本发明专利技术公开了一种EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子的制备方法；将荧光染料和氨基化合物在有机溶剂中避光条件下过夜反应，得到荧光染料混合液；介孔模板剂加入到稀的强碱溶液中搅拌，加热至一定温度后，滴加硅源和荧光染料混合液反应，滴加有机溶剂，静置、离心并洗涤，制备复合荧光介孔硅纳米粒子；取纳米粒子与适量的氨基化合物反应，过滤并数次透析，制备出表面氨基功能化的复合荧光的介孔硅纳米粒子；将其与EX527溶液混合振荡，离心并洗涤，得到氨基修饰的EX527复合介孔硅纳米粒子；加入叶酸，活化羧基并振荡过夜，透析离心后，得到EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子。本发明专利技术粒径小，单分散性与稳定性好，载药量高，荧光性能稳定，安全性高，良好的主动靶向性能等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域中的介孔硅纳米粒子载药的制备方法，具体涉及一种可示踪的携载抗肿瘤药物EX527的多功能介孔硅纳米粒子作为荧光探针及药物传输工具的制备方法。
技术介绍
介孔材料具有高比表面积、大孔道容量，在多相催化、传感器、吸附与分离等众多领域具有潜在的应用价值，已成为一个新兴的蓬勃发展的跨学科研究领域。介孔二氧化硅纳米粒子(MSNs)集中了纳米材料和多孔材料的多种性能于一体，并且具有毒副作用小、生物相容性好和易于修饰等优点，适于用作杂化发光材料和荧光化学传感材料的基底。单分散的介孔二氧化硅纳米粒子还可以作为其它纳米材料的硬模板，并且其内部孔道和外部表面都可以作为模板反应的场所，是制备核壳材料的优良载体。其孔径在2.0 50.0nm之间由合成条件任意调节等结构特征，从而赋予其许多独特的性能，该纳米尺度所固有的独特性质，在癌症的无创诊断与治疗方面起到了积极重要的作用。自1992Mobil公司通过液晶做模板合成了MCM-S系列以来，由于该类材料具有有序的孔道结构，较大的比表面积，窄且可调节的孔径分布，较好的生物相容性和无毒害等特征，引起了研究者极大的兴趣。不同孔道结构、形貌的MCM-S材料被相继合成，而且被广泛地应用于催化、吸附、分离以及医药控释等领域.为了能更有效地将这类材料应用于药物的可控释放，研究者对孔道以及纳米微球表面的修饰技术也开展了深入的研究，比如将孔道表面结合不同官能团的功能修饰剂。药物分子可以通过物理吸附或者化学吸附，或者直接以药物作为模板，原位合成介孔材料，通过改变外界环境达到控释。最近研究者也采用在药物被吸附后，以表面修饰的具有特殊要求的纳米微粒进行孔道封锁，达到药物控释。 截止目前，使用MCM-S系列材料作为载体时，明显存在着介孔载体可实际利用的有效空间较小的问题，吸附药物分子的有效部位只能是在孔道的端口部位和纳米微粒表面，而孔道内大部分的空间贮藏药物的能力则受孔径影响较大，故通常制备的孔材料在缓释方面效果并不理想。针对该问题，Shi等人利用混合模板，即以CTAB为主模板齐U，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为副模板，通过PVP相互团聚，在外层形成有序多孔壳层，通过煅烧去除有机物，合成出空腔介孔二氧化娃纳米微粒(HNS)。Park等人利用IgepalC0-520 ( α - (4_壬基苯基)-ω -轻基-聚(氧化_1，2_联乙烧))为表面修饰剂，通过微乳液法合成二氧化硅后，碱液腐蚀得到空腔材料。这些空腔材料大大增加了载药能力。近些年来，介孔二氧化硅纳米粒子作为药物传递系统的应用已经成为纳米医药领域研究的热点之一。这主要是由于其具有介孔结构、无毒的本质、大的表面积和孔体积、良好的稳定性及灵活多样的表面修饰方法等特点。此外，二氧化硅干凝胶和气凝胶可以是块体、片状体甚至是薄膜，这些形态对纳米复合材料的实际应用具有非常重要意义。通过组装、包覆、掺杂等方式，将金颗粒、磁性粒子、荧光分子等功能材料与二氧化硅基质复合，构筑出具有多功能特性的纳米输送系统，可同时将荧光成像、磁共振成像、特异性标记等技术连用，以实现对癌症的多模式成像、同步诊断与治疗。6-氯-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-甲酰胺(简称:EX527)是一种新型的针对STRl和STR2的小分子抗肿瘤药物。EX527通过抑制SIRTl的去乙酰化酶活性可有效抑制特异性小分子SIRTl的活性，IC50为38nM，这种作用存在浓度依赖性，抑制SIRT2和SIRT3时，效果低很多，IC50分别为19.6 μ M和48.7 μ Μ, ΕΧ527浓度高达100 μ M时也不抑制SIRT4-7和Ι/ΙΙ类HDAC的活性。ΕΧ527按10 μ g剂量作用于小鼠，可通过抑制下丘脑SIRTl活性而提高下丘脑乙酰化P53水平，当I μ M的ΕΧ527单独作用于NC1-H460细胞，不能检测Ρ53在lysine382位点的乙酰化作用，然而当EX527作用于受遗传毒性试剂Etoposide、AdriamyciruHydroxyurea和H202影响的NC1-H460细胞，人类乳腺上皮细胞U-20S或MCF-7细胞时，可显著提高乙酰化P53的量，但是EX527在p53控制的基因表达、细胞存活、细胞增殖方面没有检测效果。