3-咪唑基酪氨酸翻译系统及其应用技术方案

本发明专利技术涉及氨酰基-tRNA合成酶突变体，其含有的氨基酸序列选自由SEQ?ID?NO：2所示氨基酸和它们的保守性变体构成的组。本发明专利技术提供利用正交tRNA、正交氨酰基-tRNA合成酶和它们的配对将3-咪唑基酪氨酸(imiTyr)定点特异插入目标蛋白质的3-咪唑基酪氨酸翻译系统，和利用所述翻译系统在目标蛋白质中定点特异插入3-咪唑基酪氨酸的方法。所述3-咪唑基酪氨酸翻译系统包含：(i)3-咪唑基酪氨酸；(ii)正交氨酰基-tRNA合成酶；(iii)正交tRNA，其中所述正交氨酰基-tRNA合成酶用所述3-咪唑基酪氨酸优先氨酰化所述正交tRNA；和(iv)编码目标蛋白质的核酸，其中所述核酸含有所述正交tRNA特异性识别的至少一个选择密码子。本发明专利技术还涉及通过在肌红蛋白(Myoglobin，Mb)中定点特异插入3-咪唑基酪氨酸使其具有氧化酶活性的方法及其应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化学领域。具体地，本专利技术提供氨酰基-tRNA合成酶突变体，其含有的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:2所示氨基酸和它们的保守性变体构成的组。本专利技术还涉及一种3-咪唑基酪氨酸((S)-2-氨基-3-(4-羟基-3-(1H-咪唑-1-基)苯基)丙酸，简写为imiTyr)翻译系统。更具体地，本专利技术涉及利用正交tRNA、正交氨酰基-tRNA合成酶和它们的配对将3-咪唑基酪氨酸定点特异插入目标蛋白质的3-咪唑基酪氨酸翻译系统，和利用所述翻译系统在目标蛋白质中定点特异插入3-咪唑基酪氨酸的方法。本专利技术还涉及用这种翻译系统和这种方法产生的含有3-咪唑基酪氨酸的突变蛋白质，例如，含有3-咪唑基酪氨酸的肌红蛋白突变体，以及含有3-咪唑基酪氨酸的突变蛋白质的应用。
技术介绍
蛋白质是所有生命体及其生命活动的主要物质基础。在整个蛋白中，约有三分之一的蛋白都是一些含金属的蛋白，称为金属蛋白(Metalloprotein)或金属酶(Metalloenzyme)。血红素蛋白(Hemoproteins)就是其中一大类含有原卩卜啉IX(血红素，heme)作为辅基的金属蛋白，在生本文档来自技高网...

【技术保护点】
正交氨酰基?tRNA合成酶，其含有的氨基酸序列选自由SEQ?ID?NO：2所示氨基酸和它们的保守性变体构成的组。

【技术特征摘要】
1.正交氨酰基-tRNA合成酶，其含有的氨基酸序列选自由SEQID NO:2所示氨基酸和它们的保守性变体构成的组。2.—种3-咪唑基酪氨酸翻译系统，所述系统包含: (i)3-咪唑基酪氨酸； (ii)权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶； (iii)正交tRNA，其包含SEQID NO:1所示的多核苷酸序列；其中所述正交氨酰基-tRNA合成酶用所述3-咪唑基酪氨酸优先氨酰化所述正交tRNA ;和 (iv)编码目标蛋白质的核酸，其中所述核酸含有所述正交tRNA特异性识别的至少一个选择密码子。3.如权利要求2所述的翻译系统，其特征在于，所述正交tRNA是琥珀抑制型tRNA，并且所述选择密码子是琥珀密码子。4.如权利要求2所述的翻译系统，其还包含编码正交氨酰基-tRNA合成酶的核苷酸序列。5.一种宿主细胞，其包含所述正交tRNA序列和编码所述正交氨酰基-tRNA合成酶的核苷酸序列。6.如权利要求5所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真细菌细胞，优选大肠杆菌细胞。7.—种产生在至少一个所选位置定点特异插入3-咪唑基酪氨酸的突变蛋白质的方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供权利要求2所述的3-咪唑基酪氨酸翻译系统，该系统包含: (i)3-咪唑基酪氨酸； (ii)权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶； (iii)正交tRNA，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王江云，刘晓红，胡诚，江欢欢，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：