美罗培南中杂质的检测方法技术

本发明专利技术提供了美罗培南中杂质的检测方法，包括如下操作步骤：（1）取美罗培南样品，加水溶解稀释为样品溶液；（2）取样品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，即可；其中，色谱条件如下：色谱柱：以刚性球形的硅胶化学键合亲水化合物为填料；流动相：磷酸盐缓冲液，其pH=6.00±0.05，等度洗脱；紫外检测波长：220±2nm。本发明专利技术提供的检测方法，能够将美罗培南中的各杂质有效地分离，且分离度良好，从而能够更准确的计算出不同杂质的含量，为美罗培南聚合物杂质的进一步监测、研究提供了可能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种对。
技术介绍
美罗培南，为人工合成的广谱碳青霉烯类抗生素，通过抑制细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用。美罗培南对大多数β_内酰胺酶的水解作用具有较强的稳定性。其制剂为注射用美罗培南，1994年在意大利上市，1999年在中国上市，为国家医保乙类用药，用于治疗肺炎、妇科感染、尿路感染、脑膜炎、皮肤软组织感染、败血症等炎症。使用该制剂有时会出现过敏反应，而研究发现，过敏反应与注射用美罗培南中的美罗培南聚合物杂质有关。因此，为减少出现过敏反应，需减少注射用美罗培南中美罗培南聚合物的量，同时，也需要对产品中美罗培南聚合物含量进行监测。目前，多国药典均是采用十八烷基键合硅胶为色谱柱，对美罗培南开环化合物含量进行监控，并未能有效检测美罗培南聚合物等杂质。有研究人员发现，以葡聚糖凝胶色谱柱对美罗培南聚合物进行检测，实现了对聚合物的分离分析(王喜军等，凝胶色谱法测定美罗培南中的聚合物，中国当代医药，2012年19卷11期)。然而，专利技术人实验发现，现有凝胶色谱法无法将多种聚合物杂质分离开，阻碍了对美罗培南聚合物杂质的进一步监测、研究。专利技术人推论，聚合物杂质分离度不佳的原因可能是，美罗培南聚合物多为二聚物，美罗培南杂质B为二聚物的同分异构体，因此，现有方法不能很好地将美罗培南聚合物与杂质B有效分离。
技术实现思路
基于上述 问题，本专利技术的目的在于提供一种美罗培南中杂质的分析方法，能够更为准确的监测多种美罗培南杂质的含量。本专利技术提供了，包括如下操作步骤:( I)取美罗培南样品，加水溶解稀释为样品溶液；(2)取样品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，即可；其中，色谱条件如下:色谱柱:以刚性球形的硅胶化学键合亲水化合物为填料的凝胶色谱柱；流动相:磷酸盐缓冲液，其ρΗ=6.00±0.05，等度洗脱；紫外检测波长:220±2nm。本专利技术实验中发现，缓冲液pH为6.00时，杂质分离度最佳，各杂质间不重叠，可有效检测各个杂质的限量。进一步地，步骤(2)中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.02 0.03mol/Lo更进一步地，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液、磷酸氢二钠缓冲液或磷酸氢二钾缓冲液，优选磷酸二氢钠缓冲液。进一步地,步骤(2)中，所述色谱柱的型号为5 μ m, 7.8X 300mm。进一步地所述色谱柱为TSK-GEL-G2000SWXL。进一步地,步骤(2)中，流动相的流速为0.6 1.0ml/min ;色谱柱的柱温为20 30。。。优选地,步骤(2)中,流动相的流速为0.6ml/min。该流速条件下,各杂质之间、杂质与美罗培南主峰之间的分离度最佳，更便于对峰面积的积分计算。进一步地，步骤(I)中，所述美罗培南为注射用美罗培南。本专利技术提供的检测方法，能够将美罗培南中的各杂质有效地分离，且分离度良好，从而能够更准确的计算出不同杂质的含量，为美罗培南聚合物杂质的进一步监测、研究提供了可能。附图说明图1为实施例1条件下的色谱图:a、b、c为美罗培南杂质，d为美罗培南。图2为实施例2条件下的色谱图。 图3为实施例3条件下的色谱图。图4为实施例4条件下的色谱图。图5为实施例5条件下的色谱图。图6为对比例I条件下的色谱图。图7为对比例2条件下的色谱图。具体实施例方式下面结合具体实施例和对比例对本专利技术作进一步的详细描述。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本
技术实现思路
所实现的技术均属于本专利技术的范围。试验器材及试剂:试验仪器:Alltech200HPLC(奥泰，pump:Alltech426HPLC pump ；Det:LinearUVIS2000);色谱柱:TSK-GEL-G2000SWXL, 5 μ m, 7.8X300mm (1.D.);检测波长:220nm (误差范围为2nm，即检测波长在218 222nm，均落入本专利技术保护范围)；柱温:20 30°C ;进样体积:20ul ;将色谱图中美罗培南杂质的峰面积与峰总面积之比得出美罗培南中各杂质的相对含量。实施例1本专利技术检测方法流动相:0.025mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00)；流速:0.8ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.65mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，结果如图1，美罗培南样品中分离出a、b、c三个杂质，其中，a、b的总含量为0.43%。实施例2本专利技术检测方法流动相:0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00);流速:0.8ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.45mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，结果如图2，美罗培南样品中分离出a、b、c三个杂质，其中，a、b的总含量为0.55%。实施例3本专利技术检测方法流动相:0.03mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00);流速:0.8ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.67mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，结果如图3，美罗培南样品中分离出a、b、c三个杂质，其中，a、b的总含量为0.57%。实施例4本专利技术检测方法流动相:0.025mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00)；流速:0.6ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.43mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，结果如图4，美罗培南样品中分离出a、b、c三个杂质，其中，a、b的总含量为0.33%。实施例5本专利技术检测方法流动相:0.0 25mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00±0.05);流速:1.0ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.52mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，结果如图5，美罗培南样品中分离出a、b、c三个杂质，其中，a、b的总含量为0.25%。实施例6本专利技术检测方法流动相:0.025mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=6.00±0.05);流速:1.0ml/min。测定步骤:称取注射用美罗培南样品13.70mg，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，即可。对比例I不同pH条件下的检测方法流动相:0.025mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L氢氧化钠溶液调ρΗ=5.80)；流速:0.8ml/min。测定步骤:取注射用美罗培南样品13mg，精密成定，置于IOml容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱，结果如图6，仅分离出2个杂质，表明该色谱条件下分离度不佳。对比例2不同pH条件下的检测方法流动相:0.025mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用0.5mol/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
美罗培南中杂质的检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：（1）取美罗培南样品，加水溶解稀释为样品溶液；（2）取样品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，即可；其中，色谱条件如下：色谱柱：以刚性球形的硅胶化学键合亲水化合物为填料的凝胶色谱柱；流动相：磷酸盐缓冲液，其pH=6.00±0.05，等度洗脱；紫外检测波长：220±2nm。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姚志昂，曹晓红，彭捷，冯冠荣，卢福，赵忠琼，王利春，沈鑫，梁隆，程志鹏，
申请(专利权)人：四川科伦药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：