EX527在0.1%血清而不是10%血清中处理7天，作用于HCT116细胞，显著提高细胞数，提高达90%，说明在无细胞因子的情况下SirTl是细胞增殖的显著调节器。EX527作用于INS-1E细胞可废除白藜芦醇对葡萄糖的反应的影响，且抑制白藜芦醇诱导的Glut2、葡萄糖激酶、Pdx-1和Tfam的上调，这是由于EX527和白藜芦醇作用于SIRTl脱乙酰基酶活性的作用是相反的。近几年在国际顶级杂志中已有EX527的相关文章发表，唯一利用的是DMSO对其进行溶解，但是这样容易造成血糖水平提高从而限制它临床的进一步研究。由于EX527水溶性差等问题，导致其在体抗肿瘤效果非常差，因此对其给药方式的改变一直是其研究的一个重要方向。目前，大部分专利都是涉及关于介孔硅分子筛的制备及应用。如:中国专利技术专利“有序介孔硅胶整体 柱及其制法和用途”(CN1456387)公开了一种由溶胶-凝胶(sol-gel)技术制得整体柱材料的方法；中国专利技术专利“双介孔硅铝复合分子筛及其制备方法”(CN1304875)公开了采用溶胶一凝胶途径在温和的反应条件下合成具有催化活性及双介孔分布特征的硅铝复合分子筛的方法；中国专利技术专利“一种介孔硅磷酸铝分子筛及其制备”(CN1362365)公开了一种采用十六烷基三甲基氯化铵(CTMAC)为主要模板剂，低温水热合成的制备方法；中国专利文献“一种介孔硅树脂及其制备方法”(CN102417605A)公开了采用甲基苯基硅氧烷树脂(MPS)为树脂基体，嵌段共聚物聚二甲基硅氧烷-聚氧乙烯(PDMS-PEO)为模板剂，以四氢呋喃(THF)为溶剂，通过溶剂挥发诱导自组装方法制得介孔硅树脂的制备方法。而关于一种EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子的相关专利还没有类似报道。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子的制备方法，其表面经过氨基的修饰，作为荧光探针及药物传输工具在生物医学领域具有广阔的应用前景。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下:一种EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:(I)称取2mg 20g的罗丹明或异硫氰酸荧光素，并与与IOul IOOOul的氨丙基三乙氧基硅烷在有机溶剂中避光过夜反应，得到罗丹明或异硫氰酸荧光素-氨丙基三乙氧基娃烧；(2)将0.1g IOOg的溴烷胺溶解在Iml IOOOml稀的强碱溶液中，水浴加热，并向混合液中滴加0.1ml IOml的正娃酸乙酯和IOul IOOOul的罗丹明或异硫氰酸突光素_氨丙基二乙氧基娃烧;(3)待混合液反应10 60min，保持温度不变，在磁力搅拌条件下，滴加乙酸乙酯，反应5 50min,静置10 90min后,进行离心、洗漆并回流,得到复合突光介孔娃纳米粒子;(4)称取0.2mg 200mg复合突光介孔娃纳米粒子分散在60ml 600ml的有机溶剂中，回流30 300min，加入0.1ml IOOml的氨丙本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种EX527靶向多功能介孔硅纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（1）称取2mg～20g的罗丹明或异硫氰酸荧光素与10ul～1000ul的氨丙基三乙氧基硅烷在有机溶剂中避光过夜反应，得到罗丹明或异硫氰酸荧光素?氨丙基三乙氧基硅烷;（2）将0.1g～100g的溴烷胺溶解在1ml～1000ml稀的强碱溶液中，水浴加热,并向混合液中滴加0.1ml～10ml的正硅酸乙酯和10ul～1000ul的罗丹明或异硫氰酸荧光素?氨丙基三乙氧基硅烷；（3）待混合液反应10～60min，保持温度不变，在磁力搅拌条件下，滴加乙酸乙酯，反应5～50min，静置10～90min后，进行离心、洗涤并回流，得到复合荧光介孔硅纳米粒子；（4）称取0.2mg～200mg复合荧光介孔硅纳米粒子分散在60ml～600ml的有机溶剂中,回流30～300min，加入0.1ml～100ml的氨丙基三乙氧基硅烷，进行离心、洗涤，制备出表面氨基功能化的复合荧光介孔硅纳米粒子；（5）将所述介孔硅纳米粒子与10ml～1000ml的EX527水溶液混合，振荡、离心并洗涤，得到EX527靶向介孔硅纳米粒子；（6）取0.1mg～100mg上述一种EX527靶向介孔硅纳米粒子，加入0.1～100ml的叶酸，活化羧基并振荡过夜，透析离心后，即得到EX527靶向介孔硅纳米粒子。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：詹勇华，韩青林，孙玉林，梁继民，田捷，
申请(专利权)人：西安电子科技大学，
类型：发明
国别省市：
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