10生根培养在光照条件下进行(16h光照/8h暗培养)，培养20天后有健康根系长出，唐古特白刺的生根图，如图4所示。生根后，进行常规培养，即可实现植株的再生和培育成苗。实施例2 ，包括以下步骤: (I)选取唐古特白刺优良成年树的当年生新枝条的叶片为组织培养材料，经流水冲洗2h，70%乙醇处理lmin，0.1% HgCl处理IOmin后接入愈伤组织诱导培养基培养，使高度分化的叶片脱分化为愈伤组织。其中，愈伤组织诱导培养基配方为1/2MS + 2，4-D 2mg*r1 +BA 0.2mg*r1 + NAA0.2mg*r1+水解酪蛋白(CH) I g.L—1+蔗糖3%。培养条件为23°C，暗培养，培养材料每25天继代培养一次，如图1所示。(2)步骤(I)的愈伤组织鲜重达到2g时，转入液体培养基中进行悬浮培养，将愈伤组织进行增殖并分散成小细胞团或单细胞；液体悬浮培养基以1/2MS为基本培养基，在其中添加植物生长调节剂和3%蔗糖；植物生长调节剂为2，4-D 2mg*r\ BA 0.2mg*r1 ;液体悬浮培养基中添加水解酪蛋白I g.!/1，天冬酰胺(ASN)200 mg.!/1 ;液体培养条件为摇床转速90rpm，23°C，暗培养，液体材料每7天继代培养一次。( 3 )步骤(2 )的悬浮培养细胞转入不定芽诱导培养基，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种唐古特白刺无性系离体生根培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选取白刺优良成年树的当年生新枝条的叶片为组织培养材料，经清洗、消毒后接入愈伤组织诱导培养基培养，使高度分化的叶片脱分化为愈伤组织，其中，愈伤组织诱导培养基配方为1/2MS＋2,4?D?2mg?L?1＋BA?0.2mg?L?1＋NAA0.2mg?L?1+水解酪蛋白（CH）1?g·L?1+蔗糖3%，培养条件为23℃，暗培养，培养材料每25天继代培养一次；（2）将愈伤组织接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；其中，继代增殖培养基配方为3/4MS＋6BA0.3mg·L?1＋NAA0.02mg·L?1＋蔗糖3%；（3）待不定芽长到2?3cm时，转入生根培养基，生根培养基为1/2MS，植物生长调节剂为IBA0.5~2mg?L?1。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：成铁龙，张景波，杨秀艳，史胜青，江泽平，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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